FQ?PCR和ELISA联合检测乙型肝炎的意义分析
作者：李国钢，方美芳，万汝根
【摘要】 目的：探讨血清HBV?DNA水平与HBV血清标志物(HBV?M)的相关性及其在临床中的应用。方法：采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量PCR(FQ?PCR)对1 560例临床血清标本进行对比检测。结果：血清HBV?DNA水平与血请HBV?M的表现模式有很大关系。以HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)模式患者中的HBV?DNA阳性检出率最高，为93．7％；DNA平均拷贝数为7．76×107／ml，显著高于其他HBV?M模式的患者(P<0.01)。其他HBsAg(+)模式：HBV?DNA阳性率分别为78．5％、42．7％，平均拷贝数分别为2．88×105／ml、8．91×104／ml，患者血清中HBV?DNA的含量差异无显著性(P>0.05)；另外，HBsAb(+)及HBV?M全阴患者中也有HBV?DNA检出；HBsAg(+)中也有患者未检到HBV?DNA。结论：单凭血清免疫标志物模式难以准确判断HBV的复制程度及传染性的强弱，定量检测HBV?DNA能真实反映HBV的复制情况，对诊断、乙型肝炎患者及疗效观察具有较大的指导意义。
【关键词】 定量PCR；乙型肝炎病毒；血清标志物
目前，临床上乙型肝炎感染的诊断主要依赖于HBV血清标志物(HBV?M)及HBV?DNA的检测,HBV?DNA先于血清标志物出现，而且灵敏度高，因此可早期诊断乙型肝炎，并可判断患者是否具有传染性；此外，FQ?PCR法检测血清中HBV?DNA水平，在抗病毒疗效观察和病情预测等方面具有重要的临床应用价值。用ELISA法测定HBV?M比较简单，但只能提供血清标本中HBV的间接证据，而且敏感牲低。本文采用两种方法联合检测1 560例临床标本进行对照。以探讨两者的关系及临床应用，现报告如下。
1 对象与方法
1．1 对象 选择2006年1月至6月本院门诊及住院进行HBV?DNA检测的患者，取其血清同时进行HBV?M的检测。
1．2 试剂与仪器 HBV荧光定量PCR诊断试剂盒由中山医科大学达安基因诊断中心提供；ELISA乙型肝炎系列诊断试剂盒由上海科华公司提供。仪器采用德国Roche公司生产的LightCycler。
1．3 方法 操作方法见［1］，每次检测均设阴性、阳性和临界值对照以及4个标准梯度参控品，共含量分别为1×104、1×105、1×106、1×107拷贝／ml。
1．4 统计学处理 定量结果由机自动分析得出，采用对数值表示HBV?DNA拷贝数；采用t检验和χ2检验。
2 结果
FQ?PCR法检测HBV?DNA水平与ELISA法检测HBV?M模式的关系见表1。由表1可见，不同HBV?M模式的患者中均存在不同程度的病毒复制。Ⅰ组和Ⅱ组的HBV?DNA阳性率均高于其他各组，Ⅰ组的HBV?DNA拷贝数对数值显著高于其他各组(P<0．01)；Ⅱ组HBV?DNA拷贝数对数值与Ⅲ组相比，差异无显著性(P>0．05)；Ⅳ组为具有一定免疫力的患者，其HBV?DNA拷贝数对数值与Ⅴ组比较差异无显著性(P>0．05)。
表1 FQ?PCR法检测HBV?DNA水平与ELISA法检测HBV?M模式的关系 略
3 讨论
本文结果表明：Ⅰ组和Ⅱ组患者的HBV?DNA阳性检出率较高，分别为93．7%和78．5％，与有关报道相符［2，3］；其HBV?DNA平均含量分别为7．76×107和2．88×105拷贝／ml，表明患者体内HBV复制程度依次递减［2，4］。Ⅱ组结果表明：仅以HBeAg(+)／HBeAb(+)的转换作为病毒复制终止的标志具有一定的局限性，张复春［5］等的研究表明，HBeAb(+)的出现并不能表示HBV复制的终止，而只是复制水平的下降。关于HBeAb(+)而有病毒复制的原因可能是乙型肝炎病毒前C区基因变异，逃避免疫清除而继续活跃复制［6］。Ⅳ组结果显示：在已感染且有免疫力或者打过疫苗具有免疫力的血清标本中，也可能存在HBV?DNA的低水平的复制，与Brechot等的报道一致［7］；说明HBsAb(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)的出现并不标志着HBV复制的停止，也可能是乙型肝炎变异株的存在，不能完全认为其无传染性，仍需进一步做HBV?DNA的检测。Ⅴ组结果显示：HBV?M全阴性模式的阳性检出率为4.5％，资料证实［8］HBV?DNA的出现先于其他血清标志物，受检者可能处于感染早期。综上所述：单凭血清免疫标志物模式难以准确判断HBV的复制程度及传染性的强弱，定量检测HBV?DNA能真实反映HBV的复制情况；因此，两者的联合检测对诊断、乙型肝炎患者及疗效观察具有较大的指导意义。
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