米非司酮对子宫内膜异位症患者内膜中芳香化酶P450的表达的影响

【摘要】 目的 探讨米非司酮对子宫内膜异位症（内异症）患者在位、异位内膜中芳香酶P450（Aromatase cytochrone P450, P450arom）表达的影响, 了解其在内异症中的作用环节。方法 用免疫组化法测定米非司酮治疗前后在位、异位内膜中P450arom表达。结果 正常内膜不表达P450arom，而内异症内膜异常表达P450arom，两者差异有显著性（P<0.05）；治疗后内异症患者的在位、异位的内膜组织中P450arom表达明显降低，与用药前比较差异有显著性（P<0.05），与正常内膜差异无显著性（P＞0.05）。结论 米非司酮可以降低内异症患者在位、异位内膜组织中P450arom异常表达，亦可能是治疗内异症的另外环节。

    【关键词】 子宫内膜异位症；米非司酮；芳香酶P450；内膜

      The effect of mifespritone on the expression of aromatase cytochrone P450 in endometrium of endometriosis

    CHEN Shi-rong, ZHAO Xian.Deparment of Obstetrics and Gynecology, The Maternal and Child Health Center of Zengcheng, Guangzhou 511300，China

    【Abstract】 Objective To investigate the effect of mifespritone on the expression of aromatase cytochrone P450 in eutopic and ectopic endometrium of endometriosis and study its role in treating endometriosis. Methods The expression of aromatase cytochroneP450 in eutopic and ectopic endometrium was measured by immunohistochemical assay before and after treatment. Resluts Normal endometrium did not express aromatase cytochrone p450 but endometriosis did, which was different evidently from normal endometriosis （P<0.05）.The expression of aromatase cytochrone p450 in eutopic and ectopic endometrium of endometriosis reduced obviously after treatment, which was different evidently from before treatment（P<0.05）, but did not differ significantly from normal endometrium（P＞0.05）.Conclusion The mifespritone can reduce the expression of aromatase cytochrone p450 in eutopic and ectopic endometrium of endometriosis. It may be other an important role in treating endometriosis.

    【Key words】 endometriosis; mifespritone； aromatase cytochrone p450; endometrium

    内异症已成为育龄妇女的常见病、多发病，由于其浸润性、复发性而成为难治之症，同时也是不孕症的主要原因。近年来根据内异症是性激素依赖性疾病，临床上采用米非司酮进行治疗。但具体作用机制并不十分清楚，故本文检测内异症患者米非司酮治疗前后子宫内膜P450arom的表达，探讨米非司酮在内异症治疗中的作用，为临床治疗提供理论基础。

    1 资料与方法

    1.1 标本来源 2003年9月～2005年5月在遵义医学院附属经开腹手术或腹腔镜手术病理证实为内异症（巧囊或腹膜内异症）患者内膜50例为研究组，其中20例术前服用米非司酮12.5mg, qd×3个月,术中取异位内膜，同时刮取在位内膜各20份（用药组）;其余30例未服用米非司酮, 术中取异位内膜，同时刮取在位内膜各30份（未服药组），年龄36±5.5岁；取同期宫颈鳞癌及CIN手术者子宫内膜30例（对照组）,平均年龄38±4.5岁，排除妇科内分泌失调性疾病及雌激素依赖性疾病，置于-80℃冰箱保存待用。全部患者术前3 个月内均无任何激素治疗史。

    1.2 方法

    1.2.1 标本处理 130例标本采用免疫组化链酶卵白素蛋白酶（SP）法测定P450arom的表达。 ＰＢＳ代替Ⅰ抗作空白对照,已知阳性片为阳性对照。P450arom单抗购于武汉博士德生物制品公司，ＳＰ试剂盒购于福建迈新生物制品公司。

    1.2.2 结果判定标准 采用Mias99扫描图像分析仪对P450arom表达进行定量分析，细胞质出现棕黄色颗粒为阳性判断标准，每张切片随机选择5个视野，测定其OD值，取其平均值代表P450arom 表达的强度，OD值越大，表达强度越大；反之，表达强度越小。

    1.2.3 统计学处理 所有数据用均数加减标准差（x±s）表示，采用SPSS11.5统计学软件包行t检验。

    2 结果

    2.1 米非司酮治疗内异症患者前后内膜中芳香化酶P450的表达 内异症在位和异位内膜腺上皮的胞浆中有P450arom的表达,细胞核及细胞膜上无表达,在间质细胞弱表达，其增殖期、分泌期差异无显著性（P>0.05）；正常内膜不表达P450arom，与内异症组内膜相比差异有显著性 （增生期Ｐ<0.05；分泌期Ｐ<0.001）,而异位内膜的阳性表达率与在位内膜之间差异无显著性 （Ｐ>0.05）；治疗后内异症患者的在位、异位的内膜组织中P450arom表达明显降低，与用药前比较差异有显著性（P<0.05），与正常内膜差异无显著性（P＞0.05）。见表1。表1 各组内膜组织中P450arom表达注：与各期正常内膜比较，*P<0.05，△P<0.001 ；与用药后内膜比较，# P<0.05

    3 讨论

    3.1 细胞色素芳香化酶P450在子宫内膜异位症内膜表达的意义 P450arom是雌激素合成的最后一步限速酶，P450arom的主要作用是将雄烯二酮和睾酮转化为雌酮和雌二醇。已有研究证实［1］，正常子宫内膜不表达P450arom，本实验也同样证实这一点，同时发现P450arom存在于内异症患者在位、异位内膜腺上皮细胞浆中，阳性率二者间差异并无显著性，同时二者均无明显周期性改变（P>0.05），而与正常内膜差异有显著性。

    结果显示：内异症内膜可能确实存在某些遗传性缺陷，可能因变异表达的基因类固醇合成因子（SF-1）取代了COUP-TF，而激活P450arom的表达，从而促进内异症内膜局部组织雌激素的生物合成［2］。另外内异症患者免疫功能失调［3］，使腹腔液前列腺素（PGE2）和细胞因子（如IL-6）增加。而这些因素的共同作用于异位内膜后可使细胞内环磷酸腺苷（cAMP）的水平增加,通过旁路介导刺激 P450arom的表达，从而调节雌激素的合成。同时，雌激素本身能激活内膜间质细胞环氧化酶2（COX2）表达，促进花生四烯酸向PGE2 的转化［4］。因此，在内异症内膜组织中很可能存在一种正反馈环，通过自分泌和旁分泌方式进行调节，产生大量雌激素，从而形成有利于内膜种植浸润生长的微环境，这也表明内异症内膜局部高水平P450arom的表达是局部高浓度雌激素合成的条件，也可能是形成异位灶的一个先决条件，故检测子宫内膜P450arom的表达水平可用于诊断内异症，同时通过降低P450arom的表达为内异症提供理论依据。

    3．2 米非司酮对内异症患者在位、异位内膜中P450arom表达的影响及意义 米非司酮在受体水平发挥很强的对抗孕激素及糖皮质激素作用。米非司酮治疗内异症可能是通过：（1）拮抗孕激素作用，雄激素介导的非竞争性抗雌激素作用，从而抑制子宫内膜的生长；（2）调节细胞因子/受体，影响内膜血管内皮生长因子的表达及微血管密度，降低其在异地种植、浸润和生长能力［5］；（3）促进子宫内膜细胞凋亡，抑制异位内膜的生长。而本实验结果提示，米非司酮还可以抑制P450arom，从另一个环节达到治疗内异症的目的。

    米非司酮抑制P450arom可能是通过以下途径：（1）抑制细胞因子IL-6，近年来研究发现细胞因子IL-6对由启动子I.4调节P450arom的表达具有激素作用,而米非司酮抑制细胞因子IL-6［6］,因此抑制P450arom生成；（2）抑制雌激素的分泌，米非司酮可直接/间接作用下丘脑-垂体系统，使雌激素促进的内膜间质环氧酶-2的表达降低， PGE2合成减少，而PGE2是最强诱导异位内膜表达P450arom的成分［7］，最终使P450arom的表达受到抑制。

    综上所述，抑制P450arom的生成也可能使米非司酮治疗内异症的另一个环节，至于是否通过抑制细胞因子IL-6及雌性激素途径而发挥作用，需进一步研究。

    【】

    1 Ishiara H,Kitawaki J,Kado N,et al.Gonadotropin-releasing hormone agonist and danazol normalize aromatase cytochrome P-450 expression in eutopic endometrium from women with endometrosis, adenomyosis, or leiomyas.Fertil Steril,2003,79［suppl 1］:735-742.

    2 Zeitoun K, Takayama K,Michael MD,et al.Stimulation of aromatase P450 promoter（Ⅱ） activity in endometriosis and its inhibition in endometrium are regulated by competitive biding of steroidogenic factor-1 and chicken ovalbum in upstream promoter transcription factor to the same cis-acting element. Mol Endometriol,1999,13（2）:239-253.

    3 Luis SN,Kazuto T,Khaled MZ,et al. Prostaglandin E2 stimulates aromatase expression in endometrosis derived stromal cells. J Clin Endocrinol Metab,1997,82（2）: 600-606.

    4 Jimenez MV,Billeter M,Liu CQ,et al. Local effect of mifepristone on the nonhuman primate endometrium.Fertil,2000,74:134-140.

    5 赵轩，吴华真，王宝金，等.米非司酮对子宫内膜异位症患者在位及异位子宫内膜中血管内皮生长因子的表达及微血管刻度的影响.中华妇产科杂志,2005,40（8）：277-278.

    6 卢静,江静,吴瑞芳,等.米非司酮和孕酮对子宫内膜异位症患者子宫内膜白细胞介素6分泌的影响.中华妇产科杂志，2001,36:603-605.

    7 Bulun SE, Zeitoun K,Takayama K,et al.Estrogen biosynthesis in endometriosis: meleculer basis and clinical relevance.J Mol Endocrinol,2000,25（1）:35-42.