高效液相色谱法测定补脾益肠胶囊中补骨脂素和异补骨脂素的含量

【摘要】 目的 建立补脾益肠胶囊中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定方法。方法Hedera ODS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱，流动相为甲醇∶水（58∶42），检测波长为245 nm。结果 补骨脂素的线性范围为0.020~0.30 μg，r=0.999 8 (n=7)，平均加样回收率为100.61%，RSD为1.86%（n=5）；异补骨脂素的线性范围为0.038~0.266 μg，r=0.999 9 (n=7)，平均加样回收率为100.76%，RSD 为1.60%(n=5)。结论 该方法简便，准确，重现性好，可以应用于补脾益肠胶囊的质量控制。
　　【关键字】 补脾益肠胶囊；补骨脂素；异补骨脂素；高效液相色谱法
　　【Abstract】 Oobjective To establish the method for determination of psoralen and isopsoralen in Bupi Yichang Capsules. Methods The Hedera ODS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm) was used. The mobile phase consisted of methanol-water (58∶42).The flow rate was 0.8 ml/min.The detection wavelength was set at 245 nm. RESULTS The linear range of psoralen was 0.020-0.30 μg, r=0.999 8,the average recovery was 100.61% with RSD of 1.86%. The linear range of isopsoralen was 0.038-0.266 μg, r=0.999 9, the average recovery was 100.76% with RSD of 1.60%. CONCLUSION It is a simple and accurate method for the quality control of Bupi Yichang Capsules.
　　【Key words】 Bupi Yichang Capsules;psoralen; isopsoralen；HPLC
　　
　　补脾益肠胶囊是将原补脾益肠丸中生药组分经提取后制得，由黄芪、补骨脂、党参、白芍、白术、延胡索、当归、砂仁、木香、防风、赤石脂、甘草等组成，具有补中益气，健脾和胃，涩肠止泻，止痛止血，生肌消肿作用。用于脾虚泄泻症，临床表现为腹泻腹痛、腹胀、肠鸣、黏液血便或阳虚便秘等证，以及慢性结肠炎、溃疡性结肠炎、结肠过敏见有上述证候者[1]。原补脾益肠丸为胃肠分溶型丸剂，外层在胃中溶散，在肠中吸收，以发挥全身的作用治其本，而内层在肠道中溶散，提高病灶部位的药物浓度，以提高药物局部作用治其标。补脾益肠胶囊保留了原制剂的这一特点，将胃溶部分提取物包薄膜衣，肠溶部分提取物包肠溶衣后装入胶囊。
　　胃溶部分中的黄芪、党参为方中君药。肠溶部分中的补骨脂为方中臣药，除甘草为使药外，其余均为佐药。补骨脂具有温肾助阳，纳气，止泻作用[2]。药理研究表明，补骨脂提取物具有抗菌、抗病毒作用，其水提液具有增强免疫的作用[3]。此外，补骨脂与赤石脂组成的止血复方中发现有效成分为补骨脂素[4]，因此本文以补骨脂素和异补骨脂素为本方中肠溶部分的指标性成分，采用高效液相色谱法对其含量进行测定，以控制产品的质量。
　　1 仪器与试药
　　1.1 仪器SHIMADZU LC-10ATvp型高效液相色谱仪（日本岛津），SPD-10Avp型紫外检测器（日本岛津）；Hedera ODS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱；KQ-100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BS124S天平（德国赛多利斯）。
　　1.2 试药补脾益肠胶囊浸膏（深圳三九医药业股份有限公司提供），补骨脂素（批号：110739-200613，药品生物制品检定所），异补骨脂素（批号：110738-200511，中国药品生物制品检定所），色谱纯甲醇，纯净水。
　　2 方法与结果
　　2.1 色谱条件
　　流动相：甲醇∶水（58∶42）；流速：0.8 ml/min；柱温：室温；检测波长：245 nm[5]。
　　2.2 供试品溶液的制备
　　取补脾益肠胶囊浸膏1 g，精密称定，置50 ml容量瓶中，加甲醇约45 ml，超声30 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，过滤，取续滤液10 ml即得。
　　2.3 对照品溶液的制备
　　分别精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每毫升各含0.1 mg的对照品溶液，临用时稀释到适当浓度。
　　2.4 空白对照试验
　　按本制剂的处方、工艺提取不含补骨脂药材的浸膏，按上述2.2方法制备阴性对照溶液。照上述色谱条件，吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各20 μl，分别注入液相色谱仪。
　　结果见图1。补骨脂素的保留时间为10.4 min，异补骨脂素的保留时间为11.7 min，二者的分离度为3.0，理论塔板数均在15 000以上，表明补骨脂素和异补骨脂素能够良好的分离，且方中的其他成分不干扰补骨脂素和异补骨脂素的测定。
　　
　　
　　 　　图1 HPLC图谱
　　A.对照品溶液（1.补骨脂素 2.异补骨脂素）B.供试品溶液 C.阴性对照溶液
　　
　　2.4 方法学考察
　　2.4.1 线性关系的考察
　　分别取补骨脂素和异补骨脂素对照品适量，精密称定后，以甲醇溶解并定容于同一容量瓶中制成每1ml中各含补骨脂素和异补骨脂素100μg和200μg的混合对照品溶液作为储备液。精密吸取储备液，以甲醇稀释配制成补骨脂素和异补骨脂素浓度分别为1.0、2.0、5.0、8.0、10.0、12.0、15.0；1.9、3.8、5.7、7.6、9.5、11.4、13.3 μg/ml的溶液，分别吸取上述对照品溶液20 μl，按上述色谱条件进行测定。以峰面积A为纵坐标，溶液浓度C(μg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，回归方程。其中，补骨脂素的标准曲线为A=209 056C+3485.1，r=0. 999 8，线性范围为0.020~0.30 μg；异补骨脂素的标准曲线为A=201 857C－33777，r为0.999 9，线性范围为0.038~0.266 μg。
　　2.4.2 精密度考察
　　取对照品溶液，按上述色谱条件分别重复进样5次，结果补骨脂素RSD为0.20%，异补骨脂素RSD为0.23%，表明该方法的精密度良好。
　　2.4.3 稳定性考察
　　取新鲜配制的供试品溶液分别于0、2、4、6、8、10、24 h进行测定，结果补骨脂素RSD为1.10%，异补骨脂素RSD为1.45%，说明供试品溶液在24h内是稳定的。
　　2.4.4 重复性试验
　　精密称取补脾益肠胶囊肠溶浸膏5份，按2.2方法配成供试品溶液，测定含量，结果补骨脂素的平均含量为2.663 mg/g，RSD为2.16%，异补骨脂素的平均含量为1.439 mg/g，RSD为2.79%，说明重现性较好。
　　2.4.5 加样回收试验
　　精密称取已知含量的样品5份，分别精密加入补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品，按2.2方法制备5份，分别进样，测定。结果补骨脂素平均回收率为100.61%，RSD为1.86% (n=5)，异补骨脂素平均回收率为100.76%，RSD为1.60% (n=5)，见表1。
　　
　　
　　3 讨论
　　在供试品溶液的制备过程中，对超声时间进行了考察，在超声0、10、30 min后样品中补骨脂素的含量分别为2.363、2.534、2.6 mg/g；异补骨脂素的含量分别为1.221、1.318、1.4 mg/g，再延长超声时间，补骨脂素和异补骨脂素的含量不再增加，因此供试品溶液在制备时超声时间选择为30 min。
　　本实验采用高效液相色谱法测定补脾益肠胶囊中补骨脂素和异补骨脂素的含量，经方法学考察，本法简便，准确，重现性好，可以用于控制补脾益肠胶囊的质量。
　　
　　
　　[1] 中华人民共和国卫生部.药品标准•中药成方制剂(第18册)
　　[2] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典.化学出版社,2005:129.
　　[3] 罗艺晨，刘娟，朱兆荣. 中药补骨脂的研究进展.中兽医学杂志,2007,5:49-53.
　　[4] 天津医学院附属妇产科及中药研究室.内服中药——止血灵.天津医药.1973,1(1):36.
　　[5] 张壮丽，刘力，徐德生.高效液相色谱法测定补肾益气颗粒中补骨脂素和异补骨脂素含量.时珍国医国药,2007,18(2):373-374.