应用组织芯片检测口腔鳞状细胞癌中KAI1的表达及意义

               作者：陈鲜，龚莉，周铁军，陈伟妍，陈宣世

【关键词】  KAI1； 原位杂交； SABC法； 组织芯片； 口腔鳞癌

　　0引言

　　KAI1（Kang ai 1）是一种肿瘤转移抑制基因，对多种肿瘤的转移具有抑制作用[1,2]，可作为判断肿瘤预后的转移预示因子之一[3,4]，并有可能为肿瘤的提供一个新的途径。本研究应用原位杂交、SABC法结合组织芯片技术检测了132例口腔鳞癌组织中KAI1/CD82及其mRNA的表达情况，从而探讨KAI1与口腔鳞癌的关系。

　　1资料与方法

　　1.1临床材料收集泸州医学院病理科2003～2005年间经病理确诊为口腔鳞癌的石蜡包埋组织共132例，其中不伴淋巴结转移96例，伴淋巴结转移36例，另选相对应的转移的淋巴结28例。患者年龄28～77岁，男75例，女57例。肿瘤分别位于颊、舌、牙龈、唇、口底。所有患者术前均未接受放化疗及其他抗肿瘤治疗，入院后行原发灶及颈部淋巴结清除术。术后根据国际抗癌联盟（1987）pTNM分期分为：Ⅰ期33例，Ⅱ期45例，Ⅲ期41例，Ⅳ期13例。按WHO细胞分化标准：高分化65例，中分化38例，低分化29例。另分别选取口腔黏膜白斑组织20例和癌旁正常口腔黏膜15例以作对照。

　　1.2组织芯片的制备

　　1.3原位杂交和免疫组化结果判定标准：采用双盲法对实验结果进行评定。KAI1 mRNA在石蜡切片中阳性染色主要位于细胞质，呈棕黄色；KAI1/CD82则以细胞膜上出现棕黄色细颗粒作为阳性染色。每例标本均随机选择10个高倍视野，连续记数300个肿瘤细胞中阳性细胞数，求其百分率；根据阳性细胞显色度分别记为：弱阳性：1分，中度阳性：2分，强阳性：3分。将阳性细胞百分率与显色度分数相乘为每例标本的最终显色结果，其中＞30%为阳性，≤30%为阴性。

　　1.4统计学方法采用χ2检验比较KAI1 mRNA和KAI1/CD82在各组间的差异及与临床病理参数的关系，检验水准α=0.05，均采用SPSS11.5软件包作统计学处理。

　　2结果

　　2.1KAI1基因在各组织中的表达正常口腔黏膜中除角化层外均可见KAI1阳性杂交信号，其中KAI1 mRNA，KAI1/CD82阳性表达率分别为93.3%，100%，口腔黏膜白斑中阳性表达率为85.0％，80%，与正常组相比无显著差异性（P>0.05）。口腔鳞癌原发灶中KAI1 mRNA，KAI1/CD82的阳性表达率分别为52.3％、44.7%，较正常及口腔黏膜白斑组均减低（P<0.05）；在无、有淋巴结转移的原发灶及淋巴结转移灶组织中阳性表达率分别为60.4％（55.2%）、30.6％（16.7%）、7.14％（7.14%）（P<0.05），其差异均有统计学意义。

　　2.2KAI1的表达与临床病参数的关系口腔鳞癌中KAI1的表达与肿瘤的组织细胞分化程度具有相关性（P<0.05），但与患者的性别、年龄、肿瘤的大小、浸润深度及pTNM分期等临床病理参数之间差异无统计学意义（P>0.05）。

　　2.3KAI1 mRNA和KAI1/CD82表达的关系在132例口腔鳞癌中，KAI1 mRNA与KAI1/CD82同时阳性表达有42例，同时阴性表达有46例，二者阳性、阴性表达一致率分别为85.5%、86.3%，KAI1 mRNA与KAI1/CD82表达具有相关性（P<0.01）。

　　3讨论

　　KAI1是1995年Dong等[1] 从AT6.1?11?1中克隆出来的一种肿瘤转移抑制基因，其编码蛋白KAI1/CD82是TM4SF（transmembrance 4 super family）家族成员。许多研究均显示KAI1基因的表达下调是人类多种恶性肿瘤转移及侵袭有价值的标记物，也有显示KAI1基因的表达与卵巢癌[3]、肺癌[4]等患者的预后相关。本研究发现KAI1/CD82、KAI1 mRNA在正常口腔黏膜组的阳性表达率分别为100%、93.3%，表明口腔黏膜可能是KAI1基因较高表达的组织之一；但在无淋巴结转移口腔鳞癌原发灶的阳性表达率较正常组中的表达减低，提示KAI1基因可能与口腔鳞癌的发生有关。本研究还发现，KAI1基因在有淋巴结转移的口腔鳞癌原发灶组中的表达较无淋巴结转移原发灶组中明显减低，而在相应的淋巴结转移灶中表达几乎缺失，表明KAI1基因可能在口腔鳞癌的转移进程中起着重要的调控作用。在正常口腔黏膜→口腔鳞癌原发灶→淋巴结转移灶中，KAI1 的表达逐渐降低，甚至缺失，推测KAI1基因的表达下调是口腔鳞癌发生、中的早期事件，而且是病程早期至晚期的普遍事件，与Geradts等[5]对头颈部、肺、宫颈癌组织和Schindl等[6]对宫颈癌的研究结果具有相似之处。有研究证实[7]：原发肿瘤中存在不同的异质性细胞亚群，肿瘤转移是转移性细胞亚群恶性增殖所致，来自于同一肿瘤细胞的高、低转移性细胞亚群存在不同的基因表型。结合本研究可以推测口腔鳞癌细胞中很可能存在表达不同KAI1基因的细胞亚系，高表达KAI1基因的癌细胞亚系占优势的口腔鳞癌不易发生转移；相反，KAI1基因表达减低或缺失的癌细胞亚系占主导优势时，则会促使口腔鳞癌发生侵袭和转移。因此，KAI1基因表达下调很可能是口腔鳞癌高转移潜能的一个良好的预示因子。本研究在KAI1基因的表达与临床病理参数的关系分析中发现：KAI1的表达与肿瘤的分化程度有关，高中分化组表达高于低分化组，而与患者的性别、年龄、肿瘤的大小、浸润深度及pTNM分期无统计学意义。检测KAI1的表达可能为判断口腔鳞癌的分化程度，预测口腔鳞癌的转移等提供一个有价值的指标。本研究还发现，KAI1/CD82的阳性表达率在口腔鳞癌中略低于KAI1 mRNA的阳性表达率。分析肿瘤中KAI1 mRNA和 KAI1/CD82表达率差异的原因可能有：①与转录后调节有关；②与mRNA或蛋白不稳定有关；③与所用测定方法的敏感性不同。经统计发现KAI1/CD82和KAI1 mRNA的表达在口腔鳞癌中具有较高的一致性，说明KAI1/CD82和KAI1 mRNA的表达具有相关性，均可作为研究口腔肿瘤发生发展的有价值的检测指标。

【参考】
  ［1］Dong JT, Lamb PW, Rinker?Schaeffer CW, et al. KAI1, a metastasis suppressor gene for prostate cancer on human chromosome 11p11.2[J]. Science, 1995, 268(5212): 799?800.

　　[2]Guo XZ, Friess H, Shao XD, et al. KAI1 gene is differently expressed in papillary and pancreatic cancer: influence on metastasis[J]. World J Gastroenterol, 2000, 6(6): 866?871.

　　[3]Schindl M, Birner P, Breitenecker G, et al. Down?regulation of KAI1 metastasis suppressor protein is associated with a dismal prognosis in epithelial ovarian cancer[J]. Gynecol Oncol, 2001, 83(2): 244?248.

　　[4]Higashiyama M, Kodama K, Yokouchi H. KAI1/CD82 expression in nonsmall cell lung carcinoma is a novel, favorable prognostic factor: an immunohistochemical analysis[J]. Cancer, 1998, 83(3): 466?474.

　　[5]Geradts J, Maynard R, Birrer MJ, et al. Frequent loss of KAI1 expression in squamous and lymphoid neoplasms: an immunohistochemical study of archival tissues[J]. Am J Pathol, 1999, 154(6): 1665?1671.

　　[6]Schindl M, Bachtiary B, Dreier B, et al. Impact of human papillomavirus infection on the expression of the KAI1 metastasis suppressor protein in invasive cervical cancer[J]. Cancer Lett, 2001, 162(2): 261?266.

　　[7]高进, 章静波. 癌的侵袭与转移基础与临床[M]. 北京出版社, 2003. 498?499.