反相高效液相色谱法测定头孢米诺的血药浓度
【摘要】 目的 探讨人血浆中头孢米诺浓度的反相高效液相色谱法的检测。方法 高效液相色谱法，固定相为C18柱, pH4.5 醋酸铵缓冲液：甲醇（85：15） 为流动相, 扑热息痛为内标，检测波长273nm。结果 头孢米诺在 3.71～118.89μg/ ml 检测浓度范围内呈良好线性关系（r =0.9999） ; 高、中、低3 种浓度的日间RSD ≤4.90%、日内RSD ≤1.73%;平均回收率为74.58 %。最低检测限为3.49μg/ml。结论 方法简便、稳定、准确,适用于临床头孢米诺血药浓度的测定。
【关键词】 头孢米诺; 反相高效液相色谱法; 血药浓度
Determination of cefminox in human plasma by RP-HPLC method
HAN Fang-xuan,HUANG Chun-xin.Hainan Provincial People’s Hospital,Haikou 570311,China
【Abstract】 Objective To establish a RP-HPLC method for determining cefminox in human plasma.Methods Chromatographic conditions included Diamonsil C18 （250mm ×4.6mm , 5μm） , ammonium acetate buffer（pH4.5） : methanol （85 ：15 V/V） as mobile phase, paracetamol as internal standard. The detective wavelength was 273 nm and the flow rate was 1.0 ml / min. Results The calibration curve was linear in the concentrations ranging from 3.72 to 118.89μg/ ml （r = 0.9999） .The lowest detectable concertration was 0.1μg/ ml.The recovery rate was （100.02±0.23） %.The within - days RSD was less than 1.73 % and between - day RSD was less than 4.90%.Conclusion The method is simple , sensitive , accurate and suitable for determination of cefminox in human plasma.
【Key words】 cefminox ; RP-HPLC ; plasma drug concentration
头孢米诺（Cefminox Sodium） 为头霉素衍生物, 对β-内酰胺酶高度稳定, 对革兰阳性菌和革兰阴性菌有广谱抗菌活性，对呼吸系统及泌尿系统感染有较好的疗效, 且副作用较少。本文建立RP-HPLC谱法测定头孢米诺钠的血药浓度，专属性强，操作较简便,线性关系和精密度均好，结果准确。
1 材料
1.1 仪器 日本岛津液相色谱仪, LC-10AT 泵,SPD-10A 紫外检测器, SePu3000色谱工作站（杭州谱惠科技有限公司）。
1.2 试药 头孢米诺钠对照品（药品生物制品检定所）,头孢米诺钠样品（海南思迈药业有限公司，批号040501）,扑热息痛原料（汕头金石制药总厂，批号060901） 甲醇（HPLC 级） ,冰醋酸（AR ）, 醋酸铵（AR ） , 三氯乙酸（AR）, 注射用水。
1.3 色谱条件 迪马C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为pH4.5 醋酸铵缓冲液（醋酸铵7.7g, 加水溶解, 加冰醋酸6ml加水至1000ml） ∶甲醇（v：v=85：15） , 内标溶液：1.0mg/ml扑热息痛流动相溶液； 流速1.0ml /min； 柱温：室温；检测波长: 273nm。测得头孢米诺空白血浆、标准品、内标品色谱图见图1。头孢米诺保留时间为8.5min，内标物扑热息痛保留时间为16.3min，头孢米诺、内标物与血浆内源物都得到良好的分离。
2.1 样品的预处理 取血浆200μl，加入内标40μl，振荡，加入10%三氯乙酸溶液100μl，旋涡混匀3min，以13000r/min的高速离心4min，取上清液20ul进样。
2．2 标准曲线的配制
2．2．1 标曲贮备溶液的配制 精密称取头孢米诺标准品10mg，加蒸馏水定溶于10ml容量瓶中，得到1.0mg/ml头孢米诺标准储备液。
2．2．2 内标溶液的配制 精密称取扑热息痛10mg，加少量甲醇溶解，加流动相稀释定容至10ml，作为内标储备液。准确的移取内标液1.00ml，置10ml量瓶中用流动相稀释至刻度，摇匀，即为内标溶液：1.0mg/ml。
2．2．3 血浆标准曲线的配制 以健康人空白血浆加头孢米诺标准液适量，配制成118.89μg/ml、59.44μg/ml、29.72μg/ml、14.86μg/ml、7.43μg/ml、3.72μg/ml的血浆标准溶液，按样品预处理项下操作，进行分析，以药物浓度对药物、内标峰面积比作线性回归，得回归方程为Y=0.0219+0.0337C，r=0.9999。头孢米诺钠在3.72μg/ml 118.89μg/ml的范围线性关系良好。血浆中的最低检测浓度为3.49μg/ml（S/N=3）。
2．3 精密度试验 准确配制含头孢米诺浓度为118.89μg/ml、29.72μg/ml、7.43μg/ml的标准血浆样品，于同日内及连续3天按样品预处理方法操作，所得结果代入回归方程，分别日内及日间精密度。结果见表1。表1 日内和日间精密度实验结果
2．4 提取回收率试验 准确配制含头孢米诺浓度为118.89μg/ml、29.72μg/ml、7.43μg/ml的标准血浆样品，按样品预处理方法操作，测得血浆标准溶液头孢米诺峰面积与内标峰面积比A1；另取一定量的头孢米诺钠标曲贮备溶液配制118.89μg/ml、29.72μg/ml、7.43μg/ml的系列标准溶液各5份以同体积进样，测得标准溶液头孢米诺峰面积与内标峰面积比A2。回收率=A1/A2×100%提取回收率，平均回收率为74.58%。 表2 头孢米诺的提取回收率
2.5 稳定性试验
2.5.1 室温稳定性 准确配制含头孢米诺浓度为118.88μg/ml、29.72μg/ml、7.43μg/ml的标准血浆样品，于室温下放置0、2、4、6、24h后按样品预处理方法操作，与0h所测定的浓度相比较，求其偏差。结果表明血浆样品在24h内保持稳定，偏差在-4.95%～2.89%之间。
2.5.2 冻融稳定性 准确配制含头孢米诺浓度为118.88μg/ml、29.72μg/ml、7.43μg/ml的标准血浆样品，于-20℃冷冻24h，取出待完全溶解后按样品预处理方法操作，反复冻融3次，与未冻前相比较，求其偏差，结果表明标准血浆样品冻融条件下可保持稳定，偏差在-2.14%～3.19%内。
2.5.3 长期稳定性 准确配制含头孢米诺浓度为118.88μg/ml、29.72μg/ml、7.43μg/ml的标准血浆样品，于-20℃冷冻0、7、14、21天后取出待融完后按样品预处理方法操作，与0天相比较，求其偏差，结果表明标准血浆QC样品在冻融条件下可保持稳定，偏差在-7.68%～4.18%内。
3 讨论
注射用头孢米诺钠（商品名meicilin），由日本Meiji Cephem公司研发生产，属于头霉素类抗生素，其作用性质与第三代头孢菌素相近［1］ 。其对β-内酰胺酶高度稳定,可用于ESBL。头孢米诺的紫外光谱在273nm 波长显示最大吸收, 流动相［2,3］在此波长处无吸收干扰, 因而选取做检测波长。醋酸铵缓冲液pH4.5时柱效最高［4］，经实验发现缓冲液pH4.5时药物的峰形及保留时间较好。内标物采用Haefelfinger法［5］评价，经实验考察所得的高浓度、中浓度和低浓度中头孢米诺钠的峰面积的RSDa,内标峰面积的RSDb以及头孢米诺与内标峰面积比值的RSDQ，RSDa>RSDQ,同时满足RSDb<2rRSDa, 0 【文献】
1 王剑,王浴生.头孢米诺钠（美士灵）的基础与临床研究进展.四川生理杂志,1994 ,16（z1） :12-13.
2 魏宝康.头孢米诺高效液相色谱法含量测定和和杂质检测的研究. 海峡药学,2004,16（4）:70-71.
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