泊洛沙姆在全自动血液分析仪鞘液中的应用

          作者：刘更夫 龚永启 骆明波

【摘要】  　　目的：研究泊洛沙姆（Poloxamex）在SE?9000全自动血液分析仪用自制鞘液中的应用。方法：用优选出的泊洛沙姆最佳浓度及其它成分自制成试验鞘液，对进口配套的全血质控物进行准确度、精密度分析，以此评价自制鞘液的性能。结果：含有泊洛沙姆成分的自制试验鞘液，对进口配套全血质控物测得的各项质量控制指标，其均值WBC：7.09G/L，RBC：4.39T/L，Hb:131g/L,HCT:38.5L/L,PLT:227G/L,MCV:87.7fl,MCH:29.9pg,MCHC:341g/L,均处于质控物允许范围内；其标准差和变异系数分别是WBC：0.16，2.3；RBC：0.05，1.1；Hb：1.15，0.88；HCT：0.34，0.88；PLT：6.6，2.9；MCV：0.44，0.5；MVH：0.26,0.87;MCHC:2.6,0.76,均低于仪器生产厂家和CLIA'88的要求；自制试验鞘液的空白背景计数值WBC:0.05G/L,RBC:0,Hb:0,PLT:3G/L,IMI:0,DIFF:0,EO:0,BASO:0，均低于仪器生产厂家的限定值。结论：含有泊洛沙姆成分的自制试验鞘液，其性能符合仪器生产厂家和CLIA'88的质量控制要求，能替代国外同类产品用于SE?9000全自动血液分析仪的配套使用。

【关键词】  泊洛沙姆　鞘液　质量控制

　　Use of Poloxamex of Self?made Sheath Reagent for Fully Automatic Hemocyte Analyzer

　　Abstract  Objective: To investigate use of poloxamex of self?made sheath reagent for fully automatic hemocyte analyzer. Methods: A series of comparisons between the self?made sheath reagent and imported reagents were carried out. Results: The value of WBC, RBC, Hb, HCT, PLT, MCV, MCH, MCHC was 7.09G/L, 4.39T/L, 131 g/L, 38.5L/L, 227G/L, 87.7 fl, 29.9 pg, 341 g/L, respectively, was within the working range of the criteria of quality control. The standard deviation and variance coefficient were lower than the requirements of the manufacturer and Clinical Laboratory Improvement Amendment 88, respectively. The countable value met the requirements of the manufacturer. Conclusions: The self?made sheath reagents can be used to replace the imported reagent for SE?9000 fully automatic hemocyte analyzer.

    Key words   poloxamex;  sheath;  quality control 

　　泊洛沙姆（Poloxamex）为聚氧乙烯、聚氧丙烯醚嵌段共聚物，其通式为HO（C2H4O）a（C3H6O）b（C2H4O）C H，其中a、c为2～130，b为15～67，含聚氧乙烯81.8%±1.9%，分子量不等，是一种新型的高分子非离子表面活性剂。作为一种优良的药物制剂新辅料，被广泛用于制药、人工血液、人工泪液，对人体正常的生理机能及体内微循环无不良影响［1，2］。其在临床体外诊断试剂中的应用尚未见报道。我们利用其优良的稳定性、增溶性等特点，将其运用于全自动血液分析仪鞘液的研制中，并对该自制试剂作了质量控制分析及评价。

　　1  材料与方法

　　1.1  仪器

    SE?9000全自动血液分析仪、FA1104万分之一天平。

　　1.2  配套试剂

    SE?9000全自动血液分析仪原装配套试剂及全血质控物。

　　1.3  自制试剂

    药用辅料泊洛沙姆（Poloxamex）、聚山梨酯?80（ Tween?80 ）、十二烷基硫酸钠（ SDS ）、三羟甲基氨基甲烷（ Tris ）。先配制缓冲液再配制不同种类、不同含量的试验鞘液，室温保存半年后进行试验。

　　1.4  方法

    试验前请仪器生产厂家的专业技术人员对SE?9000全自动血液分析仪进行保养及校准，确认仪器各项技术指标均在其允许的波动范围内。以自制试验鞘液替代配套的进口鞘液，对配套的进口全血质控物进行分析，将血小板计数、血小板直方图、血红蛋白含量作为观察指标，最后确定药用辅料的种类及其最佳浓度。

    用优选出的药用辅料及其最佳浓度配制成的试验鞘液，替代进口配套鞘液，以进口配套的全血质控物为分析样品，通过准确度、精密度指标全面评价自制试验鞘液的性能。

　　2  结果

    用不同种类以及同种不同浓度药用辅料自制的试验鞘液，对全血质控物进行可行性分析，结果见表1。含Tween?80、SDS的试验鞘液虽能完成Hb含量测定以及PLT计数，但每个浓度下测得的Hb均有偏低；同时PLT计数明显升高，直方图异常或无直方图。含泊洛沙姆的试验鞘液虽测得的Hb在允许范围内，但其在0.4g/L浓度时测量的PLT计数及直方图中均不理想，在1.2g/L浓度时PLT的计数也不在仪器的允许范围内，只有泊洛沙姆的浓度在0.6g/L、0.8g/L、1.0g/L时的试验鞘液能满足我们试验规定的要求。表1  不同浓度不同药用辅料试验鞘液的试验结果（略）

   
　　用优选出的药用辅料泊洛沙姆及其最佳浓度自制的试验鞘液，替代进口鞘液对进口配套的全血质控物进行准确度及精密度分析，结果见表2。美国临床实验室改进修正案1988最终法规（CLIA'88）及仪器生产厂家对血液分析仪的允许误差［4，5］见表2。表2  自制的试验鞘液准确度及精密度结果（略）
   
　　以泊洛沙姆最佳浓度自制的试验鞘液，替代进口配套鞘液进行空白背景计数，结果见表3。仪器生产厂家对血液分析仪的空白背景计数性能要求见表3。表3  进口及自制的试验鞘液空白背景计数结果（略）

　　3  讨论

    在全自动血液分析仪用鞘液的研制过程中，我们选用了两种、三个类型制药中常用的药用辅料（Poloxamex属高分子非离子表面活性剂、Tween?80属非离子表面活性剂、SDS属阴离子表面活性剂）作为试验品，观察它们在体外诊断试剂中的作用。全血动血液分析仪在对抗凝血（抗凝剂通常是EDTA?K2或EDTA?K3）进行分析时，不仅要对不同的血细胞进行记数、分类，还要对不同血细胞的形态、体积大小以绘制直方图的形式告知血细胞的信息。这除了对仪器的设计制造有要求外，配套的诊断试剂的质量也是血液分析仪能否正常工作的关键。试验中观察到Tween?80、SDS虽能完成Hb含量测定以及PLT计数，但每个浓度下测得的Hb均有偏低；同时PLT计数明显升高，直方图异常或无直方图。因此这两种药用辅料不适应SE?9000全自动血液分析仪鞘液的使用。泊洛沙姆虽测得的Hb均在质控物的允许范围内，但其在0.4g/L浓度时测量的PLT计数及其直方图中均不理想，在1.2g/L浓度时PLT的计数也不在质控物的允许范围内，只有在0.6g/L、0.8g/L、1.0g/L浓度时能满足试验的要求。考虑到在完成全血血细胞计数后需对仪器内部各计数通道、稀释器等零部件的冲洗作用，最终以泊洛沙姆1.0g/L的浓度作为优选浓度。用自制鞘液替代进口配套的鞘液，在SE?9000全自动血液分析仪上对其配套的进口全血液质控物在一天内进行连续20次测定。结果表明：有溯可源的、有法规依据的5个质控参数指标［4］（WBC、RBC、Hb、HCT、PLT），其均值处在全血质控物的允许的范围内，其标准差小于CLIA'88法规的最大标准差，符合CLIA'88法规的质量控制要求；其他3个质控参数指标（MCV、MCH、MCHC）的均值亦在全血质控物的允许范围内，其变异系数小于仪器厂家生产的规定值。准确度、精密度符合仪器生产厂家对仪器、试剂的要求。

    全自动血液分析仪是由仪器内部不同的通道、稀释器、传感器等协同完成分析的，为避免仪器内部、外部因素等对其工作性能的影响，仪器生产厂家对许多测定指标设定了一个空白背景计数要求，见表3。只有在仪器开机确认空白背景计数符合要求时，仪器才能准确及时地对血液进行全面的分析。我们用自制的试验鞘液替代进口配套的鞘液进行了空白背景计数，并与进口配套的鞘液的空白背景计数作了对比分析，结果表明，自制试验鞘液和进口鞘液各项指标的空白背景计数均低于仪器生产厂家的要求，符合仪器正常工作的要求。

    泊洛沙姆首先由美国成功生产，产品无毒，对皮肤、粘膜无剌激，其物理性质稳定，0.1%～5%的水溶液能耐热灭菌和低温冰冻，具有良好的低温性能，这和其自身具有的热敏溶胶?凝胶转变特性有关，即低于人的体温时，表现为溶胶特性，接近人的体温时则表现为凝胶特性［5］。因此自制鞘液对环境的贮藏要求很低。自制试验鞘液不必像进口配套鞘液那样使用前需振摇数次，开启包装后的保质期长于进口配套鞘液，这可能是自制试验鞘液中的溶质被包裹在以泊洛沙姆为其基质的胶囊中，溶解性、稳定性均有提高的原因。进口配套的鞘液价格昂贵，且其中成分不详，对我国环境有无污染及危害均属未知。而自制鞘液成本只是进口配套鞘液的几十分之一，对人体、环境无害，试验结果准确可靠，精密度良好，具有良好的可比性，是符合当今可持续性、节约型社会要求的体外诊断试剂。我们的研究试验表明：自制鞘液可替代进口配套的鞘液运用于SE?9000全自动血液分析仪。

【】
  　　1 娄月芬，王晶，马佳珍，等.生物可降解的聚合物纳米粒的研究进展.医药导报，2005，24（4）：309.

　　2 王欣欣，张红梅，霍斌.泊洛沙姆在药学中的应用，中华实用医药杂志，2003，3（5）：271.

　　3 钱士匀，主编.临床生物化学和生物化学检验实验指导.第2版.北京：人民卫生出版社，1999，309.

　　4 王昌富，王治国，李艳，主编.临床检验科的建设与管理. 第1版.湖北：湖北技术出版社，2005，199；203.

　　5 凌昌全，郑小梅，李柏.不同剂型斑蝥素肝脏注射急性毒性分析.中成药，2000，22（10）：501.