大豆异黄酮片的处方筛选和质量标准研究
【摘要】 目的 对大豆异黄酮片的处方组成和质量标准进行了研究。方法 采用正交试验方法优选制剂处方，采用HPLC方法对大豆异黄酮片的主要功效成分大豆苷元和染料木素进行了定量测定。结果 优选后的制剂处方为每千克大豆异黄酮片中，乳糖的用量为200g，10％淀粉浆的用量为20 ml，十二烷基硫酸钠的用量为12 g，硬脂酸镁的用量为10 g，HPLC方法可准确测定大豆异黄酮片中大豆苷元和染料木素的含量。结论 本研究建立的大豆异黄酮片制备方法操作方便，稳定可靠，质量稳定，可控性强。
【关键词】 大豆异黄酮片 处方筛选 质量标准 高效液相色谱 溶出度
Study on prescription and quality standard of soybean isoflavones tablets
SHANG Hong，LING Jing-hua，YU Sheng-li.Tianjiao Pharmaceutical Limited Company，Tianjin 300163，China
［Abstract］ Objective To study the prescription and quality standard of soybean isoflavones tablets.Methods The orthogonal experiment was used to optimize the prescription.The daidzein and genistein in soybean isoflavones tablets were detected by HPLC.Results The optimum prescription was shown as follows：the usage of lactose was 200 g，the usage of 10% starch paste was 20 ml，the usage of sodium dodecylsulfate was 12 g,the usage of magnesium stearate was 10 g.The HPLC method is easy and precise to determine the content of daidzein and genistein in soybean isoflavones tablets.Conclusion The preparation is practical and reasonable.It is suitable for manufacturing industry.
［Key words］ soybean isoflavones tablet；prescription；quality standard；HPLC；dissolution rate
大豆异黄酮是大豆生长中形成的一类次生代谢产物，是生物黄酮的一种，同时它也是一类具有广泛营养学价值、健康保护和学意义的非固醇类物质［1］。由于老年人内分泌功能衰退，性腺分泌下降，而使性激素分泌减少，造成骨骼中钙的流失。因大豆异黄酮具有雌激素样作用，能促进骨细胞蛋白质的合成和成骨细胞的增殖，抑制破骨细胞增殖，抑制骨钙丢失，促进骨的生成，从而提高骨组织钙磷的含量，增加骨密度。大豆异黄酮可增加骨细胞合成，促进蛋白质合成来促进骨细胞的骨合成［2］。因此，大豆异黄酮对骨质疏松与其他雌激素依赖症等的预防和治疗具有重要作用［3］。
本研究以大豆异黄酮为原料，采用正交试验方法对大豆异黄酮片的处方进行了筛选，并采用HPLC方法测定了其主要活性成分大豆苷元和染料木素的含量。
1 仪器与材料
1.1 仪器 Dionex高效液相系统，Chlomelon色谱数据工作站；YP-1.5型台式电动连续单冲压片机，南通市华宇制药机械有限公司生产；ZRS-8G智能溶出试验仪，天津天大天发科技有限公司生产。
1.2 材料 大豆苷元和染料木素对照品，购自sigma公司，含量大于99％；大豆异黄酮提取物，异黄酮纯度>90%，购自北京华清美恒公司；十二烷基硫酸钠（国药集团化学试剂有限公司生产）；乳糖（湖州食品化工公司生产）；硬脂酸镁（上海药用辅料厂生产）。
2 方法与结果
2.1 大豆异黄酮片处方筛选
2.1.1 正交试验筛选处方 在预试验基础上，以乳糖为填充剂，10%淀粉浆为黏合剂，硬脂酸镁为润滑剂，十二烷基硫酸钠为崩解剂。选定1000片中，乳糖的用量、10%淀粉浆用量、硬脂酸镁用量、十二烷基硫酸钠用量等4个因素，每个因素取3个水平，以溶出度考查指标，采用正交表L9（34）进行试验（表1），优化处方。 表1 因素水平表
2.1.2 制备工艺 将原辅料分别过100目筛备用。称取处方量的大豆异黄酮、乳糖、十二烷基硫酸钠混合均匀。用适量黏合剂制软材，过16目尼龙筛，湿颗粒于60 ℃干燥60 min，干颗粒过14目尼龙筛，整粒后加入硬脂酸镁混合均匀．压制成直径为8 mm，片重为500 mg的片剂，硬度控制在（3.5±0.5）kg/mm2。
2.1.3 实验结果与分析 实验结果见表2。 表2 处方筛选正交试验及结果
最佳配方为A3B3C2D3，即每千克大豆异黄酮片中，乳糖的用量为200 g，10％淀粉浆的用量为20 ml，十二烷基硫酸钠的用量为12 g，硬脂酸镁的用量为10 g。四因素中对溶出度影响最大的是因素A，即乳糖的用量，其次是十二烷基硫酸钠的用量、硬脂酸镁的用量和淀粉浆的用量，即各因素的影响次序为A>C>D>B。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil TM C18柱（4.6 mm×200 mm，5 μm）；流动相：甲醇与0.1％磷酸之比为42∶58；柱温：30 ℃；流速：1.0 ml/min；检测波长：254 nm。
2.2.2 对照品溶液的制备 分别精确称取大豆苷元15 mg，染料木素20 mg，于同一容量瓶中，用无水乙醇定容至50 ml，即得对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备 取大豆异黄酮片3片，粉碎后精密称取约0.6 g至100 ml量瓶中，加甲醇80 ml超声30 min，冷却后用甲醇定容至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.2.4 线性关系考察 依次吸取2、4、6、8、10、12、14、16 μl大豆苷元和染料木素对照品溶液注入高效液相色谱仪，以进样量（c）为横坐标，色谱峰面积（A）为纵坐标，求得回归方程Y=43.665X-14.336，r=0.9995，结果表明，在6.0～48.0 μg/ml浓度范围内峰面积与大豆苷元浓度呈良好的线性关系；同时回归方程Y=55.378X-10.789，r=0.9996，结果表明，在8.0～64.0 μg/ml浓度范围内峰面积与染料木素浓度呈良好的线性关系。
图1 大豆异黄酮片的HPLC图
（A：对照品色谱图，B：大豆异黄酮片色谱图；1为大豆苷元，2为染料木素）
2.2.5 精密度试验 取30.0 μg/ml大豆苷元对照品溶液和40.0 μg/ml染料木素对照品溶液10 μl，连续进样6次，测得大豆苷元和染料木素的峰面积RSD分别为0.86%和0.78%。
2.2.6 稳定性试验 取同一浓度的供试品溶液分别在0、2、4、8、12、24 h进样10 μl，测得大豆苷元和染料木素的峰面积RSD分别为1.641%和0.836%，表明供试品溶液在24 h内稳定。对照品和样品的HPLC图谱见图1。
2.2.7 重复性试验 取同一批样品，按2.2.3项方法制得6份供试品溶液，精密量取10 μl，分别进样，测得大豆苷元和染料木素的含量RSD分别为1.03%和1.16%。
2.2.8 回收率试验 取已知含量的样品6份，分别精密加入1.01 mg/ml的大豆苷元对照品溶液各1 ml，另取已知含量的样品6份，分别精密加入1.85 mg/ml染料木素对照品溶液各1 ml，按2.2.3项方法制得各供试品溶液，依次进样10 μl测定，得到大豆苷元和染料木素的回收率分别为98.3%和97.1%，RSD分别为1.45%和1.19％。
2.2.9 成品的含量测定 分别称取不同批号的大豆异黄酮片配方颗粒约0.1 g，精密称定，按2.3.3项方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，结果见表3。表3 成品含量测定结果
3 讨论
优化后的大豆异黄酮片的处方为每千克大豆异黄酮片中，乳糖的用量为200 g，10％淀粉浆的用量为20 ml，十二烷基硫酸钠的用量为12 g，硬脂酸镁的用量为10 g，经放大生产，该条件可控性强，压出的片剂外表光滑，颜色均一，崩解迅速，口感较好。
本文建立的HPLC法测定配方颗粒中大豆苷元和染料木素的含量，易于操作，重现性好，能有效控制大豆异黄酮片的质量。
大豆苷元和染料木素是大豆异黄酮片中的主要活性成分，具有显著的预防和骨质疏松作用。因此，以大豆苷元和染料木素的含量作为大豆异黄酮片的质量控制指标是合理可行的。
【】
1 李琳，钱忠明.大豆异黄酮的药作用和保健功能的研究进展.药学杂志，2002，37（10）：724-726.
2 苗慧，赵海.大豆异黄酮的研究进展.国外医学·中医中药分册，2005，27（2）：86-90.
3 虞丹.植物雌激素—大豆异黄酮的药理作用研究概况.海峡药学，2007，19（2）：9-12.
