尖锐湿疣患者血清白介素10水平及其与白介素2关系的研究
【摘要】 目的：为了研究白介素(IL)10在尖锐湿疣(CA)发病机制中的作用及其与IL?2的关系。方法：我们采用双抗体夹心ELISA技术检测24例CA患者血清IL?10水平，其中19例同时作IL?2水平测定。结果：发现CA患者血清IL?10水平比正常人显著增高(P＜0．05)，IL?2水平降低(P＜0．05)；IL?10与IL?2间呈负相关性(r=-0．894，P<0．001)，说明IL?10对IL?2产生有明显的抑制作用。结论：本实验证明，CA患者存在着细胞因子产生失衡所引起的一系列细胞免疫反应抑制效应，在CA发病机制中起着重要作用。
【关键词】 尖锐湿疣；白介素10；白介素2
Study on the Serum Level of Interleukin10 and Its Relationship with Interleukin 2 in Patients with Condyloma Acuminatum
Abstract:Objetive In order to study the role of interleukin(IL)10 in pathogenesis of condylona acumina?tum(CA) and relationship between IL 10 and IL 2. MethodsWe used double antibody sandwich ELISA for the quantitative determination of serum IL 10 level in 24 patients with CA．Among them，serum IL 2 level in 19 patients was also measured simultaneously．Results The results showed the serum IL 10 level was signify?cantly(P<0．05) higher in CA patients than that of controls，and the serum IL 2 level was strikingly (P<0．05) lower in the patients．The serum IL10 level was correlated in?versely with the serum IL2 level (r=-0．894，P＜0．001)．These results indicate that IL 10 specifically inhibits IL 2 production．Conclusion The experiment demonstrates that there is imbalance of cytokine production in the patients with CA which results in inhibitory effects on a series of cell?immune reponses，which may play an important role in the patho?gensis of CA.
Key words:Condyloma acuminatum;Interleukin 10;;Interleukin 2
以往研究发现尖锐湿疣(CA)患者血清白介素(IL)2水平低下，使其诱生杀伤(NK)细胞活性功能降低，导致溶解和破坏病毒感染靶细胞能力下降而造成CA的发病。近年发现的IL?10是一种细胞因子合成抑制因子，它能抑Thl细胞产生IL?2而达到对其水平的调节作用。此外，IL?10还抑制单核、巨噬细胞等抗原递呈细胞的功能。因此，为进一步了解IL?10在CA发病机制中的作用及其与IL?2的关系，我们用美国新研制的人IL?10 ELISA试剂盒检测了CA患者血清IL?10水平，现将结果报道如下。
1 资料和方法
1．1 临床资料 根据我国卫生部防疫司1991年制订的CA诊断标准确诊的24例CA患者。男17例，女7例；年龄22岁～37岁，平均年龄27．5岁；病期1周～3 a，平均病期0．6 a，绝大多数患者有非婚性接触史或配偶感染者。在本组病例中有19例同时作了血清IL?2水平检测。正常人IL?10对照23例，男14例，女9例；年龄19岁～42岁，平均年龄26．0岁；IL?2对照为35例，男21例，女14例；年龄18岁～43岁，平均年龄24．4岁。
1．2 方法
1．2.1 血清IL?10检测 Predicta人IL?10 ELISA试剂盒。采用双抗体夹心ELISA法。首先将标准Ri 110稀释成浓度为512 pg／ml、256 pg／ml、64 pg／ml、16 pg／ml、8 pg／ml、0 pg／ml。待检血清不稀释，将不同浓度Ri 110及血清样品分别加入已用鼠抗人IL?10单抗包被微孔板内，均设置双孔，每孔100 μl。用塑料粘纸封住微孔板，置WZ?2A微量震荡器上，室温(18 ℃～24 ℃)震荡(方法下同)1 h，用含0．05％proClin 300 PBS洗涤3次，加辣根过氧化酶标记链霉亲和素100 μl，1 h，洗涤3次，加TMB底物溶液100 μl，15 min，最后加终止液(<2 N混合酸)100 μl．以波长450 nm测定A值(Humareader，HumanCorp．Ger?many)，用直线回归分析，求出标准曲线，出样品含量(pg／ml)。
1．2．2 血清IL?2检测 人IL?2 ELISA试剂盒。采用多抗体夹心ELISA法。将标准品rIL?2稀释为4 050 pg／ml、1 350 pg／ml、450 pg／ml、150 pg／ml、0 pg／ml。待检血清作1：3稀释。加入已经鼠抗人IL?2单抗包被的微孔板内，100 μl/孔，37 ℃ 1 h，PBS洗液洗涤5次，加1∶25稀释的抗IL?2多克隆抗体100 μl，37 ℃ 1 h，洗涤5次，加过氧化氢TMB底物溶液100 μl，室温3 min，最后加1 mol／L H2SO4 100 μl终止反应，以波长。
1．2．3 统计 采用t检验。以直线相关法分析血清IL?10与IL?2含量(pg／ml)方法同前。
2 结果
2．1 CA患者血清IL?10和IL?2水平 实验结果详见表1。CA患者血清IL?10水平显著增高，IL?2水平降低．血清IL?10水平变化范围在CA患者中为0 pg／ml～598．2 pg／ml，对照为0 pg／ml～127．3 pg／ml。
2．2 血清IL?10与IL?2的关系 19例CA患者同步检测血清IL?10和IL?2水平．两种细胞因子间呈负相关性R=-0．894(t1=7．734，P<0．001)。
表1 尖锐湿疣患者血清IL?10与IL?2水平检测结果 略
3 讨论
1989年，美国Dnax研究所Fiorentino等发现Th2细胞除能分泌IL?4、IL?5、IL?6、IL?9外，还能产生一种细胞因子合成抑制因子，即以后命名为IL?10，它能有效地抑Th1细胞株的一系列后期合成的细胞因子(如IL?2、IFN?r、TNF?β等)在mRNA水平的合成。至此，有关Th1与Th2细胞间的交互调节直至整个细胞因子间的调节机制问题的研究又进入了一个划时代的阶段。有关IL?10与在抗病毒免疫中起重要作用的NK细胞和淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)的关系，研究发现IL?10既不抑制由IL?2所诱导的外周血单核细胞及新的NK细胞增殖，又不抑制IL?2诱生NK细胞活性产生，说明IL?10对NK或细胞活性产生无直接影响，而是通过抑制IL?2产生来达到其免疫抑制的目的。我们的实验结果发现24例CA患者血清IL?10水平显著高于正常人(P<0．05)，IL?2水平降低，这两种细胞因子间有良好的负相关性(P<0．001)，表明高水平IL?10抑制IL?2合成，使一系列由IL?2所介导的生物学效应降低，其中主要包括诱生NK和LAK细胞活性功能下降，因而削弱了抗病毒免疫作用。此外，由于IL?10抑制抗原递呈细胞功能，使抗原特异性细胞增殖明显减少，从而更减弱了细胞介导免疫反应。IL?10对IL?2产生抑制效应，其机制可能是：通过激活的T细胞直接抑制IL?2的产生；抑制抗原递呈细胞功能；诱导一种目前尚未知的次级因子，改变细胞内信号的传导途径而选择抑制有关细胞因子mRNA的合成。本研究证明，CA患者存在着因Th1与Th2细胞间的交互异常调节所致的有关细胞因子产生失衡，造成IL?10过量合成与分泌而引起一系列细胞免疫反应，抑制效应在CA发病机制中起着重要作用。美国Genzyme公司在1994年新研制的人IL?10 ELISA试剂盒敏感性很高，它可检出pg／ml或重组人IL?10。使用该试剂盒整个检测过程仅需3 h左右，具有敏感、特异、快速、方便及结果可靠等特点。
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