KAI1/CD82、E
【关键词】 KAI1/CD82；E
摘要：目的 探讨KAI1/CD82、ECadherin在宫颈鳞癌中的表达及其意义。方法 采用免疫组化SP法分别检测KAI1/CD82、ECadherin在10例正常宫颈组织、15例不典型增生宫颈组织及64例宫颈鳞癌中的表达，分析其表达结果与临床病理特征的关系。结果 随着从正常宫颈组织→宫颈不典型增生组织→宫颈鳞癌的转化，二者的阳性表达率呈递减趋势。在宫颈鳞癌中的表达率明显低于正常组织和不典型增生组织(P<0.05)，而正常组织与宫颈不典型增生组织之间无显著性差异(P>0.05)。二者在宫颈组织中的表达呈正相关，且二者在宫颈鳞癌中的共表达下调与淋巴结转移明显相关。结论 KAI1/CD82可能与膜蛋白ECadherin相互作用抑制宫颈鳞癌的淋巴结转移；ECadherin基因、肿瘤自身的特性以及多种基因相互作用可能在宫颈鳞癌的转移中起着更为关键的作用。
关键词：KAI1/CD82；ECadherin；宫颈癌；免疫组化；淋巴结转移
Expression and significance of KAI1/CD82 and ECadherin in Human squamous cervical carcinoma
ABSTRACT: Objective To investigate the expression and significance of KAI1/CD82 and ECadherin in human squamous cervical carcinoma. Methods The expressions of KAI1/CD82 and ECadherin were examined respectively by immunohistochemical SP method in 10 cases of normal cervical tissue, 15 cases of atypical hyperplasia of cervical epithelia and 64 cases of squamous cervical carcinoma. We analyzed statistically the correlation between the immunohistochemical results and the clinicopathological features. Results From normal cervical tissue, Cervical intraepithelial neoplasis(CIN) to cervical cancer, the positive expression rates of KAI1/CD82 and ECadherin were gradually decreased. Through statistic test, the positive expression rates of both invasive squamous carcinoma of the cervix were significantly lower in normal cervical tissue and CIN(P<0.05), while it was of no statistical significance between the latter two(P>0.05). Of all the samples, direct correlation was showed in the expressions of KAI1/CD82 and ECadherin. Furthermore, the lowexpression of both revealed significant correlation with lymphonode metastasis in human squamous cervical carcinoma. Conclusion KAI1/CD82 and ECadherin interactions may depress lymphonode metastasis in cervical carcinoma. Logistic analysis reveals that ECadherin gene, specific and interactions of several genes may be more significant during tumor metastasis.
KEY WORDS: KAI1/CD82; ECadherin; cervical cancer; immunohistochemistry; lymphonode metastasis
淋巴结转移是恶性肿瘤最主要的生物学行为之一。50%以上的肿瘤细胞经淋巴结途径转移，淋巴结是否受累，既是许多类型肿瘤分期和直接针对肿瘤区域淋巴结的基础，也是肿瘤复发和预后的重要指标。KAI1/CD82又称抗癌基因，是近年来新发现的一个肿瘤转移抑制基因，与ECadherin同属于跨膜4超家族(transmembrane 4 super family, TM4SF)成员。TM4SF分子可与整和素形成复合体，调节整和素的粘附功能，并影响整和素介导的细胞转移。该家族大部分成员为白细胞表面蛋白，参与调节细胞的黏附、迁移、生长及分化。KAI1/CD82可能与膜蛋白ECadherin相互作用抑制原发肿瘤的侵袭、浸润。本研究采用免疫组化SP法分别检测KAI1/CD82、ECadherin在宫颈鳞癌中的表达，并进一步分析其表达与临床病理特征的关系。
1 材料与方法
1.1 一般资料 10例正常宫颈组织、15例不典型增生宫颈组织及64例宫颈鳞癌组织来自西安市第四病理科1999年2月至2004年4月的手术或活检标本。64例宫颈鳞癌中，20例为宫颈原位癌，44例为宫颈浸润癌(FIGO分期Ⅰ期16例，Ⅱ期28例)，有淋巴结转移者15例，占34.1 %。年龄分布27-67岁，平均(45.8±9.1)岁，中位数45.0岁。组织学分级Ⅰ级21例，Ⅱ级27例，Ⅲ级16例。所有病例取标本前均未行放疗、化疗，临床资料完整。
1.2 主要试剂和实验方法 浓缩型鼠抗人KAI1/ CD82单克隆抗体购自USANEOMARKERS公司，即用型鼠抗人ECadherin单克隆抗体、SP法免疫组化试剂盒及DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司 。
1.3 实验方法 实验操作按试剂盒说明书进行。组织切片脱蜡至水，PBS振洗3×3min；→组织抗原修复法，PBS振洗3×3min；→滴加50μL内源性过氧化物酶阻断剂，室温下孵育10min。PBS振洗3×3min→滴加50μL正常山羊封闭液，37℃孵育20min，甩去多余液体；→滴加50μL的第一抗体，4℃过夜，PBS振洗3×5min；→滴加50μL生物素标记的第二抗体， 37℃孵育30min，PBS振洗3×5min；→滴加新鲜配制的DAB＋H2O2溶液，显微镜下观察3-10min；→自来水冲洗，苏木素复染，自来水冲洗返兰；→梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。以PBS代替一抗作为阴性对照。用已知的阳性片作为阳性对照。
1.4 结果判定 采用半定量积分法[1]，阳性信号为棕黄色。KAI1/CD82、ECadherin染色主要分布于细胞膜。在400倍视野下，每张切片随机选取5个不同的视野，分别记录每个视野的阳性细胞数量并其算术平均值，阳性细胞百分数计分：0-5%计0分，5%-25%计1分，26%-50%计2分，51%-75%计3分，>75%计4分。同时观察每个视野阳性细胞的着色深浅并计分：阴性细胞为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；然后根据二者得分相加判断阳性等级：0-1分为阴性；2-3分为弱阳性(+)；4-5分为中等阳性()；6-7分为强阳性()。
1.5 统计学处理 采用SPSS11.5统计软件，对实验结果进行相关统计学分析。依据资料性质分别进行χ2检验、Fishers确切概率法、Ridit分析法、Spearman等级相关检验、Logistic回归分析。显著性水准α=0.05(双侧)，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 KAI1/CD82、ECadherin的表达 KAI1/CD82蛋白主要定位于细胞膜，免疫组化呈淡黄色颗粒状。已有报道[23]，Northern杂交法检测KAI1 mRNA在子宫、卵巢中表达较弱。与文献报道一致，KAI1/CD82蛋白在89例标本中呈中等阳性表达者9例，无1例呈强阳性表达。为了便于统计学分析，将所有的阳性表达合并为一组；ECadherin蛋白亦主要定位于细胞膜，免疫组化呈棕黄色颗粒状。随着从正常宫颈组织→宫颈不典型增生组织→宫颈鳞癌的转化，KAI1/CD82和ECadherin的阳性表达率呈递减趋势。统计学检验显示，二者在宫颈鳞癌中的表达率明显低于正常组织和不典型增生组织(P<0.05)，而正常组织与宫颈不典型增生组织之间无显著性差异(P>0.05，表1)。
表1 不同宫颈组织中KAI1/CD82、ECadherin的表达（略）
Table 1 The expression of KAI1/CD82, ECadherin in different tissues of the cervix
Ridit method, *P>0.05 vs. normal cervix; **P<0.05 vs. normal cervix tissue, atypical hyperplasia
2.2 KAI1/CD82、ECadherin在宫颈组织中的共表达 在89例宫颈组织中，KAI1/CD82和ECadherin表达一致的共52例，其中同为阳性45例，同为阴性的7例。38例KAI1/CD82阴性表达中ECadherin阴性7例占18.4%，51例KAI1/CD82阳性表达中ECadherin有45例表达，占88.2 %，Spearman等级相关检验无显著性差异(P>0.05)，说明KAI1/CD82阳性病理组织中ECadherin的阳性率与KAI1/CD82阴性病理组织中ECadherin的阴性表达者之间无显著性差异(表2)。以诊断为标准，进一步Spearman等级相关检验均有显著性差别，说明KAI1/CD82和ECadherin之间呈显著正相关。
表2 KAI1/CD82、ECadherin在宫颈组织中的共表达（略）
Table 2 The both expressions of KAI1/CD82, ECadherin in squamous carcinoma of the cervix
Spearman analytic result, rs'=0.3162, P>0.05
2.3 KAI1/CD82、ECadherin在宫颈鳞癌中的共表达与淋巴结转移的关系 在64例宫颈鳞癌中，KAI1/CD82和ECadherin表达一致的共35例，其中同为阳性28例，同为阴性的7例。统计学检验显示，KAI1/CD82、ECadherin在宫颈鳞癌中的共表达下调与淋巴结转移明显相关(P<0.01，表3)。
2.4 浸润性宫颈癌淋巴结转移的多因素方差分析 将与淋巴结转移相关的KAI1/CD82、ECadherin、病理分级、浸润深度、临床分期、癌灶大小6个指标进一 步行Logist多元回归分析(表4)，评价其在宫颈癌淋巴结转移中的作用强度。结果显示KAI1/CD82、病理分级、癌灶大小与淋巴结状况相关性较弱，而其余三者则显著正相关(P<0.01)。ECadherin组的回归系数t=3.062，P=0.003，说明宫颈癌中ECadherin阳性表达者较阴性表达者更容易发生淋巴结转移；浸润深度组t和P值分别为3.078和0.003，说明癌组织浸润越深淋巴结转移的可能性越大；临床分期组t和P值分别为2.365和0.021，说明随着临床期别的进展淋巴结转移的可能性越大。由统计学检验可知，ECadherin、浸润深度、临床分期比KAI1/CD82、病理分级、癌灶大小更能影响宫颈癌淋巴结转移的状况。
表3 KAI1/CD82、ECadherin在宫颈鳞癌中的共表达与淋巴结转移的关系（略）
Table 3 The relationship between the bothexpression of KAI1/CD82, ECadherin and lymph node metastasis in squamous carcinoma of the cervix
Fisher exact propability, P=0.0003
表4 浸润性宫颈癌淋巴结转移的Logist多因素回归分析结果（略）
Table 4 Logistic regression analysis of lymph node metastasis with invasive squamous carcinoma of the cervix
3 讨论
肿瘤淋巴道转移是肿瘤细胞与宿主细胞、细胞外基质(ECM)之间一系列复杂的、多步骤、多因素相互作用的动态过程。在此过程中涉及粘附因子、蛋白水解酶、运动因子以及多种基因等因素的相互作用与调节；同时也与ECM成分、细胞表面结构、细胞骨架系统状态、细胞间跨膜信息传递密切相关。这些因素在多种基因的调控下才能完成肿瘤细胞在淋巴道转移的黏附、降解和移动。调控肿瘤侵袭转移的基因包括：编码基因的表达；癌基因的激活和抑癌基因的失活；肿瘤转移相关基因的激活和肿瘤转移抑制基因的失活。其中，对肿瘤转移抑制基因的研究成为近几年医学研究的热点。
KAI1/CD82又称抗癌基因，是近年来新发现的一个肿瘤转移抑制基因，与ECadherin同属于TM4SF成员。TM4SF分子可与整和素形成复合体，调节整和素的粘附功能，并影响整和素介导的细胞转移。而细胞间质粘附能力的下降是肿瘤转移的前提条件。正常细胞表面存在多种介导细胞之间、细胞与细胞外基质之间的粘附分子，细胞通过其粘附分子的胞外部分与骨架蛋白相连，从而将细胞外信号传入细胞内，其中任何一个环节的缺失都可能使细胞的粘附能力下降，导致肿瘤细胞从瘤体上脱落下来。许多研究表明，在人类许多恶性肿瘤如前列腺癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、食管癌、头颈部鳞癌等，原发癌组织中KAI1/CD82表达与淋巴结转移显著相关[48]；在胃癌、肝癌、非小细胞肺癌、肿瘤、结肠癌、乳腺癌等恶性肿瘤组织中均不同程度地有ECadherin表达下调或不表达，且ECadherin在多种肿瘤中的表达和肿瘤的生长、、临床分期、和淋巴结转移等生物学特性密切相关[912]。
本实验结果显示，在89例宫颈组织中，KAI1/CD82和ECadherin的表达之间呈显著正相关,而且二者在宫颈鳞癌中的共表达下调与淋巴结转移的之间明显相关，提示KAI1/CD82可能与膜蛋白ECadherin相互作用抑制了原发肿瘤的侵袭、浸润。
本实验采用Logist多元回归分析，评价与淋巴结转移相关的6个因素在宫颈癌淋巴结转移中的作用强度，结果显示ECadherin、浸润深度、临床分期较KAI1/CD82、病理分级、癌灶大小更能影响宫颈癌淋巴结的转移状况。此结果说明上述6者虽然都为肿瘤转移相关因素，但在肿瘤转移中所起到的作用强度不同。提示ECadherin基因、肿瘤自身的特性(浸润转移能力)以及多种基因相互作用可能在肿瘤转移中更为关键。
：
[1]王川，张祥福，杨发端，等. nm23基因产物/NDPK在大肠癌中的表达及其临床意义 [J]. 中华病杂志, 1995,24(6):356358.
[2]Mashimo T, Waabe M, Hirota S, et al. The expression of the KAI1 gene， a tumor metastasis suppressor, is directly activated by p53 [J]. Proc Natl Acad Sci USA, 1998, 95(19):11307.
[3]Jackson P, Grimm MO, Kingsley EA, et al. Relationship between expression of KAI1 m3etastasis suppressor gene, mRNA levers and p53 in human bladder and pristate cancer cell lines [J]. Urol Oncol, 2002,7(3):99.
[4]Maurer CA, Graber HU, Friess H, et al. Reduced expression of the metastasis suppressor gene KAI1 in advanced colon cancer and its metastases [J]. Surgery, 1999,126(5):869880.
[5]Hashida H, Takabayashi A, Tokuhara T, et al. Clinical significance of transmembrane 4 superfamily in colon cancer [J]. Br J Cancer, 2003, 89(1):158167.
[6]Muneyuki T, Watanabe M, Yamanaka M, et al. KAI1/CD82 expression as a prognosic factor in sporadic colorectal Cancer [J]. Anticancer Res, 2001, 21(95):35813587.
[7]Lombardi DP, Geradts J, Foley JF, et al. Loss of KAI1 expression in the progression of colorectal cancer [J]. Cancer Res, 1999, 59(22):57245731.
[8]Imai Y, Sasaki T, Shinagawa Y, et al. Expression of metastasis suppressor gene (KAI1/CD82 ) in oral squamous cell carcinoma and its clinicopathological significance [J]. Oral Oncol, 2002, 38(6):557.
[9]Fei Q, Zhang H, Chen X, et al. Defected expression of ECadherin in nonsmall cell lung cancer [J]. Lung Cancer, 2002, 37(2):147152.
[10]Chen HC, Chu RY, Hsu PN, et al. Loss of ECadherin expression correlates with poor differentiation and invasion into adjacent organs in gastric adenocarcinomas [J]. Cancer Letter, 2003, 201(1):97106.
[11]Siitonen SM, Kononen JT, Helin HJ, et al. Reduced Ecadherin expression is associated with invasiveness and unfavorable prognosis in breast cancer [J]. Am J Clin Pathol,1996,105:394402.
[12]Wahed A, Connelly J, Reese T. ECadherin expression in pleomorphic lobular carcinoma: an aid to differentiation from ductal carcinoma [J]. Ann Diagn Pathol, 2002, 6(6):349351.
