乳腺癌组织中核转录因子NF?κB和抑癌基因p53的表达及其意义
作者：邓元, 张学斌, 王鸿雁, 张冠军, 张群岭, 王敏
【摘要】 目的 探讨乳腺癌组织中核转录因子NF?κB和抑癌基因p53的表达及意义。方法 用免疫组织化学方法检测NF?κB p65和p53蛋白在58例乳腺癌和20例乳腺增生症组织中的表达。结果 乳腺癌中NF?κB表达明显高于乳腺增生症组织，NF?κB表达强度与组织学分级和腋窝淋巴结转移有关，与患者年龄、肿瘤大小、组织学分型无关。乳腺癌中p53蛋白表达明显高于乳腺增生症，p53蛋白的表达与乳腺癌组织学分级有关，与患者年龄、肿瘤大小、组织学分型、淋巴结转移无关。NF?κB p65与p53蛋白在乳腺癌组织中表达呈正相关（r=0.302，P＜0.05）。结论 提示乳腺癌中NF?κB和p53蛋白的表达与乳腺癌的发生有关。
【关键词】 乳腺癌；NF?κB；p53蛋白；免疫组织化学
Abstract：Objective To study the expression and significance of nuclear transcription factor?κB(NF?κB) and tumor suppressor gene p53 protein in breast cancer.Methods Immunohistochemical staining was used to detect the expression of NF?κB p65 and p53 protein in 58 cases of breast cancer and 20 cases of proliferative breast disease.Results The expressive degree of NF?κB in breast cancer was significantly higher than in proliferative breast disease. The positive intensities of NF?κB was associated with histologic grading and axillary lymph node metastasis，but was not associated with age, tumor size, and histological type. The expressive degree of p53 is significantly higher than in proliferative breast disease. The positive intensities of p53 were associated with histologic grading, but were not associated with age, tumor size, histological type and axillary lymph node metastasis. The expression of NF?κB and p53 protein were significantly positive correlated in breast carcinoma （r=0.302，P＜0.05）.Conclusion It is suggested that the abnormal expression of NF?κB and p53 are associated with the pathogenesis and development of breast cancer.
Key words：Breast carcinoma; NF?κB; Tumor suppressor gene p53; Immunohistochemistry
0 引言
核转录因子NF?κB是一种具有多向调节功能的转录因子，可调控细胞增殖、分化、凋亡及恶性转化[1,2]，NF?κB p65是NF?κB的活化成分，在肿瘤的发生、发展中起重要作用。p53基因是一种重要的抑癌基因，它的突变、缺失或失活可导致肿瘤的发生。我们采用免疫组化法检测乳腺癌组织中NF?κB和p53蛋白的表达，探讨二者间的相互关系及预后意义。
1 材料与方法
1.1 材料
选取本院1994～1999年间58例乳腺癌切除标本存档蜡块，患者均为女性，年龄30～86岁，平均51.8岁。肿瘤直径1～10cm；腋窝淋巴结转移阳性38例，阴性20例。术前均未做过。按WHO标准对各病例进行分型和分级，其中浸润型导管癌47例，浸润型小叶癌5例，髓样癌4例，粘液腺癌2例。组织学Ι级 6例，Ⅱ级40例，Ⅲ级12例。TNM分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期38例，Ⅲ期13例。另选取同期20例乳腺增生症患者的标本存档蜡块，患者年龄32～47岁，平均33.8岁。标本经10%中性甲醛固定，4μm厚切片，进行HE染色及免疫组化染色。
1.2 试剂和方法
鼠抗人NF?κB p65单克隆抗体为美国santa cruze 公司产品，抗体稀释浓度为1∶50；鼠抗人p53单克隆抗体为工作液。一抗及免疫组化试剂盒均购自北京中衫金桥生物技术公司。采用柠檬酸钠缓冲液热抗原修复，SP法免疫组织化学，以已知阳性片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判断
NF?κB阳性染色定位于细胞质中，p53阳性染色定位于细胞核。染色为黄色或棕褐色颗粒。每例均随机观察5个高倍视野（×400），对每例切片，半定量积分法判断结果。阳性细胞＜5%为0分。6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分；阳性强度黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。两者积分相乘，0分为阴性（-），1～4分为弱阳性（+），5～8分为中度阳性（++），9～12分为强阳性（+++）。
1.4 统计学方法
运用SPSS10.0 软件进行统计学处理。采用χ2检验及Spearman相关分析，以P＜0.05判为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 乳腺癌及乳腺增生症中NF?κB p65和p53的表达
58例乳腺癌中NF?κB p65阳性36例，见图1，阳性率为62.1%，20例乳腺增生症中NF?κB p65阳性3例，阳性率为15%。两者之间差异有统计学意义（P＜0.05）。58例乳腺癌中p53蛋白阳性27例（见图2），阳性率为46.6%，20例乳腺增生症中p53蛋白均为阴性。两者之间差异有统计学意义（P＜0.05）。
2.2 NF?κB p65和p53表达与乳腺癌临床病理特征的关系
NF?κB p65的表达与组织学分级有关，Ⅲ级分化组NF?κB p65表达阳性率高于Ⅰ～Ⅱ级分化组，组织学分级越高，NF?κB p65阳性表达率越高，之间有统计学意义（P＜0.05）；NF?κB p65的表达也与淋巴结转移有关，有淋巴结转移组NF?κB p65表达阳性率高于无淋巴结转移组，二者之间差异有统计学意义（P＜0.05）。随着临床分期的增高，NF?κB p65表达阳性率有增高趋势，但各期之间差异无统计学意义（P＞0.05）。NF?κB p65表达与患者年龄、肿瘤大小、组织学分型之间无明显相关性（P＞0.05）。p53蛋白的表达与乳腺癌组织学分级有关，Ⅲ级分化组p53蛋白表达阳性率高于Ⅰ～Ⅱ级分化组（P＜0.05）；随着临床分期的升高，p53蛋白表达阳性率逐渐增高，但各期之间无统计学差异（P＞0.05）；有淋巴结转移组的p53蛋白表达高于无淋巴结转移组，但之间无统计学差异（P＞0.05）；p53蛋白表达与患者年龄、肿瘤大小、组织学分型之间无相关性（P＞0.05），见表1。
表1 乳腺癌组织中NF?κB和抑癌基因p53的表达（略）
2.3 乳腺癌中NF?κB p65和p53蛋白的表达与雌激素受体（ER）状态的关系
本组有28例患者进行了ER检测，其中ER阳性患者组NF?κB p65表达阳性率为52.9%，ER阴性患者组NF?κB p65表达阳性率为63.6%，两者间差异无统计学意义（P＞0.05），表明NF?κB p65表达与ER状态无关。ER阳性患者组p53蛋白表达阳性率低，ER阴性患者组p53蛋白表达阳性率高，但之间无统计学差异（P＞0.05），显示ER与p53蛋白表达之间无相关性。
2.4 乳腺癌中NF?κB p65和p53的表达的关系
36例NF?κB p65阳性表达的乳腺癌组织中，有21例p53蛋白表达为阳性，二者呈正相关（r=0.302，P＜0.05）。
3 讨论
核转录因子NF?κB是一类重要的转录因子，由p50和p65两个亚基组成，通常以同源或异源二聚体的非活性形式存在于几乎所有细胞的胞质中，只有被激活后，才从细胞质转位于细胞核发挥重要的作用。多种因素可激活NF?κB，如肿瘤坏死因子、白介素、生长因子、病毒或细菌及其产物等。活化的NF?κB在肿瘤发生中的作用机制与它抗凋亡及促进细胞生长等有关[3]。在一些肿瘤如乳腺癌、胰腺癌、霍奇金淋巴瘤等发现NF?κB的活化[2，4]。NF?κB在乳腺癌中的表达及预后意义，目前国内只有少数报道。
本研究表明，NF?κB p65的表达水平在乳腺癌中明显高于乳腺增生症。表明NF?κB p65异常表达与乳腺癌的发生发展过程有关。NF?κB p65通过提高促进细胞增殖和抑制凋亡基因的表达，引起细胞恶性转化。我们的研究还发现，NF?κB p65的表达水平与乳腺癌的组织学分级及淋巴结转移紧密相关，组织学分级越高，NF?κB p65表达阳性率越高。王宏等[5]研究发现NF?κB可激活乳腺癌MMP?9基因的表达，而MMP?9在肿瘤的生长、侵袭转移过程起重要作用。本研究表明乳腺癌中有淋巴结转移者，NF?κB p65表达阳性率较高，说明NF?κB可通过提高MMP?9的表达促进肿瘤转移。因此，NF?κB p65高表达患者预后不良，可作为评判乳腺癌预后的指标。随临床分级的增高，NF?κB p65表达率有增高趋势。本研究亦表明乳腺癌中NF?κB p65的表达水平与患者年龄、肿瘤大小及雌激素受体状态无明显相关性。
p53基因是人类肿瘤中突变率最高的抑癌基因，p53基因分为野生型和突变型。突变型p53基因是促癌基因，它能和野生型亚单位形成寡聚复合物而阻止野生型p53基因抑制肿瘤形成的功能，引起细胞转化、癌变[6]。野生型p53基因半衰期短，突变型p53半衰期长，用免疫组化法检测到的是突变型p53[7]。本研究结果显示,乳腺增生症中p53蛋白均为阴性，而乳腺癌中突变型p53蛋白的表达率为46.6%，二者之间差异有统计学意义（P＜0.05）。提示p53的过度表达与乳腺癌的发生有关。p53蛋白的表达与乳腺癌组织学分级有关，Ⅲ级分化组p53表达阳性率高于Ⅰ～Ⅱ级分化组（P＜0.05）。p53蛋白的表达与临床分期、淋巴结转移、雌激素受体无明显相关性（P＞0.05），p53表达率随临床分期的增高、有淋巴结转移而增高，与文献报道结果一致[8]。
本组研究亦表明，NF?κB p65与抑癌基因p53在乳腺癌中的表达呈正相关，p53提示NF?κB p65的异常表达与p53基因突变均参与了乳腺癌的发生发展。关于NF?κB p65在乳腺癌组织中与抑癌基因p53调节失控的相关性机制，目前尚不清楚，可能是由于NF?κB的异常激活导致p53基因调节失控，也可能是由于p53基因突变通过激活NF?κB信号传导通路，使其转录活性增强而引起异常表达，尚需进一步研究。
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