上皮性卵巢癌中内皮抑素与血管内皮生长因子的表达
作者：程丽，隋丽华，刘梅梅，李文辉
【关键词】 内皮抑素； 血管内皮生长因子；卵巢肿瘤；免疫组织化学
0引言
肿瘤侵袭和转移与肿瘤新生血管的生成密切相关。内皮抑素(Endostatin)是近期发现的血管生成抑制剂，它能选择性地抑制内皮细胞的增殖并可诱导其凋亡[1]。血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor, VEGF）是目前发现的最为关键的血管形成刺激因子，在实体瘤的发生中发挥着重要作用[2]，它能提高血管的通透性，引起血浆蛋白外渗，为新生血管提供必需的基质。本试验采用免疫组化方法对上皮性卵巢癌的Endostatin和VEGF蛋白的表达进行检测，旨在探讨两者在上皮性卵巢癌中的表达和意义。
1资料与方法
1.1标本来源48例标本取自哈尔滨医科大学附属第三1995~1999年卵巢癌肿瘤细胞减灭术手术切除标本，包括浆液性腺癌30例，粘液性腺癌12例，子宫内膜样癌6例。标本按国际妇产科联盟（FIGO）分期，Ⅰ、Ⅱ期18例，Ⅲ、Ⅳ期30例。标本按组织学分级分为G1 11例，G2 21例，G3 16例。所有患者术前均未接受化疗和(或)放疗。另取18例良性卵巢瘤组织和18例正常卵巢组织标本作为对照，所有标本均经100ml/L中性甲醛固定，常规石蜡包埋，4μm厚连续切片。
1.2免疫组化染色（SP法）兔抗人Endostatin多克隆抗体为美国Neomarkers公司产品，鼠抗人VEGF单克隆抗体购自北京晶美生物技术开发公司。SP试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。用已知阳性标本切片和磷酸盐缓冲液分别作阳、阴性对照，DAB显色，苏木精对比染色，光镜观察。
1.3判定标准
1.3.1Endostatin光镜下细胞胞浆显示为棕色，判断标准以高倍镜下随机选择5个视野中平均阳性细胞比例≥50%为高表达，＜50%为低表达。
1.3.2VEGF阳性细胞胞浆显示为棕黄色，也有的病例细胞膜同时表达。判断标准以高倍镜下随机选择5个视野中平均阳性细胞数所占比例计，阳性细胞比例≥10%为阳性表达，＜10%为阴性表达。
1.4 统计学处理采用SPSS10.0统计软件包处理数据；率的检验采用χ2检验；预后分析采用多因素COX比例风险模型以及单因素分析。
2结果
2.1各类卵巢组织中Endostatin 和 VEGF表达的比较恶性肿瘤内的Endostatin高表达率明显高于良性肿瘤和正常卵巢，差异有统计学意义（χ2=25.42,P<0.01）。VEGF在恶性肿瘤中的表达率明显高于良性肿瘤及正常卵巢，相比较差异有统计学意义（χ2=40.49,P<0.01）。良性与正常组织Endostatin的高表达率和VEGF的阳性表达率比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表1。
2.2Endostatin和VEGF在卵巢上皮性癌中的表达及其与临床病理的关系见表2。
2.3各临床、病理因素对卵巢恶性肿瘤预后的影响COX模型结果显示，在各因素中，仅临床分期与患者的总生存期密切相关，是一项独立的预后因素（P=0.022）,相关系数为0.959，晚期卵巢癌患者（Ⅲ、Ⅳ期）的预后差，而Endostatin高表达以及VEGF阳性表达与预后无关（P=0.91，P=0.68）。从相关系数来看Endostatin(r=0.212)和VEGF(r=0.198)蛋白的表达对生存时间的影响均无显著性。
表1各类卵巢组织中Endostatin和VEGF表达的相关性比较（略）
表2卵巢上皮性癌中Endostatin 和VEGF的表达及其与临床病理的关系（略）
2.4上皮性卵巢癌标本中Endostatin与VEGF表达的相关性两者同时高表达或阳性为26例，低表达或阴性为8例，而同时低表达和阳性为10例，高表达和阴性为4例，表明Endostatin和VEGF在上皮性卵巢癌组织中的表达间有相关性（χ2=5.56,C=0.322,P<0.05），而在正常卵巢组织中两者无相关性。
3讨论
肿瘤的生长和转移需要不断地有新生血管的生成， 抑制肿瘤血管生成可抑制肿瘤生长。 Endostatin是一种近年来发现的强有效的血管内皮细胞生长抑制剂。 有研究结果证实VEGF与卵巢恶性肿瘤的增殖、 浸润和转移密切相关。 本研究发现上皮性卵巢癌中Endostatin的高表达和VEGF的阳性表达与良性卵巢和正常卵巢组织相比较差异有统计学意义， 提示了来源于ⅩⅧ胶原的活性Endostatin 在病理性和生理性抗血管生成的生物学功能的差异。 此外还发现， Endostain在晚期（Ⅲ、 Ⅳ）卵巢癌患者中的表达强于早期（Ⅰ、 Ⅱ）卵巢癌患者， 这与Hata等[3]的研究结果相一致， Endostatin mRNA 表达量的变化与卵巢癌的临床分期有关。 提示了在卵巢癌疾病进展过程中， 机体内的调节系统会产生大量的Endostatin等血管生成抑制剂来抗衡机体内高水平的血管生成趋势以抑制肿瘤的生成。 Shen等[4]发现， 在卵巢肿瘤的各期中均有VEGF表达， 但表达的程度有显著差异。 这与本研究结果相一致， 即晚期（Ⅲ、Ⅳ）临床患者的VEGF表达高于早期（Ⅰ、 Ⅱ）临床患者。Brustmann等[5]报道VEGF阳性表达率还与肿瘤细胞有丝分裂活性呈正相关。 在上皮性卵巢癌组织中VEGF的表达与Endostatin呈正相关，表明在肿瘤生长过程中血管生成因子与抑制因子之间关系密切。两者的表达均随临床病期的进展而增加，可能是由于卵巢癌细胞为了满足其生长和浸润，产生了大量VEGF,机体内的调节系统同时也会产生大量的Endostatin来抗衡机体内高水平的血管生成，但是这种代偿作用仍不能达到正常生理状态，最终因为调节失衡导致肿瘤的侵袭和转移。有研究表明，Endostatin能下调肿瘤细胞VEGF mRNA 和蛋白的表达，通过减少内皮细胞一氧化氮合成酶（eNOS）在ser1177上磷酸化，抑制eNOS的激活，显著减少VEGF诱导的一氧化氮的释放，从而抑制VEGF介导的内皮细胞迁移和血管形成[6]。在卵巢癌中，Endostatin和VEGF的这种相互作用在卵巢癌的发生和进展中起着重要的作用。本实验结果提示：是否可以将外源性Endostatin应用于临床卵巢癌患者的，人为提高体内血管生成抑制剂表达来减缓或抑制肿瘤的生长，从而达到生物治疗卵巢肿瘤的目的。本研究尚需扩大病例标本例数进一步验证实验结果。
【】
［1］Sauter BV, Martinet O, Zhang WJ, et al. Adenovirus?mediated gene transfer of endostatin in vivo results in high level of transgene expression and inhibition of tumor growth and metastases[J]. Proc Natl Acad Sci U S A， 2000, 97(9):4802?4807.
[2]Du P, Wei J G, Li HP, et al. Expression of vascular endothelial growth factor in nude rat liver after planting human hepatocellular carcinoma cells [J]. Di si Junyi Daxue Xuebao (J Fourth Mil Med Univ), 2001,22(12):1085?1088.
[3]Hata K,Fujiwaki R,Nakayama K,et al.Expression of the Endostatin gene in epithelial ovarian cancer[J].Clin Cancer Res,2002,7(8):2405?2409.
[4]Shen GH,Ghazizadeh M,Kawanami O,et al.Prognostic significance of vascular endothelial growth factor expression in human ovarian carcinoma[J].Br J Cancer，2002,83(2):196?203.
[5]Brustmann H, Naude S. Vascular endothelial growth factor expression in serous ovarian carcinoma: relationship with high mitotic activity and high FIGO stage[J] . Gynecol Oncol, 2003，84(1):47?52.
[6]Hajitou A, Grignet C, Devy L, et al. The antitumoral effect of endostatin and angiostatin is associated with a down?regulation of vascular endothelial growth factor expression in tumor cells[J]. FASEB J，2003，16(13):1802?1804.
