高效液相色谱法测定一清颗粒中盐酸小檗碱的含量

【摘要】  目的 建立一清颗粒中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法 使用Waters C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以乙腈-0.033 mol/L磷酸二氢钾溶液(40∶60)为流动相；检测波长265 nm；流速1.0 ml/min。结果 盐酸小檗碱的线性范围为：0.204 8～1.024 μg，r=0.999 8，平均回收率为100.09%，RSD=0.39%(n=5)。结论 HPLC法测定一清颗粒中盐酸小檗碱含量，操作简单，结果准确，方法重现性好。

【关键词】  一清颗粒 酸小檗碱 含量测定 HPLC

    一清颗粒为药典方，为临床常用药，功效为清热泻火解毒，化瘀凉血止血。用于火毒血热所致的身热烦躁、目赤口疮、咽喉牙龈肿痛、大便秘结、吐血、咯血、衄血、痔血；咽炎、扁桃体炎、牙龈炎见上述证候者。全方由黄连、大黄、黄芩三味中药组成，对于方中的君药黄连，药典中仅通过薄层鉴别对其质量进行控制，随着高效液相的普及，方中大黄、黄芩二药均有高效液相色谱法进行质量控制的报道，而黄连则尚无相关文献报道，本文通过对黄连中的主要成分盐酸小檗碱的高效液相含量测定方法的建立，对一清颗粒中的黄连的质量进行控制。

    1  仪器与试剂

    Agilent 1100高效液相色谱系统，Chemstation液相色谱工作站，Mettler Toledo AG 285型天平，岛津UV?2550紫外分光光度计。一清颗粒购自市场；色谱乙腈(Fisher公司)，其余试剂均为国产分析纯。

    2  方法与结果

    2.1  色谱条件  色谱柱Waters C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相乙腈?0.033 mol/L磷酸二氢钾溶液(40∶60)；检测波长265 nm；流速1.0 ml/min；理论板数按盐酸小檗碱峰应不低于4 000。

    2.2  对照品溶液的配制  精密称取盐酸小檗碱对照品5.12 mg，置于25 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.204 8 mg/ml的对照品溶液，用时取2 ml，以流动相稀释至10 ml，即得。

    2.3  供试品溶液的制备  取颗粒少许，研细，精密称取粉末1.0 g，置250 ml烧杯中，加沸水约150 ml使溶解，稍冷后加入稀盐酸3 ml，搅匀，放冷，转移至250 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，离心(转速为4 000转/min)，精密量取上清液2 ml，置25 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

    2.4  阴性对照样品溶液的制备  按处方量称取除黄连以外的各成分，按一清颗粒的制备方法制备阴性对照溶液。精密量取阴性对照溶液10 ml，按供试品溶液的制备方法，制备阴性对照样品溶液。

    2.5  干扰实验  照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照样品溶液各10 μl，分别注入液相色谱仪，进行测定。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照样品溶液在此保留时间无干扰。因此可在此系统条件下对黄连进行定量分析。

    2.6  线性关系考察  精密吸取0.2048 mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液1、2、3、4、5 ml，分别置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。制得0.020 48 mg/ml、0.040 96 mg/ml、0.061 44 mg/ml、0.081 92 mg/ml和0.102 4 mg/ml的对照品溶液。分精密吸取上述溶液各10 μl，进样分析2次，记录色谱图，平均峰面积(Y)对盐酸小檗碱质量(μg)回归，得回归方程Y=15 444.34X+0.5，决定系数r2=0.999 8，表明盐酸小檗碱0.204 8～1.024 μg范围内具有良好的线性关系。

    2.7  精密度试验  精密吸取0.040 96 mg/ml的对照品溶液10 μl，连续进样，测定峰面积，RSD为1.06%。

    2.8  重复性试验  平行制备批号为070503的一清颗粒的供试品溶液，分别精密吸取10 μl，进样分析2次，记录色谱图，以平均峰面积供试品溶液中盐酸小檗碱的含量，结果RSD为1.64%。

    2.9  稳定性试验  精密吸取同一供试品溶液各10 μl，分别于配制后0、3、6、12、24 h进样，测定峰面积，结果RSD为2.19%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

    2.10  回收率试验  精密称取批号为070503的颗粒0.5 g，分别取5份(1～5)精密称定，分别加入浓度为0.062 mg/ml的对照品溶液25 ml，按2.3中供试品溶液制备方法制备供试品溶液，另取样品1.0 g，精密称定，按2.3中供试品溶液处理方法制备随行供试品溶液(6)，分别吸取上1～6供试品溶液各10 μl，进样分析2次，记录色谱图，计算盐酸小檗碱回收率为100.09%，RSD为0.39%。结果见表1。表1  回收率试验结果

    2.11  样品测定  分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl，按上述色谱条件实验，测定峰面积，以外标法计算供试品溶液中盐酸小檗碱的含量。通过计算，批号070503的一清颗粒的盐酸小檗碱含量为2.816 mg/g；批号070815的颗粒的含量为2.67 mg/g；批号070921的颗粒含量为2.80 mg/g。

    综上所述，实验中曾采用多种方法制备供试品溶液，通过实验表明文中的供试品溶液制备方法能把供试品中的盐酸小檗碱完全提出，且具有分离效果好、杂质峰少的优点。本方法简便、快捷、结果准确可靠，可作为该制剂中盐酸小檗碱的含量测定方法。

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  1 国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部).北京：化学出版社，2005．213?214，289?290．