麦门冬对环磷酰胺所致小鼠骨髓抑制的影响

            作者：刘现兵 孟玮 杜镇镇 王冬 王志强 宓伟 

【摘要】  目的 探讨麦门冬对环磷酰胺（CTX）所致小鼠骨髓抑制的影响。方法 将90只小鼠随机分成5组，即正常对照组、CTX组和麦门冬低、中、高剂量组。正常对照组、CTX组均予0.9%氯化钠注射液灌胃，麦门冬低、中、高剂量组分别予麦门冬水提物2.5、5、10 g/kg灌胃，每只0.5 mL，每日1次，连续给药10 日。于灌胃第3、6、9日，正常对照组予0.9%氯化钠注射液腹腔注射各1次，其余各组予CTX 30 mg/kg腹腔注射，每只0.5 mL。分别检测小鼠外周血白细胞和骨髓有核细胞数量、骨髓细胞有丝分裂指数、骨髓嗜多染红细胞微核率。结果 CTX组及麦门冬低、中、高剂量组外周血白细胞计数（WBC）、骨髓有核细胞及骨髓细胞有丝分裂指数均下降，与正常对照组比较差异均有统计学意义（P<0.01），但麦门冬低、中、高剂量组均高于CTX组（P<0.05，P<0.01），且麦门冬高剂量组均高于麦门冬低剂量组（P<0.05）；CTX组及麦门冬低、中、高剂量组微核率均升高，与正常对照组比较差异均有统计学意义（P<0.01），但麦门冬低、中、高剂量组均低于CTX组（P<0.01），且麦门冬高剂量组高于麦门冬低剂量组（P<0.05）。结论 麦门冬对CTX所致的小鼠骨髓抑制和损伤具有保护作用。

【关键词】  麦门冬；环磷酰胺；骨髓细胞；有丝分裂指数；微核试验

　　The therapeutic effect of Radix ophiopogonis decoction on the myelosuppression of rats induced by cyclophosphamide
   
　　【Abstract】  Objective  To study the effects of Radix ophiopo gonis on the myelosuppression of rats induced by cyclophosphamide （CTX）. Methods  The rats were randomly divided into five groups: the control group, the CTX group and three Radix ophiopogonis treatment groups（low, medium, high dose）. The control group and CTX group were treated by 0.9% sodium chloride  injection. Three Radix ophiopogonis groups were given Radix ophiopogonis decoction respectively, 2.5, 5,10 g/kg, with each rat 0.5 mL per day for 10 days. On the 3 rd, 6 th, 9 th day, rats in control group were given 0.9% sodium chloride injection once each day; rest groups were given CTX injection 30 mg/kg, 0.5 mL each. Recording the amount of cells of peripheral blood WBC and BMNC, Mitotic Index and micronucleus rate of polychromatic erythrocytes （MNPCE） respectively. Results  The amount of cells of peripheral blood WBC and BMNC, Mitotic Index in CTX group and Radix ophiopogonis groups were decreased （P<0.01）,  and those in Radix ophiopogonis were higher than those in CTX group （P<0.05 , P<0.01）, those figures in high-dose group were higher than low-dose group . The micronucleus rate of polychromatic erythrocytes in CTX group and Radix ophiopogonis groups were increased and there was a significant difference from control group （P<0.01）. While the rate in Radix ophiopogonis groups was lower than that in CTX group （P<0.01） and the rate in high-dose group was higher than that in low-dose group （P<0.05）. Conclusion  Radix ophiop ogonis can antagonize the myelosuppression of CTX and protect the function of bone marrow.
   
　　【Key words】  Radix ophiopogonis; Cyclophosphamide; Marrow cell; Mitotic index; Micronucleus test

　　麦门冬（radix ophiopogonis）为临床常用中药，有养阴润肺、益胃生津、清心除烦之功。药研究表明，麦门冬多糖具有良好的免疫增强和刺激作用［1］；麦门冬水提物具有抗肿瘤、抗放射及抗诱变作用［2，3］。我们通过探讨麦门冬对环磷酰胺（CTX）所致小鼠骨髓抑制的影响，以期为麦门冬的进一步研究开发和临床应用提供依据。

　　1  材料与方法

　　1.1  材料

　　1.1.1  实验动物  昆明种小鼠90只，雌雄各半，体质量18～22 g，由本院实验动物中心提供［动物合格证号：SCXK（鲁）20030008］。

　　1.1.2  药品及试剂  麦门冬水提物：麦门冬（购自滨州医学院附属中药房）经粉碎后，称取50 g，加入500 mL蒸馏水中浸泡30 min后，反复煎煮3次，每次30 min，混合3次滤液，浓缩至50 mL，4 ℃保存，使用前用蒸馏水稀释成所需浓度。CTX（上海华联制药有限公司，批号：060310）；秋水仙素（Sigma，批号：2006011628）；甲醛（烟台三和化学试剂有限公司，批号：021119）。
　　
　　1.2  实验方法 

　　1.2.1  动物分组与给药  昆明种小鼠90只，随机分成5组（正常对照组、CTX组和麦门冬低、中、高剂量组），各18只，均雌雄各半。正常对照组、CTX组均予0.9%氯化钠注射液灌胃，麦门冬低、中、高剂量组分别予麦门冬水提物2.5、5、10 g/kg灌胃，每只0.5 mL，每日1次，连续10 日。于灌胃第3、6、9日，正常对照组予0.9%氯化钠注射液腹腔注射各1次，其余各组予CTX 30 mg/kg腹腔注射，注射容积均为0.5 mL。

　　1.2.2  观察指标及方法

　　1.2.2.1  外周血及骨髓有核细胞计数  于末次灌胃给药后6 h，每组取6只小鼠，雌雄各半，尾静脉采血，计数外周血白细胞计数（WBC）；此后颈椎脱臼处死小鼠，剥离股骨，每根股骨用5 mL Hank’s液反复冲洗骨髓腔，制备小鼠骨髓细胞悬液，行骨髓有核细胞计数。

　　1.2.2.2  小鼠骨髓细胞有丝分裂指数试验  于末次灌胃给药后第2日，每组取6只小鼠，雌雄各半，处死前2 h腹腔注射秋水仙素（4 mg/kg），常规制备染色体标本［4］。每只观察1 000个细胞，记录有丝分裂中期细胞数量，有丝分裂指数。

　　1.2.2.3  小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验［5］  于末次灌胃给药后第2日，每组取6只小鼠，雌雄各半，颈椎脱臼处死后，取胸骨制片，甲醛固定，10%姬姆萨（Giemsa）染色，镜检，每只计数1 000个嗜多染红细胞中有微核的细胞数，微核率和微核抑制率。

　　1.3  统计学方法  计量资料用均数±标准差（x±s）表示，组间比较用t检验。

　　2  结果

　　2.1  麦门冬对小鼠外周血WBC、骨髓有核细胞的影响  见表1。

　　表1  麦门冬对外周血、骨髓有核细胞的影响（略）

　　与正常对照组比较，*P<0.01；与CTX组比较，△P<0.05，△△ P<0.01；与麦门冬低剂量组比较，＃P<0.05

　　由表1可见，CTX组及麦门冬低、中、高剂量组外周血WBC和骨髓有核细胞均下降，与正常对照组比较差异均有统计学意义（P<0.01），但麦门冬低、中、高剂量组均高于CTX组（P<0.05，P<0.01），且麦门冬高剂量组均高于麦门冬低剂量组（P<0.05）。
　　
　　2.2  麦门冬对小鼠骨髓细胞有丝分裂指数的影响  见表2。

　　表2  麦门冬对小鼠骨髓细胞有丝分裂指数的影响（略）

　　与正常对照组比较，*P<0.01；与CTX组比较，△P<0.01；与麦门冬低剂量组比较，＃P<0.05

　　由表2可见，CTX组及麦门冬低、中、高剂量组骨髓细胞有丝分裂指数均下降，与正常对照组比较差异均有统计学意义（P<0.01），但麦门冬低、中、高剂量组均高于CTX组（P<0.01），且麦门冬高剂量组高于麦门冬低剂量组（P<0.05）。

　　2.3  麦门冬对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率的影响  见表3。

　　表3  麦门冬对骨髓嗜多染红细胞微核率的影响（略）

　　与正常对照组比较，*P<0.01；与CTX组比较，△P<0.01；与麦门冬低剂量组比较，＃P<0.05

　　由表3可见，CTX组及麦门冬低、中、高剂量组微核率均升高，与正常对照组比较差异均有统计学意义（P<0.01），麦门冬低、中、高剂量组均低于CTX组（P<0.01），且麦门冬高剂量组低于麦门冬低剂量组（P<0.05）。

　　3  讨论
   
　　CTX是临床上恶性肿瘤的常用药，但其有许多毒副作用，主要表现为骨髓抑制、遗传毒性和免疫功能抑制等。本研究通过检测外周血WBC及骨髓有核细胞数量、骨髓细胞有丝分裂指数和微核率，发现麦门冬对CTX所致的小鼠骨髓抑制和损伤具有保护作用。与单独应用CTX比较，麦门冬与CTX联合应用后，小鼠外周血WBC、骨髓有核细胞的数量明显恢复，骨髓细胞有丝分裂指数升高，且呈剂量依赖性，说明麦门冬能够拮抗CTX对骨髓细胞的抑制作用，促进骨髓细胞增殖和外周血象恢复。CTX进入体内后能与细胞DNA和蛋白质起烷化反应，造成细胞内遗传物质损伤，引起细胞微核率的增加。本实验提示麦门冬可以拮抗CTX对骨髓细胞遗传损伤。刘冰等［6］研究发现，一定剂量麦门冬水提物可有效抑制铬对体细胞的遗传毒性效应。这表明麦门冬对骨髓细胞遗传损伤的保护作用是非特异性的。麦门冬可显著拮抗CTX对小鼠骨髓抑制和损伤，其机制可能是由于麦门冬能激活DNA和蛋白质合成酶系统，可帮助骨髓快速恢复造血功能和修复遗传损伤。同时实验研究证明，麦门冬能促进骨髓细胞增殖，增强网状内皮系统的吞噬能力，清除细胞内自由基，从而减轻CTX对骨髓细胞的损伤。

【】
  　　［1］ 汤军,黄琦,徐志瑛,等.麦冬多糖的免疫活性研究［J］.中医基础医学杂志,1998,4（9）:44-46.

　　［2］ 余伯阳,殷霞,荣祖元,等.短葶山麦冬皂甙C的药理活性研究［J］.中国药科大学学报,1994,25（5）:286-288.

　　［3］ 刘冰,武广恒.麦冬的抗诱变研究［J］.白求恩医科大学学报,1999,25（2）:129-130.

　　［4］ 章静波.细胞生物学实用方法与技术［M］.北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社,1995:88-89.

　　［5］ 刘毓谷.卫生毒基础［M］.3版.北京:人民卫生出版社,1997:53-81.

　　［6］ 刘冰,武广恒.麦冬对镉所致遗传损伤的抑制作用研究［J］.长春中医学院学报,1998,14（4）:53.