大鼠抗胸腺细胞血清性肾炎早期凋亡病变的观察

【摘要】  目的：研究大鼠系膜增生性肾炎，即抗胸腺细胞血清性肾炎(ATSN)早期凋亡的病变。方法：利用兔抗大鼠胸腺细胞抗血清(ATS)复制大鼠ATSN模型，实验40 min、24 h和7 d分别取各组大鼠肾皮质切片用末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(Tunel)技术和电镜检查方法观察其肾小球系膜细胞(MC)早期凋亡病变。结果：实验40 min，ATSN大鼠出现明显的肾小球MC胞核染色质固缩，聚集于核膜呈现边缘化改变，核膜多处凸起。肾小球系膜区细胞 Tunel染色呈阳性，荧光强度均可达+++～++++。结论：ATSN发病早期（1 h内），肾小球MC可发生凋亡，随着时间的延长，逐渐出现MC溶解。

【关键词】  抗胸腺细胞血清性肾炎 凋亡 大鼠 肾小球

    系膜增生性肾小球肾炎（mesangial proliferative glomerulonephritis, MPGN）是肾小球肾炎最常见的病理类型之一，患者可因肾小球系膜细胞（mesangial cell, MC）过度增生及细胞外基质（extracellular matrix, ECM）异常分泌导致肾小球纤维化诱发肾功能衰竭，预后较差，危害极大。大鼠抗胸腺细胞血清性肾炎（anti?thymocyte serum nephritis, ATSN）是MPGN理想的动物模型之一［1］。本研究在成功复制大鼠ATSN模型的基础上，观察抗胸腺细胞血清性肾炎(ATSN)早期凋亡的病变。

　　1  材料和方法

　　1.1  主要材料 

　　低龄雄性和雌性SD大鼠及雄性新西兰兔购自南京医科大学实验动物中心。Tunel试剂盒来源于Roche公司。

　　1.2  兔抗大鼠胸腺细胞抗血清的制备及大鼠ATSN模型的复制 

　　方法详见［2］。

　　1.3  肾小球组织病检查 

　　实验40 min、24 h活检大鼠肾皮质（每次取4只），7 d时处死取肾，标本分别作石蜡切片以及电镜切片。

　　1.4  肾小球MC凋亡的检查 

　　取各组大鼠40 min、24 h和7 d肾组织石蜡切片，常规脱蜡、水化，抗原修复，0.01 mol/L pH 7.4 PBS洗涤3次后加末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记（Tunel）反应液，37℃孵育1 h，洗涤后置荧光显微镜下观察。Tunel染色荧光强度以-～++++表示。详细操作流程参见Tunel试剂盒说明书。

　　1.5  统计学处理 

　　实验数据以均数±标准差(±s)表示，结果均在SPSS软件上处理。

　　2  结果

　　2.1  肾组织超微结构病理变化 

　　电镜观察显示，实验40 min，ATSN大鼠出现明显的肾小球MC胞核染色质固缩，聚集于核膜呈现边缘化改变，核膜多处凸起，提示肾小球MC有凋亡改变（图1）。实验24 h，肾小球MC出现溶解坏死，即：胞核溶解，胞浆肿胀空泡化，致密度明显下降。实验7 d时，肾小球MC明显增生，ECM分泌显著增多。

　　2.2  肾小球MC Tunel染色 

　　实验40 min，ATSN肾小球系膜区细胞Tunel染色呈阳性，荧光强度均可达+++～++++（图2）。24 h时，肾小球Tunel染色虽可见阳性结果，但阳性分布区明显减少且荧光强度显著下降。实验7 d时，Tunel染色仅见少量荧光沉积，且强度较弱。 图2  注射ATS后40 min，Tunel检测肾小球MC阳性染色

　　3  讨论

    本研究对ATSN模型的检查发现，注射ATS后40 min，电镜下已见肾小球MC核染色质固缩，聚集于核膜呈边缘化改变，核膜多处凸起。而利用末端转移酶介导的Tunel技术荧光镜下检查表明，肾小球系膜区细胞明显着色，注射ATS后24 h，Tunel染色仍见阳性结果，但阳性分布区及荧光强度均显著下降。7 d时电镜和光镜下均见MC增生，ECM积聚，凋亡与坏死现象已不存在。提示：所建ATSN模型大鼠肾小球MC的演变确实存在凋亡→坏死→增生3种表现。

【】
  　　［1］Yamamoto T， Curtis B. Quantitative and qualitative studies of antibody?induced mesangial cell damage in the rat［J］. Kidney,1987,32(4):514?523.

　　［2］王迎伟，徐静华，汤仁仙，等.抗胸腺细胞血清性肾炎模型大鼠肾小球中C5b?9的沉积及NO、TNFα含量分析［J］.病理生理杂志，2004，20（1）：54?59.