对血清HBV-DNA PCR荧光定量检测指导乙型肝炎治疗的分析
【关键词】 血清HBV-DNA,PCR
【摘要】 目的 采用PCR体外扩增法定量检测乙型肝炎病毒DNA的载量，为乙型肝炎的提供。方法 采用PCR体外扩增法定量检测乙型肝炎病毒DNA的载量，检测不同病程状态下的乙肝患者76例，血清标本196份。其中HBeAg阳性的患者30例,血清样本60份；HBeAb阳性慢性乙型肝炎（CHB）患者30例，血清样本60份；接受α-干扰素治疗后发生HBeAg血清学转换的患者11例，血清样本66份；急性乙型肝炎治愈患者5例，血清样本10份。结果 HBeAg阳性的血清中HBV-DNA水平为8.0×108copies/ml，明显高于HBeAg阴性患者的血清 中HBVDNA水平（为6.0×104copies/ml）和HBeAg血清学转换患者的HBV-DNA水平（为2.0×103copies/ml），康复患者HBV-DNA为阴性。结论 血清HBV-DNA PCR荧光定量检测方法可以作为判断HBV感染不同病程的有效指标，为指导乙型肝炎诊断、治疗提供参考。
【关键词】 PCR荧光定量检测；乙型肝炎
Management of HBV under HBV-DNA determined by fluorescence quantitative PCR
LI JUN,WU Hong.
The People's Hospital of Changzhi,Changzhi 046000,China
【Abstract】 Objective To study the relationship of HBV-DNA levels in serum and the infection states of patients by fluorescence quantitative PCR method and to provide more diagnosis，clinical assessment and treatment of patients with HBV.Methods FQ-PCR,was used to measure serum HBV-DNA from patients at different courses of disease.Results A total of 196 clinical serum samples were tested.In HbeAg-positive samples,the medium serum HBV-DNA levels (8.0×108copies/ml) was significantly higher than that of HBeAg-negative samples(6.0×104copies/ml) that for patients after HbeAg seroconversion(2.0×103copies/ml).Conclusion FQ-PCR is a valuable tool for identification of different states of HBV infection.
【Key words】 PCR quantitative analysis；hepatitis B
血清HBV-DNA PCR荧光定量检测作为评价HBV复制活跃性的标准方法，它对HBV感染者的评估、管理和抗病毒治疗等方面的重要性多有报道［1］。HBV感染机体后，体内可发生不同程度的转归，对帮助治疗，以制订个体化方案，了解乙型肝炎患者HBV感染情况很有必要［2］。笔者于2004年1~12月对76例患者（196份标本）应用血清HBV-DNA PCR荧光定量检测方法进行了定量检测，现资料报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 本研究检测了76例患者，女40例，男36例，年龄12~61岁，均为我科住院患者，共提供血清样本196份。将76例患者分成4组，第1组为HBeAg阳性患者30例，6个月内复检1次，血清样本60例。第2组为HBeAg阴性患者30例，6个月内复检1次，血清样本60例。第1组和第2组患者均进行一般保肝治疗［3］。第3组为接受α-干扰素治疗后发生HBeAg血清学转换的11例患者［2］，治疗过程中每月采血1次，共6次，血清样本66份。第4组为经治愈患者5例，6个月内复检1次，提供血清样本10份。
1.2 HBV相关指标测定 FQ-PCR HBV-DNA试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司生产，HBVM ELISA试剂盒由华美生物工程生产。各种检测均严格按照试剂盒使用说明书操作。
1.3 统计学方法 4组患者血清HBV-DNA荧光定量检测结果均均值（copies/ml），比较分析使用Mann-Whitney U检验，P<0.05为差异有显著性。
2 结果
第1~4组患者HBVm血清学指标见表1，FQ-PCR HBV-DNA水平，见表2。第1组中血清HBV-DNA水平最高，均值为8.0×108copies/ml，其中1例血清HBV-DNA水平（6.0×104copies/ml）低于第2组血清HBV-DNA最高水平（5.0×105copies/ml）。第3组患者有2例(12份血清)HBV-DNA载量在检出限量以下,且该组最高HBV-DNA水平为4.0×105copies/ml。第4组治愈患者血清HBV-DNA水平均低于检出限量以下。第1组患者血清HBV-DNA水平均值明显高于2组患者血清HBV-DNA水平（P<0.001）和第3组患者血清HBV-DNA水平(P<0.001)。第2组和第3组患者血清HBV-DNA水平相当，差异无显著性（P>0.05）。表1 各组乙肝患者血清学标志表2 不同病程乙肝患者HBV-DNA水平比较 注:与1组比较,*P＜0.001；与2组比较，△P＞0.005
3 讨论
FQ-PCR是目前进行临床基因诊断的有力手段，它采用完全闭管检测，不需PCR后处理，避免了交叉污染，同时采用实时检测技术，每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数和原始模板数量完全呈线性相关，定量准确率极高，整个操作可在4~5h内完成，且具有敏感性高和重复性好的优点，使得区别乙肝病毒活动性和非活动性状态成为可能［1］。本研究表明，HBeAg阳性的CHB患者血清中HBV-DNA水平明显高于HBeAg阴性患者(P<0.001)［4，5］和经α-干扰素HBeAg血清转换患者HBV-DNA水平（P<0.001），通过血清中HBV-DNA水平测定，还可以区别非活动性HBV携带者和CHB患者，对于康复患者还可以检测治疗恢复情况，总之，FQ-PCR能准确、灵敏地反映HBV感染和治疗恢复情况，它可以作为确认HBV感染不同病程状态的有效指标，可为指导乙型肝炎诊断、治疗提供。
【参考】
1 程刚，何蕴绍，周新宇.荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒.中华检验医学杂志，1999，22（3）：135.
2 张宜俊.慢性乙型肝炎抗病毒治疗的浅见.传染病信息，2002，3：102.
3 中华医学会传染病与寄生虫病学分会.肝病学分会联合修订.病毒性肝炎防治的方案.中华传染病杂志，2001，19（1）：56-62.
4 陈志群.慢性肝炎血清HBV标志与肝组织的HBsAg关系.南空卫生，1989，（2）：25.
5 陈志群.HBeAg和抗HBe阳性慢性活动性乙型肝炎患者活动的比较.南空卫生，1990，（4）：29.
