鹿羊乳癖康颗粒对家兔乳腺增生病的影响
作者：蒋贵昱 龙卿 张鹤鸣 信国峰 张丹参 刘贺之
【摘要】 目的：观察鹿羊乳癖康颗粒对家兔乳腺增生病的影响，为临床实验提供理论依据。方法：用雌性健康家兔制作兔乳腺增生病动物模型，测定兔血清中雌二醇含量的变化、兔乳腺重量及光镜下兔乳腺组织的改变，评价鹿羊乳癖康颗粒调节激素等的作用。结果：鹿羊乳癖康颗粒各组用药后家兔血清雌二醇含量均低于模型组，且低、中、高剂量组对降低实验家兔血清雌二醇含量有较好的剂量效应依赖关系。中、高剂量组与模型组比较有非常显著性差异（P<0.01），高剂量组降低达51.01%。乳腺重量、直径、小叶数量和组织病理观察结果表明，不同剂量鹿羊乳癖康颗粒对家兔乳腺增生均有明显的抑制作用。结论：鹿羊乳癖康颗粒对实验性家兔乳腺增生病有明显的治疗效果，可抑制家兔乳腺组织增生，且具有明显的量效依赖关系。其对家兔乳腺增生的抑制作用优于阳性对照药乳疾灵颗粒。
【关键词】 鹿羊乳癖康颗粒；乳腺增生病；血清雌二醇
【ABSTRACT】 Objective:To study the therapeutic effects of Luyang Rupikang Keli on hyperplasia of mammary glands in rabbit,and provides some evidence for clinical assay.Methods:Mastopathy model was prepared by the use of diethylstilbestrol and progesterone among female rabbits.The concentration of estradiol in serum was estimated and mammary gland weight was measured.Pathologic changes in morphology were observed by microscopy to evaluate the therapeutic effect of Luyang Rupikang Keli.Results:Compared with that of model group,the content of estradiol was reduced in treating groups,especially in middle and high?dose treating groups,there was a significant difference,P<0.01.The level of estradiol has a dose?dependent relationship with Luyang Rupikang Keli.The changes in mammary gland weight and morphology indicated that Luyang Rupikang Keli obviously inhibited the hyperplasia of breast.Conclusion:Luyang Rupikang Keli can inhibit effectively hyperplasia of mammary glands in rabbit.
【KEY WORDS】 Luyang Rupikang Keli;Hyperplasia of mammary glands;Estradiol in serum
近年，妇女乳腺增生病发病率在逐年增高，1998年调查表明，城市妇女绝经前发病率为5%［1］；2005年北京某国际体检中心对15 714名妇女会员体检报告中，其病理性乳腺增生患病率为39%[2]；最近相关资料调查显示：育龄女性乳腺增生发病率高达80%,其增长速度之快，令人担忧。
已有研究证实，乳腺增生细胞相对于正常乳腺细胞有明显的DNA含量增加和细胞分裂加速，具有恶性变倾向［3］。早在1978 年，全国肿瘤防治会议将非典型乳腺增生列为了乳腺癌的前期病变。流行病学研究提示:本病患者发生乳腺癌的机会是正常人群的2～4倍。专家指出，乳腺增生是威胁妇女健康的重大疾病之一，因此，研制对该病有效治疗药物也就显得尤为重要。
鹿羊乳癖康颗粒为多味中药经用纳米膜分离技术提取精制而成的颗粒剂，该方为中医肿瘤专家多年临床验方加减而成，在治疗乳腺增生病及乳腺癌的防治方面具有较好疗效［4］。为进一步验证其疗效和作用机制，我们对其药效学进行了研究，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 药物 鹿羊乳癖康颗粒，20g/袋，每克含生药4g(由鹿羊乳癖康颗粒课题组研制，河北北方学院附属第一制剂室制备，批号040416)。乳疾灵颗粒，10g/袋，（邢台制药厂，批号：0406221）。苯甲酸雌二醇注射液，1mg/1mL(天津金曜氨基酸有限公司，批号：0401141)。醋酸氢化可的松注射液，1mg/1mL（北京第四制药厂，批号：030615）。
1.2 动物 大耳白兔60只，雌性未孕，体重2±0.5 kg[由军事医学院动物中心提供，动物合格证号：SCXK?(京)2002?003]。
1.3 仪器 CENTAUR?型全自动免疫分析仪(美国邦尔公司)。
1.4 方法
1.4.1 分组和给药 雌性健康家兔60只，分为生理盐水空白对照组、乳腺增生模型对照组、鹿羊乳癖康颗粒低、中、高（2g/kg、4g/kg、8g/kg）三个剂量和乳疾灵颗粒阳性对照（8g/kg）组，每组10只，单笼饲养。将鹿羊乳癖康颗粒按低、中、高剂量分别掺入家兔饲料内混匀，制成含鹿羊乳癖康颗粒不同剂量的饲料，每天喂养鹿羊乳癖康2次，每次50g；按家兔体重增长，每10d药料按体重增一次；到实验结束30d，分别将各组药料喂完。生理盐水、模型对照组每日喂不含鹿羊乳癖康颗粒的正常饲料两次，每次50g，连服30d。乳疾灵颗粒组给药方法同鹿羊乳癖康颗粒组，药物饲料的制作配比（见表1）。2007年12月蒋贵昱等：鹿羊乳癖康颗粒对家兔乳腺增生病的影响第6期2007年12月河北北方学院学报（医学版）第6期表1 实验家兔药物饲料配比制作表注：饲料按100g/(只·d)计算。
1.4.2 家兔乳腺增生病理模型制作[5,6] 家兔60只，除生理盐水组不作手术外，其余5组分别用速眠新注射液0.2mL/kg,im麻醉，在第5腰椎处两侧切口，分离肌肉至腹膜后，切除双侧卵巢。1周后，雌二醇注射液0.3mg/kg，im,隔日一次，共15次，造成乳腺增生病模型。
1.4.3 检测指标 ①一般情况观察 每天观察记录各组家兔的一般表现（行为、腺体分泌、大小便等），记录食量，测量体温一次，每10d称体重一次。②血清雌二醇含量检测 实验结束取家兔心脏血置2h后分离血清，用免疫分析仪检测血清雌二醇含量，分析比较。③乳腺重量及体积检测 分别称重每只兔乳腺组织的重量，测量腺体直径及计数腺体叶数。④组织 分别切取乳腺组织作病理光镜观察，必要时作电镜观察。
2 结果
2.1 家兔一般表现 生理盐水组兔的活动良好，毛发光泽，腺体分泌、二便和每天的食量（100g）均正常。模型组和治疗各组家兔在术后一周活动受限，但二便、食量基本正常，未见腺体异常分泌。此外，在每次肌注苯甲酸雌二醇注射液（0.3mg/kg）后，均可见家兔有反胃的异常表现，但为时不长，约2h后食量正常。
2.2 对家兔体温的影响 各组家兔实验期间体温变化不大，均在（39±0.5）℃之间。组间的平均体温变化无显著性差异（P>0.05）。仅在手术3d内，因术后反应而各组的平均体温略有升高，此后，波动在正常范围内。
2.3 对家兔体重的影响 实验各组家兔体重组间未见显著变化（P>0.05）。随着实验时间的延长，各组家兔体重均有增加（见表2）。
2.4 对家兔乳腺形态的影响 模型对照、鹿羊乳癖康颗粒高、中、低剂量和乳疾灵颗粒各组给药30d后，可见家兔乳头和乳腺体积明显比生理盐水组增大，尤其模型组增大更明显。给药各组与模型组比较，鹿羊乳癖康颗粒中、高剂量和乳疾灵颗粒组家兔的乳头和乳腺体积明显比模型组小。从乳腺形态观察表明，应用鹿羊乳癖康颗粒和乳疾灵颗粒治疗后，家兔乳头、乳腺体积缩小，颜色变浅。表2 鹿羊乳癖康颗粒及乳疾灵颗粒对家兔体重变化的影响注:与生理盐水组比较* P>0.05,△P <0.01;与模型组比较# P>0.05,##P<0.05，▲ P<0.01,▲▲ P<0.001表4 鹿羊乳癖康颗粒治疗各组血清雌二醇含量测定结果注：与生理盐水比较△P<0.01；治疗组与模型组比较# P>0.05，## P<0.05，▲ P<0.01
2.5 对家兔乳头和乳腺重量的影响 实验结束各组家兔乳腺组间重量有很大差别，生理盐水组平均增长约0.1g左右，模型对照组平均增长约0.4g左右；各给药组乳腺重量均有不同程度的下降。分别测量乳腺直径和计数乳腺小叶个数，结果显示，模型对照组与生理盐水组比较，有非常显著性差异（P<0.01），提示造膜成功。与模型组比较，鹿羊乳癖康颗低剂量组对乳腺重量无显著性影响（P>0.05），可显著减少乳腺小叶数量（P<0.01），可使乳腺直径显著性缩小（P<0.001）；乳疾灵颗粒组乳腺重量有显著性减少（P<0.05），其它各用药组家兔乳腺重量、直径和小叶数量，均有极显著性改变（P<0.001），且鹿羊乳癖康颗粒高剂量组各测定值已恢复到接近生理盐水组水平而无显著性差异（P>0.05），提示鹿羊乳癖康颗粒家兔乳腺增生效果极显著（见表3）。
2.6 鹿羊乳癖康颗粒对实验性家兔乳腺增生血清雌二醇含量的影响 模型对照组家兔血清雌二醇含量较高（1413.98pmol/L），与生理盐水组比较有非常显著性差异（P<0.01），表明造模成功。鹿羊乳癖康颗粒各组的血清雌二醇含量均低于模型组，且低、中、高剂量对降低实验家兔血清雌二醇含量有较好的剂量效应依赖关系。中、高剂量组与模型组比较有非常显著性差异（P<0.01），效果显著；乳疾灵颗粒组与模型组相比有显著性差异（P<0.05），也显示了明显的疗效（见表4）。
2.7 病理观察 用药结束后处死动物，在同一部位切取乳腺组织，用10%甲醇固定，石蜡包埋，组织切片，HE染色，光镜观察。生理盐水组家兔乳腺小叶结构清楚，腺胞上皮细胞无增生现象，小叶间可见丰富纤维结缔组织（见图1）。
图1 生理盐水组家兔乳腺组织图（×２００）模型对照组家兔乳腺丰富，呈囊性小叶增生，小导管和腺胞扩张增生，形成许多大小不等的腺腔。腺胞被水肿的间质分开，小叶的大小形态不整，腺胞上皮细胞有明显增生，间质伴有胶原纤维明显增生（见图2）。
图2 模型对照组家兔乳腺组织图（×２００）鹿羊乳癖康颗粒低剂量组家兔乳腺小叶较丰富，腺胞上皮亦有增生现象（见图3）。
中剂量组家兔乳腺小叶及其结构尚清楚，小导管和腺胞上皮细胞增生不明显，腺体呈收缩状态（见图4）。
高剂量组家兔乳腺小叶结构清楚，小导管和腺胞上皮细胞无增生，腺体呈收缩状态（见图5）。
乳疾灵颗粒组家兔乳腺小导管和腺胞轻度增生，腺胞结构清楚，腺体呈收缩状态（见图6）。
图3 鹿羊乳癖康颗粒低剂量组家兔乳腺组织图（×２００）图4 鹿羊乳癖康颗粒中剂量组家兔乳腺组织图（×２００）图5 鹿羊乳癖康颗粒高剂量组家兔乳腺组织图（×２００）图6 乳疾灵颗粒组家兔乳腺组织图（8g/kg）（×２００）3 讨论
中医认为，乳腺增生病为肾阳虚、肝郁、冲任失调所致肝郁气滞，痰凝血瘀，循经阻塞于乳房胃络，正是西医所指的雌孕激素平衡失调，黄体期孕激素分泌减少，雌激素长期刺激乳腺组织，乳腺缺乏孕激素的保护，在周而复始的月经周期中，增生过度而复旧不全导致的乳腺增生。鹿羊乳癖康颗粒剂治疗乳腺增生病主要着眼于温补肾阳，调摄冲任，舒肝解郁，活血止痛、散结的治疗原则，选鹿角、淫羊藿等温补肾阳，调摄冲任二脉以治本。药理研究证实，鹿角片和淫羊藿乙醇提取液均具有男性性激素样作用[7]。小鼠注射淫羊藿提取物20～40mg产生的效果与7.5mg的睾丸素相当；但又无雄激素的副作用，可调整雌激素对乳腺的刺激。两药君臣伍用治法与西医用男性性激素治疗本病原理相符［8］。
本试验对家兔血清雌二醇含量的影响表明：家兔血清雌二醇的水平与乳腺增生有密切的关系，如模型组血清雌二醇含量较高，平均为1413.98 pmol/L，乳腺增生非常明显，包括腺体重量、直径和小叶个数均大于其它各组。经鹿羊乳癖康颗粒治疗后，各组的血清雌二醇含量均低于模型组，其低、中、高剂量组平均下降率分别为37.03%、43.37%、58.14%，显示了较好的剂量效应依赖关系。阳性对照药乳疾灵颗粒降低家兔血清雌二醇含量也有明显作用。
高剂量组可见家兔乳腺明显缩小，乳头颜色由红变为正常的乳白色，乳腺重量基本恢复到生理盐水组水平。光镜下组织学观察证实，鹿羊乳癖康颗粒中、高剂量组家兔乳腺组织改变，显示对实验性乳腺增生有较好的治疗效果。阳性对照药乳疾灵颗粒与鹿羊乳癖康颗粒高剂量组的疗效相似。上述结果表明，降低家兔血清雌二醇水平，可能是鹿羊乳癖康颗粒和乳疾灵颗粒治疗乳腺增生的机理所在。
综上所述，鹿羊乳癖康颗粒对家兔乳腺增生病理模型有较好的治疗作用，此结果与其初步临床试验结果相一致［4］，值得深入研究和开发应用。
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7 徐叔云，扁如濂，陈修.药理试验方法学/[M/].第2版.北京：北京人民卫生出版社，1991.693?694
8 马清钧，王淑珍.常用中药现代研究与临床/[M/].天津科技翻译出版社，1995.367?371
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