高效液相色谱法测定九味肝泰胶囊中黄芩苷含量

【摘要】  　　［目的］建立九味肝泰胶囊中黄芩苷的含量测定方法。［方法］色谱柱为大连依利特C18（200×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水-冰醋酸（50∶50∶1）；检测波长274nm；柱温35℃；流量1min/ml。［结果］黄芩苷在10.6～106.0μg/ml浓度范围内线性关系良好，r=0.9997，平均回收率为97.00%，RSD=1.68%。［结论］本法方便、快速、准确，可用于九味肝泰胶囊的质量控制。

【关键词】  高效液相色谱法 九味肝泰胶囊 黄芩苷 含量测定

　　Abstract:［Objective］ To set up content measurement of baicalin in Jiuwei Gantai Capsule.［Method］ The chromatogram column is Dalian Yilite C18（200×4.6mm，5μm）；the flow phase：carbinol-water-icy vinegar acid（50∶50∶1）；the tested wave length 274nm；the column temperature 35℃；flow amount 1min/ml.［Result］ In concentration of 10.6～106.0μg/mL，the baicalin has good linear relationship，r=0.9997，the average reclaim rate 97.00%，RSD=1.68%.［Conclusion］ The method is convenient，quick，correct，can be used for quality control of Jiuwei Gantai Capsule.

　　Key words:HPLC；Jiuwei Gantai Capsule；baicalin；content measurement
   
　　九味肝泰胶囊是由三七、郁金、黄芩、山药、五味子等9味中药材组成，具有化瘀通络、疏肝健脾的功效，用于气滞血瘀兼肝郁脾虚所致的胁肋痛或刺痛，抑郁烦闷，食欲不振，食后腹胀脘痞，大便不调，或胁下痞块等。黄芩有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎作用［1］。本文建立了九味肝泰胶囊中黄芩苷的含量测定方法，该方法具有分离效果好、灵敏、准确等优点，可用于该产品的质量控制。

　　1  仪器与试药
   
　　高效液相色谱仪：Agilent1100型，色谱柱：大连依利特C18（200×4.6mm，5μm）；黄芩苷对照品（药品生物制品检定所，批号：110715-200514）；甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯，水为超纯水；九味肝泰胶囊（长沙泰宝才松堂制药厂，批号为20080107，20080201，20080206）。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件  色谱柱为大连依利特C18（200×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水-冰醋酸（50∶50∶1）；检测波长274nm；柱温35℃；进样量10μL；流量1min/mL。此条件下黄芩苷与其它组分能达到基线分离，且阴性对照试验无干扰（图1）。

　　ABCA.对照品溶液  B.供试品溶液  C.阴性对照溶液

　　图1  高效液相色谱图（略）

　　2.2  供试品溶液的制备  取供试品研细混匀，取约6g，精密称定，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理20min，取出，放冷，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过即得。

　　2.3  线性关系的考察  精密称取黄芩苷对照品10.60mg，置100ml量瓶中，加50%甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，黄芩苷的浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程：Y=1.318×106x?1.753×104，r=0.9997，表明黄芩苷的浓度在10.6～106.0μg/mL范围内具有良好线性关系。

　　2.4  精密度试验  取同一对照品溶液10μL，平行操作6次，注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积计算。结果峰面积的RSD＝0.71%，表明仪器精密度良好。

　　2.5  重现性试验  取同一批号的九味肝泰胶囊（批号：20080107），按含量测定项下供试品制备方法平行操作5次，并测定。结果RSD＝1.24%，表明方法重现性良好。

　　2.6  稳定性试验  精密吸取同一供试品溶液，按上述色谱条件分别在0、4、8、16、24、48h分别进样6次，测定峰面积，结果48h内其RSD＝1.35%，表明本品在48h内稳定。

　　2.7  加样回收率试验  精密称取已知含量为0.7854mg/g九味肝泰胶囊6份，精密添加不同量的黄芩苷对照品，置100ml量瓶中，加50%甲醇约80ml，超声处理20min，取出，放冷，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，按上述色谱条件测定，结果见表1。结果表明本法回收率好，方法可行。
　　
　　表1  加样回收试验结果（略）

　　2.8  样品测定

　　分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液，按上述色谱条件测定，计算本品黄芩苷的含量，结果列于表2。

　　表2  样品测定结果（略）

　　3  讨论
   
　　实验以50%甲醇作为提取溶媒，对不同超声波处理时间进行了对比，实验结果表明超声处理20min已提取完全，故本文选择超声处理20min作为供试品溶液的提取方法。对不同系统的流动相进行了比较，结果样品中的黄芩苷在甲醇-水-冰醋酸（50：50：1）中分离效果好，峰形较佳，故采用甲醇-水-冰醋酸（50：50：1）为流动相。

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  　　［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［S］.北京：化学出版社，2005：211.