Tc -MDP对类风湿关节炎患者CR1、 CIC和RF表达的影响及其临床意义
作者：陆东明 李琰君 赵书平
【摘要】 目的 探讨锝亚甲基二磷酸盐（Tc-MDP）类风湿性关节炎（RA）时，对红细胞膜补体受体-1（CR1）、循环免疫复合物（CIC）和类风湿因子（RF）表达的影响及临床意义。方法 将54例RA患者随机分为治疗组和对照组。对照组（26例）常规采用非甾体抗炎药物双氯酚酸治疗，治疗组（28例）在服用双氯酚酸的同时静注 Tc-MDP（5mg/d）。40d后获取两组静脉抗凝血（3ml），分离出红细胞与血浆。采用酶联免疫吸附实验（ELISA）法测定红细胞膜CR1（405nm）和RF（450nm）OD值，通过聚乙二醇（PEG）比浊法测定CIC。结果 治疗组CR1的OD值显著高于对照组（P＜0.01）,CIC和RF水平在治疗组中的降低程度具有统计学意义（P＜0.01）。结论 CR1、CIC、RF的联合检测可作为RA疗效检测指标;Tc-MDP对CR1表达低下的自身免疫性疾病有一定治疗作用。 陆东明 （1956～），男 ，汉族，上海籍，副教授
【关键词】 锝亚甲基二磷酸盐 类风湿性关节炎 补体受体-1 循环免疫复合物 类风湿因子
Abstract Objective To explore the effect of Technetium Methylenediphonate （TC-MDP）on the expression and clinical significance of the complement receptor1(CR1) , rheumatoid factor (RF) and circulating immune complex (CIC) on the patients with rheumatoid arthritis（RA）. Methods 54 cases of patients with RA were divided into two groups . The experimental group(28 cases) was injected Tc-MDP 5mg/days by vein and received Diclofenac Diethylamine Emulgel drug (DDE) . The control group(26 cases) was used DDE only. We got erythrocyte and plasma in two groups separately after forty days . The expression of CR1 of erythrocyte membrane and RF were detected by ELISA , CIC by PEG-6000 . Results The CR1 group was much higher than that of in control group(P<0.01) , and the CIC and RF in experimental group were much lower than that of in control group(P<0.01) . Conclusion The tests of CR1 , RF and CIC are available in the treatent of RA and it shows significant effect in using Tc-MDP to treat those autoimmune disease with low expression of CR1.
Key Words Tc-MDP RA CR1 CIC RF
锝亚甲基二磷酸盐（Tc-MDP）治疗RA疗效显著［1，2］。目前针对RA治疗的方法和药物繁多，其疗效大多根据临床体征改变和常规实验室检测结果判定，为准确确定疗效，我们根据近年来提出的“自身免疫性疾病红细胞CR1表达下降”这一特征［3，4］设计了有关观察方法：通过观察CR1、CIC、RF的水平变化，确定Tc-MDP治疗RA的疗效。
1 材料与方法
1.1 病例资料
54例RA患者均来自临床门诊和住院病例，符合1987年美国风湿病协会（ARA）制定的RA诊断标准。其中男性16例，女性38例。年龄23～67岁，平均年龄48.2岁，病程3～16年，之前均未接受过Tc-MDP治疗。对照组（26例）口服双氯酚酸（200mg/d），治疗组（28例）在服用相同剂量双氯酚酸的基础上静注Tc-MDP （5mg/d，成都云克药业有限公司）。40d后获取两组静脉抗凝血（3ml），分离红细胞与血浆。
1.2 醛化红细胞制备
所获红细胞用PBS（pH7.4 0.15mol/L）离心洗涤3次，取压积红细胞0.1ml加入0.9ml用PBS配制的戊二醛（含戊二醛0.025%）中，置室温1 h后用PBS洗涤3次，再用PBS配制成浓度为2%的红细胞悬液备用。
1.3 主要试剂
鼠抗人CR1单抗（工作浓度1 ：160）、碱性磷酸酶标记的羊抗鼠IgG（1 ：200）、类风湿因子ELISA检测试剂盒均由晶美公司提供。4.1%PEG-6000自配（用0.1mol/L、 pH8.4的硼酸缓冲液配制）。
1.4 检测方法
红细胞膜CR1测定根据［5］采用ELISA法，将2%的醛化红细胞液0.1 ml包被于U型酶标板（43℃ ，120min）后用PBS洗涤（5min×3）；加入0.1ml鼠抗人CR1单抗（43℃， 30min）后用PBC洗涤3次（5min×3），加入0.1ml碱性磷酸酶标记的羊抗鼠IgG （43℃， 30min）后用PBS 洗涤（5min×3），加入新鲜配制的底物液显色10min，移置酶标仪读取OD值。RF测定采用ELISA夹心法，CIC测定采用PEG比浊法［6］。
1.5 统计学处理
两组前后的实验测定数据以均数±标准差（x±SD）表示，组间比较采用t检验，疗效评定采用卡方检验分析。
2 结果
治疗组CR1 的OD值高于对照组，且CIC和RF 的OD值水平在治疗组的降低程度均有显著性差异（P＜0.01），见表1。实验数据表明，检测指标的变动与临床疗效及体征的变化具有一致性，说明Tc-MDP治疗RA患者的疗效可能是通过增强红细胞膜CR1的表达实现清除循环免疫复合物的目的。
表1两组CR1、CIC和RF变化表(x±SD)
组别nCR1CICRF 治疗组280.861±0.1160.213±0.0210.274±0.085对照组260.412±0.1640.434±0.0410.516±0.073P010.010.01
3 讨论
Tc-MDP是锝和亚甲基二磷酸盐螯合而产生的分子量为446.9Kda的低毒核素制剂, 国内大量临床研究表明［１，２］，Tc-MDP对RA患者疗效优于传统的非甾体抗炎药、慢作用抗炎镇痛药和激素三大类药物。王海滨等［5］认为自身免疫性疾病时红细胞膜CR1水平明显下降，而且CR1水平变化与病情的、转归有密切关系。由此我们在Tc-MDP对RA的治疗中首次检测患者红细胞膜CR1变化。研究结果表明Tc-MDP治疗RA患者的有效率与CR1水平的增高及CIC、RF水平的降低是相一致的，提示Tc-MDP治疗RA患者可能是通过增强红细胞膜CR1的表达而发挥免疫调整作用。
CR1又称CD35，是分子量为160～260KDa的单链跨膜分子，其表达受多种因素控制，主要分布于红细胞膜表面，是机体清除循环免疫复合物的重要膜受体。CR1的配体分子是C3b、C4b、C3bi和C3c。红细胞膜CR1的检测可作为了解机体免疫状况指标之一，CIC检测能反映机体免疫复合物总体水平，RF常作为RA患者判断疾病进程的相对特异性指标。我们认为CR1、CIC和RF的检测能反映机体清除免疫复合物的能力以及复合物水平变化水平。而三者联合检测作为观测RA患者疗效的动态指标，其结果客观，特异性强。
【文献】
［1］智良，郭红军，陈燕. Tc-MDP治疗类风湿性关节炎42例疗效观察［J］.陕西医学杂志，2005，3：137-139
［2］谢丹红. 同位素锝［99Tc］亚甲基二磷酸盐的临床应用新进展［J］.新医学，2006，11：9-12
［3］丛树玲，刘作劲，陈建昌，等. 系统性红斑狼疮患者红细胞补体受体1型分子基因分析［J］.山东医药，2001，8：47-49
［4］Jones DRE,Thompson S,Amirchetty S.et al. An enzymelinked immunosorbent assay for complement regulatory.proteins and membrane-bound immunoglobulins on intact red blood cells［J］. Immunol Methods , 1994 ,177:235-242
［5］王海滨，张学萍. 红细胞CR1分子的定量测定及其临床意义［J］.中华微生物和免疫学杂志，2000，20（4）：381-384
［6］刘辉. 临床免疫学和免疫检验试验指导［M］.北京：人民卫生出版社，2003.49-55
