反相高效液相法测定保妇康栓中莪术醇的含量

【摘要】  目的：采用反相高效液相法测定保妇康栓中莪术醇的含量。方法：流动相为：乙腈-0.2%醋酸(50:50)；检测波长200nm；流速1.0ml/min。线性范围0.5～2.0μg，γ=0.9997，平均回收率96.98%，RSD＝1.23%。结果：样品峰与干扰峰完全分开，峰形对称，且阴性无干扰。本法灵敏、专属性高、重现性好，可作为制剂质量控制方法。

【关键词】  保妇康栓；莪术醇；反相高效液相法

    保妇康栓为药典中药成方制剂，处方中的莪术油含有榄香烯、莪术醇、莪术二酮等成分，其中莪术醇为较明确的消炎、抗菌、抗癌活性成分[1]。虽然包括2005年版药典在内的多数采用气相色谱法进行莪术油的含量测定[2~4]，但气相色谱法重现性较差，应用范围没有液相色谱法广泛，所以我们对制剂中的莪术醇含量测定进行了液相色谱方法的研究，取得理想的效果。

    1   材料与方法

    1.1   仪器与试剂   Waters高效液相色谱仪，1525二元泵，Rheodyne7725i进样器， 2487双波长 UV 检测器，Breeze 工作站；市售保妇康栓；莪术醇对照品购自中国药品生物制品鉴定所，供含量测定用，批号100185-200305；乙腈（色谱纯）购自天津四友公司；其他试剂均为化学分析纯。

    1.2   方法

    1.2．1   色谱条件   SinoChrom ODS-AP色谱柱（5μm，4.6mm×150mm，大连依利特）。流动相：乙腈-水(50:50)，检测波长200nm；流速1.0ml/min。

    1．2.2   对照品溶液的制备   精密称取在五氧化二磷干燥器中减压干燥48h的莪术醇对照品适量，加甲醇制成0.1mg/ml的溶液。

    1.2．3   供试品制备   取本品1粒加水适量，置水浴上熔化后冷却，加石油醚(30℃～60℃)30ml，超声处理20min置分液漏斗中。水层放回锥形瓶，醚层置50ml量瓶中，用少量石油醚分次洗涤锥形瓶，洗液经分液漏斗分层后并入量瓶，用石油醚定容。吸取10ml溶液上硅胶柱（直径10mm，4g，105℃活化0.5h），待石油醚溶液上样完后加石油醚：乙醚（2:1）15ml洗脱，洗脱置浅紫黑色区带移出色谱柱后，用25ml量筒收集洗脱液，前2ml弃去。收集石油醚：乙醚洗脱液13ml，换甲醇洗脱，继续收集洗脱液至黄色区带即将移出色谱柱为止。将量筒中的混合溶液移入25ml锥形瓶，用5ml甲醇分次洗涤量筒，洗液并入锥形瓶。然后将锥形瓶置50℃水浴中挥发干醚层，移入25ml量瓶，加甲醇定容。

    2   结      果

    2．1   专属性   取缺莪术阴性样品进行测定，与样品和对照品图谱相比，在莪术醇位置无干扰（见图1）。反相高效液相色谱法含量测定过程中，对照品、样品出峰时，从检测器废液出口收集洗脱液至出峰结束。将收集到的洗脱液挥去乙腈，加0.2ml石油醚振摇混合，待分层后吸取石油醚层点于硅胶G薄层板上，用石油醚：乙酸乙酯（9∶1）展开，用1%硫酸香草醛显色。样品洗脱液、对照品洗脱液、对照品在相同位置上均显单一的红色斑点。

    2．2   标准曲线的绘制   取0.1000mg/ml对照品溶液，精密稀释出0.0250mg/ml，0.0500mg/ml，0.0625mg/ml，0.0750mg/ml，0.0875mg/ml的对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液，进样20μl，按色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标，莪术醇的质量为横座标绘制标准曲线，其回归方程为：y=3.54x+0.00258，γ=0.9997，表明莪术醇在0.5～2.0μg （浓度×进样量）范围内具有良好的线性关系。

    2．3   稳定性试验   取同一供试品，间隔1h进样测定1次，连续7次，平均峰面积＝5489321，RSD=1.23%。由此结果表明样品在6h内稳定。

    2．4   重复精密度试验   精密吸取对照品溶液10μl，重复进样5次，测定其峰面积，平均峰面积=5426519，RSD=0.67%。由上述结果可知仪器的精密度符合要求。

    2．5   重现性   取同一批供试品，重复测定含量5次，平均含量=4.31mg/g，RSD=1.56%，由此说明方法重现性较好。

    2．6   回收率试验   采用加样回收法，精密称取已知含量（4.31mg/g）样品1.75g，定量加入浓度7.5450mg/ml的莪术醇对照品1ml，按上述色谱条件进行测定，计算回收率，结果见表1。

    2．7   样品测定   用本文方法测定3批号的保妇康栓制剂，结果批号020601、020702、020703的样品含量分别4.21、4.52、4.06mg/粒。

    3   讨      论

    莪术醇没有紫外最大吸收，只能利用其末端吸收来测定。紫外吸收是相对的，在不同溶剂中吸收度很不一样。尝试使用甲醇∶水做流动相，莪术醇没有出峰，原因可能是甲醇的紫外截止波长为205nm，水为200nm，背景吸收太大造成。而当用乙腈∶水做流动相，乙腈的紫外截止波长为190nm，结果莪术醇在200nm、205nm下均能出峰。

    在莪术醇薄层层析分析时发现石油醚不能洗脱莪术醇，而莪术醇微溶于石油醚，所以用硅胶柱纯化制备莪术醇和莪术二酮，用石油醚溶解样品上柱。用石油醚-乙醚（2∶1）洗脱，通过分段收集，再用薄层、液相确定洗脱体积。

    本文利用了石油醚与甲醇不能混溶、而且低沸点的石油醚更容易挥发的特性，在低温下将醚层挥干，避免了大量惰性溶剂进入RP18柱造成固定相流失的可能。经过纯化后与直接进样比较，避免了非极性成分死吸附、降低了背景吸收、减少了其他成分干扰。本文利用硅胶柱预分离，再用反相高效液相—紫外末端吸收检测测定莪术醇含量，方法专属、准确，可以用作保妇康栓中莪术醇的含量测定。

【】
  [1] 李国栋,许 付,沈爱军. 莪术油的研究进展[J].药学杂志,2002 ,37 (11):806-809.

[2] 谢 莹, 杭太俊, 张正行, 等. 4种姜黄属药材挥发油中莪术醇含量比较[J]. 中草药,2001,32(7):600-602.

[4] 王建中, 娄月芬, 陆锦芳, 等.复方莪术油微囊中莪术醇的气相色谱测定[J]. 中国临床药学杂志, 2001,10(2):107-109.

[5] 邓 嵘. 莪术油明胶微球剂的含量测定[J]. 中国药学杂志,2001,21(2):79-81.