p57KIP2、cyclin D1和cyclin E在宫颈鳞癌中的表达及意义
作者：周正平，肖庆邦，冉丰丰，王进京，郑洪
【摘要】 目的探讨p57KIP2、cyclin D1及cyclin E蛋白在宫颈癌发生、中的作用。方法用免疫组织化学SP法检测100例宫颈鳞癌、60例宫颈上皮内瘤变和30例正常宫颈鳞状上皮组织中p57KIP2、cyclin D1和cyclin E蛋白的表达情况。结果cyclin D1、cyclin E蛋白在宫颈SCC与NE、CIN与NE组织中阳性表达率之间比较、cyclin E蛋白在宫颈SCC与CIN组织中阳性表达率之间比较，差异均有显著性(P<0.01)； cyclin D1与cyclin E之间的表达呈正相关(P<0.01)；三者表达均与组织学分级、淋巴结转移、患者年龄无关(P>0.05)。结论p57KIP2、cyclin D1及cyclin E蛋白共同参与了宫颈癌的发生发展。cyclin D1和cyclin E蛋白高表达可能是宫颈组织恶变的重要生物学标志，cyclin E异常表达是宫颈癌发生的早期事件。
【关键词】 宫颈癌；免疫组织化学；p57KIP2；cyclin D1；cyclin E
1资料与方法
1.1标本来源收集遵义医学院附属病理科1999年1月～2004年1月的宫颈活检或者手术确认的宫颈SCC标本100例(I级27例、II级48例、III级25例)，CIN60例(I级20例、II级20例、III级20例)。病人术前均未行放、化等。检出伴盆腔淋巴结肿大41例，其中伴盆腔淋巴结转移12例(每例平均检出淋巴结4.33枚)；患者年龄20～75岁，中位年龄45岁。随机选取30例正常宫颈鳞状上皮(Normal cervical squamous epithelium,NE)（均选自因子宫肌瘤行子宫切除术的宫颈上皮组织）作为试验对照组。
1.2试剂兔抗人p57KIP2多克隆抗体、鼠抗人cyclin D1单克隆抗体(DCS/6)、鼠抗人cyclin E单克隆抗体(13A3)，与SP试剂盒、DAB酶底物显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。3种抗体的工作浓度分别为1∶75、1∶100、1∶50。
1.3方法将存档的10%中性福尔马林固定、石蜡包埋，4μm厚连续切片，行HE染色和SP免疫组化染色。严格按照说明书操作步骤进行，DAB显色，苏木精复染。用迈新生物技术有限公司提供的阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗作空白对照。组织抗原均采用高压修复处理。
1.4结果判断p57KIP2、cyclin D1及cyclin E蛋白阳性信号呈棕黄色或棕褐色，均主要定位于细胞核，见图1～3。每张切片随机选取有肿瘤组织的不同高倍视野(×400)，计数2000个肿瘤细胞，根据阳性细胞数占所计数肿瘤细胞的百分率分为：(1)阴性(－)：阳性细胞数<5%；(2)弱阳性(+)：阳性细胞数为5%～24%；(3)阳性(++)：阳性细胞数为25%～49%；(4)强阳性(+++)：阳性细胞数≥50%。
1.5统计学处理所得数据采用SPSS11.0统计软件，应用χ2检验、Fisher确切概率法及配对四格表进行统计学处理。
2结果
2.1p57KIP2、cyclin D1及cyclin E在宫颈SCC、CIN、NE中的表达cyclin D1、cyclin E蛋白在宫颈SCC与在NE中阳性表达率之间比较、在CIN与在NE中阳性表达率之间比较、以及cyclin E蛋白在宫颈SCC与在CIN中阳性表达率之间比较差异均有统计学意义(P<0.01)；p57KIP2蛋白在宫颈SCC与在CIN、NE中阳性表达率之间比较、以及在CIN、NE组织中阳性表达率之间比较、cyclin D1在宫颈SCC与在CIN中阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。
2.2p57KIP2、cyclin D1及cyclin E蛋白在宫颈SCC中的表达与临床病理特征的关系在宫颈SCC组织中，随着组织学分级的增加，p57KIP2蛋白的阳性表达率逐渐降低，cyclin D1蛋白阳性表达率在组织学Ⅰ级组高于组织学Ⅱ、Ⅲ级组， cyclin E蛋白的阳性表达率在组织学Ⅲ级组高于组织学Ⅰ、Ⅱ级组，但差异均无统计学意义(P>0.05)；在盆腔淋巴结转移阳性组，p57KIP2蛋白的阳性表达率低于淋巴结转移阴性组，cyclin D1、cyclin E蛋白阳性表达率均明显高于淋巴结转移阴性组，但差异均无统计学意义(P>0.05)；p57KIP2、cyclin D1、cyclin E蛋白的表达均与患者年龄无关(P>0.05)，见表2。
2.3p57KIP2、 cyclin D1和cyclin E蛋白在宫颈鳞癌组织中表达的相互关系根据配对四格表分析， p57KIP2与cyclin D1之间、 p57KIP2与cyclin E之间的阳性表达均无相关性(χ2=0.958、 χ2=0.928， P表1p57KIP2、cyclin D1、cyclin E蛋白在宫颈SCC、CIN、NE中的表达组织学
3讨论
在哺乳动物细胞中，细胞的正常增殖受到严格的调控。一旦细胞周期调控失常，就会导致肿瘤的恶性增生[1]。p57KIP2是1995年由Shuhei等[2]用双杂交系统克隆出来，定位于人染色体11p15.5，编码316个氨基酸残基的多肽，分子量为57KD的蛋白质，属于CKIs，负向调控G1期和S期细胞周期进程，是一种肿瘤抑制基因。在许多人类恶性肿瘤存在着染色体11p15.5等位基因高频的杂合性丢失(LOH)[3,4]。Yasuhiro等[5]研究90例肝细胞肝癌和66例肝良性病变，周正平等[6]研究64例乳腺浸润性导管癌，均发现p57KIP2蛋白在恶性肿瘤组织中的表达明显低于良性病变，尤其在病程进展期、低分化组织、伴淋巴结转移、高的增殖指数以及cyclin D1、cyclin E蛋白过表达的癌组织中低表达。本研究结果显示，在宫颈CIN及NE中，p57KIP2蛋白的阳性表达率均高于在SCC中的阳性表达率；SCC组织分化差的病例中阳性表达率低于分化好者；盆腔淋巴结转移阳性组阳性表达率低于阴性组；高龄组患者阳性表达率高于年龄较小组，但差异均无统计学意义(P＞0.05)。提示p57KIP2蛋白在宫颈癌的发生过程中发挥着一定的作用。p57KIP2蛋白过表达对宫颈上皮细胞的异常增殖可能有一定阻抑作用，其低表达则可能解除其抑制细胞生长的作用，导致细胞异常增殖，甚至发生恶性转化。cyclin D1定位于人染色体11q13，编码由295个氨基酸构成、分子量为34 KD的蛋白质[7]。cyclin E是1991年由Andrew等[8]发现的，定位于人染色体19q12～19q13，编码分子量为50 KD的蛋白质。一些研究显示，cyclin D1基因蛋白的过表达与恶性肿瘤的预后不良有关[9]，cyclin E基因蛋白过表达与胰腺癌的发生、淋巴结转移有关[10]。本研究显示，在NE中，cyclin D1与cyclin E蛋白均呈低表达，在CIN中的阳性表达率逐渐增高，在SCC中明显增高(P＜0.01)，cyclinD1与cyclin E蛋白的阳性表达之间呈正相关(P＜0.01)。在SCC中，cyclin D1蛋白阳性表达率在组织学Ⅰ级组高于组织学Ⅱ、Ⅲ级组，cyclin E蛋白的阳性表达率在组织学Ⅲ级组高于组织学Ⅰ、Ⅱ级组，但差异均无统计学意义(P>0.05)；cyclin D1、cyclin E蛋白的阳性表达率均与盆腔淋巴结有无转移、患者年龄无关(P>0.05)。提示cyclin E蛋白的异常表达是宫颈癌发生的早期事件，cyclinD1与cyclin E蛋白的异常表达可能协同促使宫颈上皮细胞过度增生，最后发生恶性转化。因此，cyclinD1与cyclin E蛋白可以作为评估宫颈上皮组织发生恶性转变的生物学指标。本研究结果提示，p57KIP2蛋白低表达、cyclin D1和（或）cyclin E蛋白高表达，可能导致宫颈上皮细胞增殖周期调控失常，从而使细胞发生无限制增殖及异常分裂，最后导致宫颈上皮细胞恶性转化，甚至发生淋巴结转移。
【】
［1］Charles J, Sherr. The Pezcoller Lecture: Cancer Cell Cycles Revisited[J]. Cancer Research,2000,60（14）:3689?3695.
[2]Shuhei Matsuoka,Michael C Edwards,Chunyan Bai,et al. p57KIP2, a structurally distinct member of the p21CIP1 Cdk inhibitor family,is a candidate tumor suppressor gene[J].Genes Dev,1995,9（6）:650?662.
[3]Pumin Zhang,Nanette J Liegeois,Calvin Wong,et al. Altered cell differentiation and proliferation in mice lacking p57KIP2 indicates a role in Beckwith?Wiedemenn syndrome[J]. Nature,1997,387（6629）:151?158.
[4]Tarlochan Nijjar,Don Wigington,James C Garbe Garbe,et al. p57KIP2 Expression and Loss of Heterozygosity during Immortal Conversion of Cultured Human Mammary Epithelial Cells[J].Cancer Research,1999,59（20）:5112?5118.
[5]Yasuhiro Ito, Tsutomu Takeda,Masato Sakon,et al.Expression of p57KIP2 protein in hepatocellular carcinoma[J].Oncology,2001,61(3):221?225.
[6]周正平,王进京,肖庆邦,等.乳腺浸润性导管癌中cyclin D1、p57KIP2的表达及意义[J].肿瘤防治研究,2005,32(8):476?478.
[7]Toru Motokura,Theodora Bloom,Hyung Goo Kim,et al.A novel cyclin encoded by a bcl1?linked candidate oncogene[J].Nature,1991,350（6318）:512?515.
[8]Andrew Koff,Fred Cross,Alfred Fish,et al.Human cyclin E,a new cyclin that interacts with two members of the CDC2 gene family[J]. Cell,1991,66（6）:1217?1228.
[9]Robert L Sutherland,Elizabeth A Musgrove.cyclin D1 and mammary carcinoma:new insights from transgenic mouse models[J].Breast Cancer Res,2002,4(1):14?17.
[10]Hui Yue, Hui?Yong Jiang.Expression of cell cycle regulator p57kip2, cyclinE protein and proliferating cell nuclear antigen in human pancreatic cancer: An immunohistochemical study[J].World J Gastroenterol,2005,11(32):5057?5060.
