血管内皮细胞功能紊乱在下肢急性缺血-再灌注损伤中的作用及红花对其的影响

         作者：韩冰 扬振勇 江红 张宏光 张志杰 贾建茹

    【摘要】 目的  探讨血管内皮细胞功能紊乱在下肢急性缺血-再灌注损伤中的作用及红花对其的影响。 方法  将56例下肢缺血再通术患者分为下肢缺血-再灌注组（Ⅰ组，n=30例）和下肢缺血-再灌注加红花组（Ⅱ组，n=26例），测定术前、术后30min、术后12h、术后24h、术后7d共5个时相点的血浆脱落内皮细胞（CEC）计数、肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）活性。 结果  下肢缺血-再灌注期间CEC、CK、LDH明显升高，尤以再灌注12h为著，随后开始下降。红花治疗组各个时相的CEC计数及CK和LDH均显著低于非治疗组（P<0.001）。 结论  下肢缺血-再灌注可导致血管内皮细胞功能紊乱，红花通过保护内皮细胞功能而减轻下肢缺血-再灌注损伤。

    关键词  急性缺血-再灌注损伤 血管内皮细胞 红花

    Role of endothelial cells in acute lower extremity arteral ischemia-reperfusion injury and effect of carthamus flower
 
      【Abstract】 Objective To investigate the potential role of vascular endotheliumdys function during acute lower extremity arterial ischemia-reperfusion injury and effect of carthamus fower（honghua sodium）.Methods 56cases with low extremity ischemia recanalization operation were randomly divided into2groups:the acute lower extremity ar-terial ischemia-reperfusion injury group（groupⅠ，n=30）and the acute lower extremity arterial ischemia-reperfu-sion injury with carthamus flower group（groupⅡ，n=26）.CEC、CK、LDH were measured before reperfusion and30minetes，12hours，24hours，7days after reperfusion.Results In group I，CEC、CK、LDH were obviously increased es-pecially during the12hous of ischemia（These data decreased after wards），while CEC、CK、LDH in GroupⅡwere much lower（P<0.001）.Conclusion These data suggest that acute lower extremity arterial ischemia-reperfusion results in endothelial dysfunction，and treatment with carthamus flower reduces ischemia-reperfusion injury by pro-tecting vascular endothelial cells function.

    Key words acute ischemia-reperfusion injury vascular endothelial cells carthamus flower

    急性下肢动脉缺血是血管外科常见病 ［1］ ，再灌注损伤为该病再通术后的严重并发症，如果得不到及时有效的治疗，常可致残。实验证实血管内皮细胞的功能在心肌缺血-再灌注损伤发生中起着重要作用 ［2］ 。本文研究下肢急性缺血再通术后血管内皮细胞的功能的变化，并用红花干预，探讨血管内皮细胞功能紊乱在下肢急性缺血―再灌注损伤中的作用及红花对其的调节作用。寻求有效阻止下肢急性缺血再灌注损伤的方法。

    1 资料与方法

    1.1 病例分组 56例下肢急性缺血患者均根据病史、查体、多普勒超声及动脉造影检查确诊，随机分成2组。（1）下肢急性缺血-再灌注组30例（Ⅰ组），男21例，女9例，其中风湿性心脏病21例，急性血栓形成9例;年龄60～85岁，平均（67.65±7.45）岁，病程为9～84h，平均（25.65±8.71）h。（2）下肢急性缺血-再灌注加红花治疗组26例（Ⅱ组），男20例，女6例，其中风湿性心脏病19例，急性血栓形成11例;年龄60～80岁，平均（65.12±5.95）岁，病程为7～74h，平均（20.65±6.91）h。Ⅱ组手术前静脉输入红花注射液30ml，术后红花注射液30ml/12h静脉输入10d。两组患者均急诊行球囊导管取栓术。按Cooley标准判定疗效结果，两组分别为，优秀20、19例，良好10、8例。两组在病情、病程、其它治疗等方面差异均无显著性（P>0.05）。1.2 观测项目及方法 血浆中脱落的内皮细胞（CEC）计数采用超速离心法。取静脉血1.6ml置于3.8%枸橼酸钠0.4ml的抗凝管内，混匀后以2350rPm离心20min，取上清液，加0.1%5-腺苷二磷酸二钠0.2ml摇匀，以2350rPm离心20min，取上清液加入0.1ml生理盐水，摇匀10min后，滴在盖玻片上，用上海ACT-2000超高倍显微诊断系统1mm 3 内的脱落内皮细胞数。同一标本计数3次，取其平均值。CK、LDH的测定采用酶联免疫法。分别于术前、再灌注30min、12h、24h、7d共5个时相点测定上述3项指标。

    1.3 统计学方法 检测数据用均数±标准差表示，组间、组内比较用t检验。

    2 结果

    下肢缺血-再灌注期间CEC、CK、LDH明显升高，尤以再灌注12h为著，随后开始下降。红花干预组各个时相的CEC计数及CK和LDH均显著低于非干预组（P<0.001）， 结果见表1。

    表1 Ⅰ组、Ⅱ组再灌注前后血浆CEC、CK、LDH各时相比较 （略） 注: * P<0.001

    3 讨论

    3.1 缺血-再灌注与血管内皮细胞功能紊乱的关系 血管内皮细胞不仅具有多种生物学功能，而且还是调节血管通透性的屏障。组织缺血-再灌注损伤过程可导致血管内皮细胞的激活或损伤 ［3］ ，血管内皮细胞功能的改变可导致多器官的功能损伤。本文的Ⅰ组研究结果表明，下肢急性缺血再通术后血浆中CEC计数明显增加，再灌注后12h达到高峰，随后开始下降。可能是因为急性缺血-再灌注期间能量缺乏及氧自由基大量形成共同导致血管内皮细胞膜破坏，细胞坏死脱落 ［4］ 。提示下肢急性缺血―再灌注过程可导致血管内皮细胞的功能紊乱。

    3.2 血管内皮细胞功能紊乱与下肢急性缺血-再灌注损伤的关系 恢复肢体的血供是缺血-再灌注损伤的典型情况 ［1］ 。本文的研究结果表明，缺血时血浆中CEC计数轻度升高，而再灌注12h后达到高峰，随后开始下降，除肢体坏死者外7d以后逐渐恢复正常。血清中的CK、LDH含量是直接反应肢体肌肉组织再灌注损伤程度的指标，血清中CK、LDH与CEC计数呈同相改变。表明下肢急性缺血-再灌注过程可导致血管内皮细胞的功能紊乱，使血管内膜的结构性、完整性改变，通透性增加，毛细血管内皮细胞肿胀 ［5］ ，影响组织的微循环，诱发和加重下肢急性缺血-再灌注损伤。

    3.3 红花对下肢急性缺血-再灌注损伤的作用 红花的主要活性成分为胡萝卜苷类化合物（西红花苷）。本文的研究结果表明，应用红花干预组各个时相的CEC计数及CK和LDH均显著低于非干预组，其机制可能是红花具有显著的抗氧化作用，并能抑制细胞内钙的升高，从而使细胞内维持相对较低水平，阻止钙超载对凋亡调控基因的促发，使内皮细胞损伤减少甚至不发生生理性改变 ［6］ ，发挥对血管内皮细胞的保护作用，最终改善微循环而有效地缓解组织的再灌注损伤。说明红花有通过保护内皮细胞功能而减轻下肢缺血-再灌注损伤作用。

    1 韩冰，张宏光，张磊，等.急性肢体动脉缺血再通术后再灌注损伤的.中华急诊医学杂志，2003，12（11）:771-772.

    2 Letfer AM，Tsao PS，Lefer DJ，et al.Role ofendothelial dysfunction in the pathogenesis of reperfusion injury after myocardial ischem ia.FASEB J，1991，5（8）:2029-2034.

    3 陈劲进，肖颖彬，陈林，等.低温体外循环血中血管性假友并因子浓度及循环内皮细胞的观察.胸心血管外科临床杂志，1999，6（1）:11-12.

    4 邓靖宇，时德.血管内皮细胞损伤的免疫机制研究进展.中国普通外科杂志，2003，6（12）:462-464.

    5 梁德，黄枫，庄洪，等.四肢血管损伤的处理与肢体再灌注损伤的初步观察.广州中医学院学报，1994，11:25-28.

    6 绪广林，钱之玉.西红花苷对血管内皮细胞的保护作用研究.中草药，2002，33（5）:439-442.