梗阻性黄疸大鼠肠黏膜血液动力学改变对门静脉内毒素含量的影响
【关键词】 胆管阻塞,肝外;内毒素类;血液动力学;内皮素类;大鼠
［摘要］ ［目的］ 探讨梗阻性黄疸大鼠肠黏膜血液动力学改变对肠源性内毒素（LPS）血症的影响. ［方法］ 制作梗阻性黄疸大鼠模型，测定血清一氧化氮（NO），内皮素（ET），LPS含量. ［结果］ 梗阻性黄疸1周组大鼠血浆ET，LPS含量明显高于正常组，但NO含量无明显变化;梗阻性黄疸2周组大鼠血浆NO，ET，LPS含量均明显高于正常组，其中以NO含量变化最为明显.NO/ET与LPS呈负相关. ［结论］ 梗阻性黄疸时血浆NO，ET含量的变化与肠源性LPS血症发生密切相关.
［关键词］ 胆管阻塞，肝外;内毒素类;血液动力学;内皮素类;大鼠
ABSTRACT:OBJECTIVE To study the effects of gut original endotoxemia on change of hemodynamics of gut mucosa.METHODS The models of obstructive jaundice were established，and the serum NO，ET and LPS levels were determined.RESULTS The serum ET and LPS levels were significantly higher than control group on the1week after operation，but the NO level hadn't obviously change;the serum NO，ET and LPS all levels were higher than control group on the2weeks after operation，the change of NO level was the most significant，the serum LPS level was invariant on the1and2weeks after operation.NO/ET was negatively related to LPS.CONCLUSION The change of the serum NO and ET level was related to gut original endotoxemia in obstructive jaundice.
Key words:bile duct obstruction，extrahepatics;endotoxins;hemodynamics;endothelins;rats
梗阻性黄疸可引发肠源性内毒素血症，其原因可能与肠黏膜屏障功能异常有关，而肠黏膜屏障功能与肠黏膜良好的血液供应密切相关.本实验通过观察梗阻性黄疸模型大鼠门静脉血胆红素、一氧化氮（NO）、内皮素（ET）及内毒素（LPS）含量的变化，探讨了梗阻性黄疸大鼠肠黏膜血液动力学变化对肠 黏膜屏障功能及LPS含量的影响，为进一步探讨梗阻性黄疸引发LPS血症的原因提供依据.
1 材料与方法
1.1 材料 选取健康Wistar雄性大鼠，体重为180～250g，由延边大学医学部实验动物科提供.ET放射免疫药盒由人民解放军总提供，鲎试剂盒由上海医学研究所提供.
1.2 动物模型的制作 取24只大鼠，随机分成3个组，即正常组、梗阻性黄疸1，2周组，每组各为8只.梗阻性黄疸组大鼠在术前禁食水12h，用10g/L氯胺酮100mg/kg行腹腔注射麻醉.取上腹部正中切口开腹，沿肝十二指肠韧带找到胆总管，在十二指肠上方用7号线双重结扎胆总管，制作梗阻性黄疸模型;正常组大鼠亦按上述方法开腹，但不结扎胆总管.术后所有大鼠均以普通饲料饲养，于术后第1，2周分别腹腔注射麻醉药物，沿原切口开腹，抽取门静脉血，备检.
1.3 含量测定 取各组大鼠门静脉血1mL置于经肝素处理的试管中，3500r/min离心10min，取血浆待测.血清胆红素含量测定采用苯甲酸钠-咖啡因比色法，血浆NO含量测定采用硝酸还原酶法.ET含量的测定:取门静脉血2mL，放入含有100g/L乙二胺四乙酸（EDTA）30μL和抑肽酶40μL的预冷试管中混匀，于4℃，3500r/min条件下离心10min，取上清液，保存于-20℃条件下，采用ET放射免疫药盒进行含量测定.LPS含量的测定:采用鲎试剂盒进行，制定标准曲线，即将已知LPS浓度溶液稀释至1.0000，0.5000，0.2500，0.1250，0.0625，0.0313EU/mL，用722型分光光度计测定各浓度溶液的吸光度，绘制标准曲线;取0.1mL门静脉血清加入Tris-HCl0.2mL及9g/L氯化钠溶液0.2mL混匀，置于100℃水浴10min，离心，取上清液0.1mL，测定吸收值，从标准曲线中查出相应的LPS含量.
1.4 统计学处理 所有数据用均数±标准偏差（x±SD）表示，采用SPSS统计软件进行方差分析及t检验.
2 结果
梗阻性黄疸1周组大鼠血清ET，LPS含量明显高于正常组大鼠，两组比较均有显著性差异（P<0.05）;梗阻性黄疸2周组大鼠血清NO，ET，LPS含量均高于正常组大鼠，两组间比较均有显著性差异（P<0.05），其中以NO含量的变化最为明显，见表1.NO/ET与LPS呈负相关（图1）. 表1 各组大鼠血清胆红素及LPS，NO，ET含量及NO/ET的变化（略）
3 讨论
梗阻性黄疸LPS血症的主要发生原因是胆汁不能排入肠道，使肠道内缺少胆盐对细菌繁殖的抑 制和对LPS的降解，致肠黏膜瘀血、水肿、坏死，绒毛萎缩，黏膜变薄，SIgA含量下降，造成大量肠源性LPS进入门静脉.肠黏膜表面具有许多绒毛及丰富的毛细血管，通常维持着正常的屏障功能 ［1］ .NO是一氧化氮合成酶分解L-精氨酸时产生的具有多种生物活性的细胞因子，经自分泌和旁分泌在局部起血管舒张作用;ET是内皮细胞分泌的具有强烈收缩血管作用的细胞因子，故了解NO和ET的含量比例可间接了解局部血液灌流情况 ［2］ .本实验结果示，发生梗阻性黄疸1周时门静脉血内LPS含量显著增加，肝损害加重，NO和ET比值降低，提示梗阻性黄疸1周时NO和ET比值的降低是导致肠黏膜局部血液灌流不足，组织缺血缺氧，引起肠黏膜损伤，通透性增加的主要原因之一;发生梗阻性黄疸2周时门静脉血LPS含量与1周时相比较无明显差异，但与正常组相比较有显著性差异，这与2周时门静脉血中NO含量明显增加，NO和ET比值增高有关，认为机体可能通过代偿机制产生大量NO，以改善肠黏膜血液供应，但不足以完全纠正梗阻性黄疸时发生的肠黏膜屏障功能的损伤.LPS含量与NO和ET比值进行相关分析发现两者间呈显著负相 关，提示NO和ET比值增高引起的肠黏膜血流的 改善，可增强肠黏膜机械及免疫屏障，减少梗阻性黄疸时肠源性LPS的吸收.
［参 考 文 献］
［1］ 闫勇，尹志良，田伏洲.肠黏膜屏障损害致肠源性内毒素血症［J］. 胃肠外科杂志 ，1999，4（4）:246.
［2］ 刘祥德，何振平，别平.梗阻性黄疸大鼠血浆NO与ET 改变及其意义［J］. 第三军医大学学报 ，2000（8）:731.
