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HPLC法测定复方皮炎平霜中盐酸苯海拉明的含量

来源：岁月联盟作者：刘燕，吴美珠，谭雄斯时间：2010-07-14

【摘要】 目的：建立高效液相色谱法测定复方皮炎平霜中盐酸苯海拉明的含量。方法：色谱柱为Shimpack VP?ODS 4.6 mm×15 cm C18,流动相为乙腈?1%三乙胺（29：71）（用冰醋酸调节pH至6.5）,检测波长为230 nm,流速为1.0 ml/min,进样量为20 μl。结果：盐酸苯海拉明在0.09 mg/ml～0.45 mg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为102.3%,RSD为0.69% 。结论：本法简便、快速、准确，回收率好，可用于复方皮炎平霜的质量控制。

【关键词】 高效液相色谱法；盐酸苯海拉明；含量测定

　　Determination of Diphenhydramine Hydrochloride in Compound Piyanping Cream　 by HPLC

　　LIU Yan，WU Mei?zhu，TAN Xiong?si

　　Zhaoqing Medical College, Zhaoqing, Guangdong 526020, China

Abstract :Objective To establish HPLC for content determination of diphenhydramine hydrochloride in compound piyanping cream. Methods The chromato bar was Shimpack VP?ODS 4.6 mm×15 cm C18，the mobile phase was acetonitrile?1% CH3CH2)3N (29:71),with the flow rate of 1.0 ml/min and detective wave at 230 nm,the sample size was 20 μl .Results The linear was 0.09 mg/ml～0.45 mg/ml (r=0.9999),the average recovery was 102.3%,RSD=0.69% Conclusion The method is convenient,rapid, accurate ,and brings good recovery. It can be used for the quality control of compound piyanping cream .

Key words:High performance liquid chromatography; Diphenhydramine hydrochloride; Content determination

复方皮炎平霜是我市皮肤病的经验处方，用于过敏性皮炎、接触性皮炎、神经性皮炎、湿疹、扁皮苔癣及各种皮肤瘙痒症，起效快，疗效明显，对皮肤刺激性小，在临床上大有推广应用的价值。它是以盐酸苯海拉明为主药,以硬脂酸、十八醇、白凡士林等为基质制成的乳剂型软膏，其中盐酸苯海拉明的含量较高，为了更好地控制该制剂的质量,本文建立了HPLC法测定制剂中盐酸苯海拉明的含量［1］。本法操作快速、准确，可作为测定该制剂中盐酸苯海拉明含量的方法，现报道如下。

　　1 仪器与试药

　　1.1 仪器

　　LC?10ATvp 高效液相色谱仪（日本岛津），SPD?10Avp紫外可见检测器，Shimpack VP?ODS 4.6 mm×15 cm C18色谱柱,N2010色谱工作站； TU?1800SPC紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；FA1104天平（上海精密仪器有限公司）。

　　1.2 试药

　　盐酸苯海拉明对照品（药品生物制品检定所提供批号：100066?200506）；乙腈：色谱纯，天津市四友生物医学技术有限公司；水为重蒸水；所用药品均符合中国药典标准，试剂均为分析纯；复方皮炎平霜(肇庆市皮肤病医院制剂室)。

　　2 实验方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　色谱柱Shimpack VP?ODS 4.6 mm×15 cm C18，流动相为乙腈?1%三乙胺（29：71）（用冰醋酸调节pH至6.5），流速为1.0 ml/min , 柱压为10 MPa , 柱温为室温, 检测波长为230 nm,AUPS为1.0进样量为20 μl。

　　2.2 溶液制备

　　2.2.1 样品溶液的制备

　　精密称取复方皮炎平霜约1.5 g，置50 ml量瓶中,加甲醇约40 ml，在80℃水浴中振摇使盐酸苯海拉明充分溶解, 放冷至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀,置冰浴中冷却2 h，取出后迅速滤过，取续滤液,放至室温,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,滤液作为样品溶液。

　　2.2.2 空白液的制备

　　精密称取按处方比例依法制备不含盐酸苯海拉明的空白基质1.5 g,按样品溶液制备方法同法制备,即得。

　　2.2.3 对照品溶液的制备

　　精密称取盐酸苯海拉明对照品适量，置50 ml量瓶中,加甲醇至刻度，摇匀，制成每1 ml中含盐酸苯海拉明4.5 mg的溶液作为对照品贮备液。再精密吸取3 ml至50 ml的量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀即得。

　　2.3 检测波长的确定

　　取对照品溶液，照分光光度法［2］，以甲醇为空白，在200 nm~400 nm的波长范围内扫描，扫描结果见图1，结果显示，盐酸苯海拉明在230 nm有最大吸收，故选用230 nm作为盐酸苯海拉明的检测波长。

　　2.4 系统适应性试验

　　取对照品溶液、样品溶液、空白液按上述色谱条件分别进样20 μl，记录色谱图，见图2。结果理论塔版数达3 000以上，分离度良好，空白液对样品无干扰。图2 对照品、样品及空白液色谱图2.5 线性试验精密吸取对照品贮备液1.0 ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml置50 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度,摇匀。在上述色谱条件下进行测定，以浓度（Y）对峰面积（X）进行线性回归，得直线回归方程：Y=?1.08×10?3+8.2×10?7X, r=0.9999。结果表明盐酸苯海拉明在浓度0.09 mg/ml～0.45 mg/ml范围内呈良好的线性关系。

　　2.6 回收率试验

　　称取不含盐酸苯海拉明的空白基质1.5 g分别置3个50 ml量瓶中，各加入对照品贮备液2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml，按样品溶液的制备方法制备，在上述色谱条件下进行测定，以回归方程回收率，结果，见表1。表1 回收率试验结果（略）

　　2.7 精密度及稳定性试验

　　取对照品溶液连续进样5次，按上述色谱条件测定峰面积，结果 RSD=0.51％，精密度良好。

取同一份样品溶液，分别在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h按上述色谱条件分别测定峰面积，并计算含量，结果无明显变化，RSD=0.8％，说明样品液在8 h内稳定。

　　2.8 重现性试验

　　取同一批号的样品3份(约1.5 g)，精密称定，照样品溶液制备的方法制备供试液，按上述色谱条件分别测定峰面积，并计算含量，结果 RSD为0.52％。

　　2.9 样品含量测定

　　取3个批号的复方皮炎平霜，按样品溶液的制备方法制备出相应批号的样品液，分别取20 μl进样，测定盐酸苯海拉明含量，结果见表2。表2 样品含量测定结果(略)

　　3 讨论

由于复方皮炎平霜是复方制剂，要同时考虑基质和主成分间的相互干扰的问题，曾试验过用同一方法同时测定两主要成分的含量，但结果是不能同时排除基质或主成分间的相互干扰，在试验本文所用的色谱系统中曾用不同比例的乙腈?1%三乙胺为流动相，当乙腈比例偏高或偏低时，或pH偏大时，基质有干扰，且峰形都不好。

在本文条件下测定盐酸苯海拉明的含量能排除基质的干扰，另一主要成分地塞米松也不干扰测定，盐酸苯海拉明在浓度0.09 mg/ml～0.45 mg/ml范围内,浓度与峰面积的线性关系良好，回收率高，且重现性好，具有准确、可靠、灵敏等特点，能较好地控制复方皮炎平霜的质量。