输卵管妊娠中整合素β3及细胞基质成分层粘连蛋白及纤粘连蛋白表达的研究

　　　　　　　　　作者：侯玉兰，王绍娟，郭端英

【摘要】  目的：探讨整合素β3、层粘连蛋白及纤粘连蛋白在输卵管妊娠发生中起到的作用。方法：采用流式细胞定量分析技术检测输卵管妊娠患者输卵管黏膜上皮、宫内膜及正常输卵管黏膜上皮、正常宫内早孕宫蜕膜组织中整合素β3、层粘连蛋白及纤粘连蛋白表达。结果：整合素β3的表达输卵管妊娠组输卵管上皮明显高于子宫内膜上皮(P<0.05)及正常输卵管上皮(P<0.05),低于正常子宫蜕膜,但差异无显著性(P>0.05); 输卵管妊娠组子宫内膜上皮明显低于正常子宫蜕膜(P<0.05),高于正常输卵管上皮,差异无显著性(P>0.05);正常输卵管上皮明显低于正常子宫蜕膜(P<0.05)。层粘连蛋白的表达输卵管妊娠组输卵管上皮明显高于子宫内膜上皮(P<0.05)及正常输卵管上皮(P<0.05), 低于正常子宫蜕膜, 但差异无显著性(P>0.05); 输卵管妊娠组子宫内膜上皮明显低于子宫蜕膜上皮(P<0.05),高于正常输卵管上皮但差异无显著性(P>0.05); 正常输卵管上皮明显低于子宫蜕膜上皮(P<0.05)。纤粘连蛋白的表达输卵管妊娠组输卵管上皮高于子宫内膜上皮(P<0.05)及正常输卵管上皮(P<0.05),低于正常子宫蜕膜但差异无显著性(P>0.05)；输卵管妊娠组子宫内膜上皮低于正常子宫蜕膜(P<0.05),高于正常输卵管上皮但差异无显著性(P>0.05)；正常输卵管上皮明显低于正常子宫蜕膜(P<0.05)。结论:整合素β3、层粘连蛋白及纤粘连蛋白参与胚泡异位着床于输卵管内,可能在输卵管妊娠发生过程中起到一定的作用。

【关键词】  整合素β3；细胞外基质；层粘连蛋白；纤粘连蛋白；输卵管妊娠

　　To Study the Expression of Integrin β3 and Extracellular Matrix of Fibronectin and Laminin in Tubal Pregnancy

　　Abstract：Objective To investigate the rule of integrin β3  fibronectin and laminin in tubal Pregnancy.Methods Flow crtometry was resorted to demonstrate the expression of integrin β3,fibronectin and laminin in tubal epithelium and endometrium of tubal pregnancy，normal tubal epithelium and normal decidual cells.Results The expression of integrin β3 in tubal epithelium of tubal pregnancy was higher than that in normal tubal epithelium and normal decidual cells(P<0.05).However, expression of integrin β3, in endometrium of tubal pregnancy was lower than that in normal decidual cells(P<0.05).Laminin in tubal epithelium of tubal pregnancy was higher than that in normal tubal epithelium, but lower than that in normal decidual cells(P<0.05).Fibronectin in tubal epithelium of tubal pregnancy was higher than that in normal tubal epithelium, but lower than that in normal decidual cells(P>0.05).Conclusion Integrin β3 ，fibronectin，laminin participated in ectopic implantation and might play a key role in tubal pregnancy.

　　Key words:Integrin β3；Extracellular matrix；Fibronectin； Laminin；Tubal Pregnancy

　　整合素β3 及纤粘连蛋白(Fibronectin,FN)、层粘连蛋白(Laminin,LN) 均为粘附分子家族的成员。整合素β3以细胞外基质为配体, 介导细胞和基质粘附, 从而控制细胞与基底膜的结合以及细胞游走, 其配体结合位点是精氨酸—甘氨酸—冬氨酸(RGD)的三肽结构［1］。FN与LN是两种细胞外基质分子, 与整合素家族互为配体。它们不仅有连接和支持细胞、组织的作用, 而且可以影响细胞形态, 促进细胞粘附, 调控细胞迁移、增殖及传递细胞信息，对于胚胎的植入至关重要。

　　1  材料与方法

　　1.1  研究对象  收集本院妇科自2005年6月至2006年8月经腹腔镜或开腹手术，并在临床及病理上明确诊断为输卵管妊娠的病例，选取其中在腹腔镜下无盆腔粘连、组织病理切片未见有慢性炎症改变及术前3个月未接受激素类药物治疗或服用避孕药物的病例，取其输卵管黏膜组织及其子宫内膜组织作为研究组1，共27例，年龄为18岁~41岁，孕龄为7周~9周 ；收集平时月经周期规则，有正常生育史，因子宫肌瘤等疾病手术治疗及要求行输卵管结扎者而在黄体中期手术切除的正常输卵管黏膜组织作为对照组1，共23例，年龄为34岁~47岁；另收集在本院门诊因正常宫内早孕而行人工流产术者的子宫蜕膜组织作为对照组2，共20例，年龄在19岁~38岁，孕龄为7周~10周 ，对照组均要求为术前3个月未接受激素类药物治疗或服用避孕药物的病例。

　　1.2  标本采集  取标本组织各0.5 g，70%冷乙醇固定，4 ℃冰箱保存。

　　1.3  主要试剂与仪器  鼠抗人CD 61 SZ 21(整合素β3 抗体),FN抗体(120.5) 为Santa Cruze 公司产品;LM抗体(兔抗EHS) 为美国Sigma公司产品。抗体稀释度1∶100 。流式细胞仪为FACS 420 (Becton Dickinson), 分析软件为BDISCONSORT 30, 仪器变异系数(CV)<5%。

　　1.4  输卵管内膜、蜕膜组织样品制备  采用机械法(网搓)制备单细胞悬液［3］;取单细胞样品1×106/ml;加入0.1 ml工作液浓度的抗体(?抗) 混匀, 置温室30 min;加入PBS缓冲液10 ml;离心1 000 r/min 5 min,弃上清;加入相应二抗IgG工作液0.1 ml,温室孵育30 min;重复加PBS缓冲液及离心步骤2次;加入1 ml PBS 混匀;经300目网过滤至样品管中;以流式细胞仪检测样品中整合素β3、FN 、LN 阳性细胞数。

　　1.5  统计学分析  资料输入机系统采用SPSS 10.32软件进行t检验。

　　2  结果

　　输卵管黏膜、蜕膜组织中整合素β3、LN、FN的表达，见表1。

　　表1  输卵管黏膜、蜕膜组织中整合素β3的表达（略）

　　由表1 可见, 整合素β3的表达情况：输卵管妊娠组输卵管上皮明显高于子宫内膜上皮(P<0.05)及正常输卵管上皮(P<0. 05),低于正常子宫蜕膜, 但差异无显著性(P>0.05);输卵管妊娠组子宫内膜上皮明显低于正常子宫蜕膜(P<0.05),高于正常输卵管上皮,差异无显著性(P>0.05);正常输卵管上皮明显低于正常子宫蜕膜(P<0.05)。LN的表达情况：输卵管妊娠组输卵管上皮明显高于子宫内膜上皮(P<0.05)及正常输卵管上皮(P<0.05),低于正常子宫蜕膜, 但差异无显著性(P>0.05);输卵管妊娠组子宫内膜上皮明显低于子宫蜕膜上皮(P<0.05),高于正常输卵管上皮但差异无显著性(P>0.05);正常输卵管上皮明显低于子宫蜕膜上皮(P<0.05)。FN的表达情况：输卵管妊娠组输卵管上皮高于子宫内膜上皮及正常输卵管上皮, 低于正常子宫蜕膜,但差异无显著性(P>0.05)；输卵管妊娠组子宫内膜上皮低于正常子宫蜕膜,高于正常输卵管上皮,差异无显著性(P>0.05)；正常输卵管上皮明显低于正常子宫蜕膜(P<0.05)。

　　3  讨论

　　异位妊娠中约95%为输卵管妊娠,输卵管具有适宜于胚泡着床的结构,并可表达“着床窗”期一些特异分子,是妊娠发生的基础;同时胚胎经此通道向子宫输送时,输卵管病理状况所导致的胚泡滞留也使妊娠成为可能［2］。输卵管妊娠的发生需要同时具备两种情况，一是胚胎在输卵管内而不是在子宫内获得了着床的能力，二是与此同时输卵管黏膜上皮在着床期也具备了接收胚胎的能力。目前所知，胚胎的着床受到粘附分子、细胞因子、激素及免疫等多方面因素的影响其中细胞粘附分子，尤其是整合素、FN 、LN在胚胎着床中的作用至关重要。整合素是一类普遍存在于细胞表面的跨膜糖蛋白,由α、β两个亚单位以非共价键形式连接成的异二聚体分子，介导细胞与细胞、细胞和细胞外基质(ECM)之间相互作用, 发挥其粘附和信号转导两大基本功能, 参与胚胎发育、免疫应答、创伤修复、恶性肿瘤转移等生理和病理过程。滋养细胞表面也同时存在整合素β3 及其配基,通过整合素与配基的相互识别、结合完成子宫内膜和胚胎之间的接触和粘附。在黄体中期至早孕蜕膜中均有表达, 在滋养细胞上也有表达, 参与滋养细胞的粘附过程［3］ 。Sulz等［4］采用免疫组化方法研究发现整合素a, β3在容受期不仅在子宫内膜有表达，而且在输卵管黏膜上皮细胞上也有表达，且与子宫植入窗开放期同步。从而推测，在输卵管黏膜上皮可能也有一个植入窗，从而为胚胎在输卵管内着床提供了机会。我们的研究结果发现，整合素β3在输卵管妊娠患者输卵管上皮的表达明显高于子宫内膜上皮及正常输卵管上皮(P<0.05),低于正常子宫蜕膜(P>0.05);输卵管妊娠患者子宫内膜上皮明显低于正常子宫蜕膜(P<0.05),高于正常输卵管上皮(P>0.05);正常输卵管上皮明显低于正常子宫蜕膜(P<0.05)。由此推论整合素β3在胚胎异位着床于输卵管过程中起着一定的作用。细胞外基质分子FN 、LN在人类生殖活动中的作用已日益受到人们的重视, 特别是它们与子宫内膜植入窗开放, 子宫内膜容受性、滋养细胞粘附入侵、胚胎着床关系的研究较多。在体外实验中, 滋养细胞粘附可被含RGD 序列的多肽抑制。早孕蜕膜中整合素β3 、FN 、LN较未孕时明显升高［5］。输卵管妊娠中,绒毛间质、滋养层细胞柱远端、浸润性绒毛外滋养细胞及血管内滋养细胞中均可检测到纤粘连蛋白(FN),在浸润部位,FN分布于浸润性滋养层细胞的外周,可能增强了该类细胞对母体组织的粘附,便于细胞的迁移和浸润。层粘连蛋白(LN)的表达定位与FN类似［6］。本研究发现早孕蜕膜及输卵管妊娠组输卵管上皮中也有较高水平的FN 、LN表达, 与报道一致，提示这些粘附分子表达对维持早孕及输卵管妊娠有重要意义。从上述结果推测，发生输卵管妊娠的患者子宫内膜内的整合素β3、FN 、LN低表达而使子宫内膜的容受性下降;与此同时，在输卵管内整合素β3、FN 、LN呈高表达，此时的胚泡因这些因子平衡失调，功能不足而滞留于输卵管内，胚泡滋养层细胞上的整合素与输卵管黏膜上皮细胞上的整合素相互识别、结合，而完成了胚胎与输卵管黏膜上皮的粘附，使其异位着床在输卵管内，发生输卵管妊娠。对于胚胎着床，因为受到了多方面因素的影响，而我们研究的整合素β3、FN 、LN只是粘附分子中的一小部分，对其他因素的影响及在输卵管妊娠发病机制中有可能起到的作用还不是很清楚。总之，关于输卵管妊娠的发病机制，还需要我们进一步深入探讨。

【文献】
  　　［1］ 雷彩霞,张炜,王丽.整合素与子宫内膜容受性关系的研究进展［J］.妇幼健康研究,2006,17(1):54?56.

　　［2］ 秦力,王雁玲.输卵管妊娠着床窗口的分子基础及母胎界面相关分子的表达［J］.生殖医学杂志,2003,12960:369?373.

　　［3］ Selam B,Kayisli UA,Garcia?Velasco JA.Extracellular matrix?dependent regulation of fas ligand expression in human endometrial stromal cells［J］.Biol Reprod,2002,66(1):1?5.

　　［4］ Sulz L,Valenzula JP,Salvatierra AM.The expression of αvβ3 integrin subunits in the normal human fallopian tube epithelium suggests the occurrencen of a tubal implantation window ［J］.Hum Reprod，1998,13(10):2916?2920.

　　［5］ 李瑞珍，王振海，吴瑞芳，等.整合素β3 及细胞外基质分子纤粘连蛋白、层粘连蛋白在早孕药物流产蜕膜与绒毛中的表达［J］.生殖医学杂志,1999,8 (4):214?216.

　　［6］ Kemp B,Kertschanska S,Kadyrov M,et al.Invasirve depth of extravillous trophoblast correlates with cellular phenotype: a comparison of intra? and extrauterine implantation sites ［J］.Histochem Cell Biol,2002,117(5):401?414.