八味沉香散对肾缺血再灌注损伤的抗氧化作用研究

          作者：朱艳媚 王建新 王丽华

【摘要】  目的 探讨八味沉香散对实验性大鼠肾缺血再灌注损伤的抗氧化作用。方法 在大鼠肾动脉缺血再灌注模型上观察八味沉香散对肾缺血再灌注引起的血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮(NO)含量及肾组织形态学变化的影响。结果 八味沉香散组MDA、SOD、GSH、GSH-Px与再灌组比较有明显差异(P<0.05)，NO含量与再灌组比较有明显差异(P<0.05)，肾组织病变较再灌组减轻。结论 八味沉香散在肾缺血再灌注损伤中具有抗氧化作用。 朱艳媚（1971～），女，土族，青海籍，副教授，硕士

【关键词】  八味沉香散 肾缺血再灌注 抗氧化

    Abstract  Objective  To investigate the renal antioxidant effect of Bawei chenxiang powder on RIRI rat models.  Methods The activities of SOD、GSH -PX and MDA in kidney were measured respectively. Results Plasma MDA、SOD and GSH-Px of Bawei chenxiang powder group were significantly lower than those of ischemia group (P<0.05); Nitride Oxide (NO) and reperfusion group were significantly lower(P<0.05). Renal tissue lesions decreased significantly in Bawei chenxiang powder group than reperfusion group. Conclusion The results showed that Bawei chenxiang powder can significantly resist to the peroxidation role in renal ischemia reperfusion in rats.

    Key words  Bawei chenxiang powder   Renal Ischemia reperfusion injury  Peroxidation resistant

    八味沉香散(Bawei chenxiang powder)由沉香、肉豆蔻、广枣、白芸香、木棉花、乳香、木香、诃子等8味药材组成。 该药具有活血止痛、开通心窍、理气活血、清心热、养心安神之功效, 用于冠心病、心绞痛、肺心病、心绞痛，是藏医临床各种急慢性心脑血管系统疾病最常用的药物之一。已有研究表明该药具有明显的抗心肌缺血［１］和保护心功能［2］的作用。肾缺血再灌注损伤(Renal Ischemic reperfusion injury，RIRI)是临床常见的病理现象，是导致缺血性急性肾功能衰竭的主要原因之一，病死率很高，且存活的患者亦多有不同程度的慢性肾功能损害，因此，如何减轻再灌注损伤一直是一个研究热点。为进一步探讨八味沉香散对肾缺血再灌注损伤的影响及一氧化氮在肾缺血再灌注损伤中的变化和作用，我们使用大鼠复制肾缺血再灌注模型，并观察再灌注及使用八味沉香散预处理后其血清NO、SOD、MDA、GSH-Px及肾组织学的变化，探讨八味沉香散对缺血再灌注损伤的抗氧化作用。

    1  材料与方法

    1.1  实验材料

    实验用健康SD大鼠，由青海省实验动物中心提供。八味沉香散由青海藏药厂生产；MDA、SOD、GSH-Px、NO检测试盒，均由南京建成生物工程研究所生产。

    1.2  分组与取材

    雄性大鼠40只，体重160～220 g，随机分成4组。①正常对照组10只，②缺血组10只，③缺血再灌组10只，以上各组均采用0.9％生理盐水2 mL/200 g灌胃；④八味沉香散组10只，以成人剂量的20倍剂量灌胃。各组均2次/日，连续给药14 d后全麻下(戊巴比妥纳40 mg/kg，ip) 于腹部正中切口，暴露双侧肾脏，结扎右肾动、静脉近心端，切除右肾，并注射100 U肝素以防肾血管内凝血。③组和④组大鼠分离左肾动脉，用无创血管夹夹闭45 min，再灌注2h；生理盐水组大鼠左肾动脉不夹闭。再灌注结束后，各组均在大鼠颈总动脉采血并取肾组织。

    1.3  方法

    1.3.1  血清MDA、S0D、GSH-Px、NO的测定

    取血，离心，分离血清，MDA、S0D、GSH-Px、NO的测定按试剂盒说明书进行。

    1.3.2  病观察

    肾组织以甲醛（100g/L）固定，常规石蜡包埋，HE染色，光学显微镜观察。

    1.4  统计方法

    采用SPSS10.0统计学软件，实验数据以x±S表示，组间均数比较采用方差分析，P<0.05表示差异有统计学意义。

    2  结果

    2.1  各组MDA、SOD、GSH-Px检测结果（见表1） 表1各组大鼠血清MDA、SOD、GSH-Px含量检测结果注：*与正常组相比， P<0．01；＃与再灌组相比，P<0．01；※与缺血组相比，P<0．01.

    缺血组、再灌组、八味沉香散组大鼠血清MDA、SOD、GSH-Px含量与正常组比较，均有显著性差异（P<0．01）；缺血组、八味沉香散组大鼠血清MDA、SOD、GSH-Px含量与再灌组比较有显著性差异（P<0．01）；缺血组SOD含量与八味沉香散组比较也有差异（P<0．01）。

    2.2  各组NO检测结果（见表2）

    表2各组大鼠血清NO含量检测结果  注：*与再灌注组相比，P<0．01.

    再灌组大鼠血清NO含量与正常组相比，P<0.05；与八味沉香散组相比，P<0.05；八味沉香散组与缺血组相比，P<0.05。

    2.3  病观察

    常规观察：与正常组相比，缺血组大鼠肾脏明显肿大、淤血，呈暗紫红色，皮髓质界限不清。再灌组肾肿大同缺血组，但颜色变淡，皮髓质界限不清，皮髓交界处可见明显紫红色带。八味沉香散组病理表现大体同再灌组。

    光镜观察：正常组，肾小管排列整齐，管腔边界清晰，间质无充血水肿；缺血组，肾小管边界模糊，肾髓质毛细血管严重淤血，肾小球未见明显改变；再灌组，上述病变加重，可见肾小管上皮细胞肿胀，并有不同程度的变性、坏死，肾小管腔内可见蛋白管型和脱落的上皮细胞，间质充血水肿，有炎性细胞浸润，部分肾小管腔内可见脱落上皮细胞和红细胞；八味沉香散组，只见部分肾小管细胞有轻度肿胀，但肾缺血改变已明显减轻，外髓清晰无充血。

    3  讨论

    大鼠血清MDA、SOD、GSH-Px含量在缺血组、再灌组、八味沉香散组与正常组间比较，均有显著性差异（P<0．01）；缺血组、八味沉香散组与再灌组比较有显著性差异（P<0．01），表明八味沉香散具有抗缺血再灌注损伤作用。肾脏缺血的重要措施是尽快恢复再灌注，然而再灌注可能导致肾脏细胞损伤进一步加重。大量研究表明，缺血再灌注损伤主要与氧自由基的产生引起膜脂质过氧化、细胞内钙超载、能量的消耗、细胞骨架的紊乱等密切相关。MDA为脂质过氧化代谢产物，含量增高时，引起明显的组织或细胞损伤；SOD是组织自身产生的抗氧化酶，对组织或细胞具有保护作用；缺血再灌注使氧自由基激增，线粒体是氧自由基攻击的主要细胞器，导致能量代谢障碍［3］。形态学观察显示，缺血再灌注损伤表现最明显的是肾皮髓质交界处，尤其外髓在缺血和再灌注时淤血非常明显，肾髓质淤血与肾功能损害及其转归之间存在着十分密切的关系［4］。再灌注时肾组织中NO明显下降，以保证入球动脉张力低于出球动脉，改善了肾小球缺血状况，也就减轻了肾组织的损伤。

    八味沉香散使再灌时MDA降低，SOD、GSH-Px的活性得到保护。报道SOD不能与NO结合，但却使体内NO的半衰期延长近一倍，且生物学效应增强［５］，表明eNOS来源的NO活性得以保护，它对于维持髓质血流和氧供产生了积极影响。病理组织学变化也证实，八味沉香散组缺血明显改善，肾间质水肿较再灌组明显减轻。八味沉香散的保护作用可能主要与其保护抗氧化酶的活性、清除氧自由基、抑制体内的脂质过氧化反应、提高机体的抗氧化能力有关。

【文献】
  ［1］杨梅，格日力，周小梅，等.藏药抗缺氧作用的初步研究［J］.中药杂志，2004，29（11）：1117-1118

［2］王建新,李永芳,李生花,等.八味沉香散对心肌缺血大鼠的保护作用［J］.华西药学杂志，2006，21（6）：550-551

［3］王新良，王新颖，王佩薇,等.一氧化氮在肾缺血再灌注损伤中的作用［J］.中国应用生理学杂志，2006，22（11）：2142-2145

［4］刘甦，方针强，张艮甫.异丙酚预处理对大鼠肾缺血再灌注细胞因子的影响及损伤的保护作用［J］.第三军医大学学报，2006，28(17)：1788-1790

［5］戴晓明，吴慧平，蒋凤荣，等.参附注射液对大鼠肾缺血再灌注损伤作用的研究［J］.南京中医药大学学报，2006，22（6）：380-381