新生期大鼠母爱剥夺对成年后自发活动的影响

【摘要】  目的：观察新生期母爱剥夺对大鼠成年后自发活动的影响。方法：将母鼠随机分为母爱剥夺(MD)组(所生仔鼠在出生后第2～21d每天母婴分离1h)和正常对照(N)组(所生仔鼠不做任何处理)。仔鼠成年后予慢性应激，用开场试验观察大鼠自发活动的改变。结果：MD组再次受到慢性应激后可引起自发活动总路程与周边路程的显著减少(P<0.001)，休息时间增加(P<0.01)。结论：新生期大鼠母爱剥夺可引起成年后自发活动减少，导致抑郁样行为。

【关键词】  母爱剥夺 抑郁样行为 自发活动

　　［Abstract］Objective：To investigate the effect of neonatal maternal separation on the locomotion activity in adult rats. Methods：The neonatal SD rats were randomly divided into maternal separation group(one hour daily maternal separation on postnatal day 2～21)and control group(no handing on postnatal day 2～21). The rat received chronic stresses in adult period. The autonomic behavior was determined by animal behavior analysis system. Results：In the maternal separation group after chronic stress,the total distance and the surrounding distance of rats gradually decreased(P<0.001), and the rest time increased(P<0.01). The neonatal maternal separation can decrease locomotion activity in rats, it can cause behavior depression in posse.

　　［Key Words］neonatal maternal separation; behavior depression; locomotion activity

　　生命早期应激(Early life stress，ELS)是多种精神疾病的重要风险因素，可诱发重性抑郁症、创伤后应激障碍、儿童注意缺陷症及精神分裂症等［1］。精神疾病的遗传因素、生命早期环境因素和成年后环境因素［2］强调了生命早期环境因素在精神疾病发病中的作用。建立ELS对成年后行为影响的动物模型，可为进一步研究ELS的神经生物学机制提供研究平台。本实验以新生期母婴分离［3］作为母爱剥夺的手段，观察生命早期母爱剥夺对大鼠成年后自发活动的影响，并在大鼠成年后再次接受慢性应激，观察应激对自发活动的影响，从而建立“母爱剥夺对成年后行为影响”的动物模型。

　　1  材料与方法

　　1.1  实验动物分组
   
　　3月龄雌雄SD大鼠(中山大学医学院实验动物中心提供)体质量200～280g，在光/暗周期为12h/12h、光照时间7：00～19：00的条件下饲养(自由摄食和饮水)，1周后分笼(每笼1只雄鼠，2只雌鼠)，待雌鼠怀孕后单笼饲养。生产后，每笼饲养10～12只新生大鼠和1只哺乳期母鼠。将仔鼠分为母爱剥夺(MD)组和对照组(N),MD组在出生后第2～21d每天母婴分离1h［将母鼠拎出放入一笼中，然后将新生大鼠放入另一笼，并入温育箱(32.0±0.5)℃］。1h后将新生大鼠送回最初笼中与母鼠团聚。N组不做任何处理。MD组在出生4周后单笼饲养，N组每4只一笼正常饲养［4］。

　　1.2  大鼠自发行为的测定
   
　　采用DigBehv_LR4型动物行为分析系统(上海吉量软件科技公司，)记录并分析大鼠的自发活动。大鼠自主行为的检测固定在15：00～17：00进行，检测时间5min。自发活动在开放场(40cm×40cm×65cm)进行，并由红外摄像系统和视频合成器记录大鼠活动；机分析系统分析大鼠运动轨迹。监视及分析下列行为改变：休息及活动时间、总路程、运动线性度、速度、中央区活动时间路程、四周(四角和四边)活动时间及路程，并以上述指标来判断大鼠的行为改变。

　　1.3  慢性应激
   
　　大鼠满2月龄后连续接受10d慢性应激，1次/d接受空瓶应激(4h)、昼夜颠倒、45℃热刺激(10min)、夹尾(5min)、水平摇晃(45次/min，5min)中的1种，每种限用2次。

　　1.4  统计学处理
   
　　实验结果用EXCEL和SPSS11.0统计软件进行分析，结果以±s表示，数据分析用配对t检验和独立样本t检验。

　　2  结果

　　2.1  新生期母爱剥夺对成年后自发活动的影响
   
　　新生大鼠母婴分离后正常饲养。分别在2月龄和3月龄时检测大鼠的自发活动：MD组2月龄时，自发活动总路程、休息时间、中央路程以及周边路程等与N组比均无统计学意义(图1)；3月龄时，MD组活动总路程与N组比显著减少(P<0.05)；虽然休息时间延长、中央路程和周边路程缩短，但均无统计学意义(图2)。结果表明新生期母爱剥夺的大鼠随着鼠龄的增长，逐渐出现自发活动的抑制现象。

　　图1  2月龄大鼠的自发活动（略）

　　Fig.1  The locomotion activity of 2_month_old rats

　　图2  3月龄大鼠的自发活动（略）

　　Fig.2  The locomotion activity of 3_month_old rats

　　与N组比  *P<0.05

　　2.2  慢性应激对成年后的母爱剥夺大鼠自发活动的影响
   
　　两组在2月龄后接受10d慢性应激，以开场试验。结果显示(表1)，两组活动总路程显著减少(P<0.001)、休息时间均大幅度延长(P<0.001)、中央路程显著减少(P<0.01)。MD组应激与N组比，总路程大幅度减少(P<0.001)、休息时间大幅度延长(P<0.01)、中央路程大幅度减少(P<0.01)。结果表明：慢性应激可显著抑制大鼠自发活动，而生命早期的母爱剥夺加重了慢性应激对自发活动的抑制作用。

　　表1  2月龄母爱剥夺大鼠再次慢性应激后的自发活动变化（略）

　　Table 1  The change of locomotion activity of 2_month_old maternal deprived rats after chronic stress

　　与N组比  1)P<0.01；2)P<0.001；与N组应激比  3)P<0.001

　　3  讨论
   
　　早期应激可影响成年后学习记忆、性格特征和情绪能力等，对适应社会、工作、学习产生重大影响，甚至增加精神障碍的发病率或犯罪率。近几年对其生物学机制的研究虽有增加，但由于临床研究的局限性和研究周期长等原因，对其机制仍知之甚少。而动物实验可为ELS提供便利，建立稳定可靠和易于检测的动物模型，可以为研究ELS所致成年后行为改变及其神经、内分泌和免疫等生物学研究提供研究平台。目前已有的生命早期应激模型主要有雌性动物孕期(胎儿)应激和新生动物应激。母爱剥夺是人类生命早期的严重生活事件之一，对成年后的身心健康产生影响。因此，建立母爱剥夺动物模型，能更好地模拟人类ELS,为探讨其生物学改变提供研究工具。
   
　　本实验对新生大鼠施行母爱剥夺1h/d，在其成年早期(2月龄)未出现自发活动障碍，当鼠龄增至3月龄时，其自发活动的总路程显著减少，活动时间缩短，表明生命早期母爱剥夺可造成成年后行为异常。慢性应激是人类抑郁症的重要诱发因素之一［4］，不可预料的慢性应激可诱导动物行为性抑郁［5］。本实验在母爱剥夺大鼠成年后再次施行慢性应激，发现早期母爱剥夺增加了成年后大鼠对应激的反应性。结果提示，早期母爱剥夺是大鼠成年后行为异常的重要原因。
   
　　ELS导致成年后认知、记忆、情绪等精神活动的异常已经被许多临床回顾性研究所证实，其原因可能与神经系统的损伤与再生、神经生化改变、内分泌改变等诸多因素相关。本动物模型的建立，将为进一步研究提供便利。

【】
  　　［1］Bart A，Ellenbroeka and Marco A. Riva，Marco AR. Early maternal deprivation as an animal model for schizophrenia［J］. Clinical Neuroscience Research， 2003， 3(3)： 297-302.

　　［2］Pelcovitz D， Kaplan S， Goldenberg B， et al. Post_traumatic stress disorder in physically abused adolescents［J］. J Am Acad Child Adolesc Psychiatry， 1994， 33(5)： 305-312.

　　［3］Coutinho SV， Plotsky PM， Sablad M， et al. Neonatal maternal separation alters stress_induced responses to viscerosomatic nociceptive stimuli in rat［J］. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol， 2002， 282(2)： 307-316.

　　［4］Millin R， Walker S， Chow J. Major depressive disorder in adolescence: a brief review of the recent treatment［J］. 2003， 48(9)： 600-606.

　　［5］Hankin BL. Adolscence depression： description， causes， and intervention［J］. J Abnorm Psych， 2006， 8(1)： 555-561.