益气复胰汤汤剂与中药配方颗粒化学成分的对比研究

                          作者：刘志承　陈圻昌　陈军　索娟

　　【摘要】 目的 对益气复胰汤传统汤剂与中药配方颗粒有效成分（或指标成分）的含量进行测定,探讨益气复胰汤中药配方颗粒在中药复方配伍中应用的可行性。方法 采用高效液相色谱方法,对益气复胰汤汤剂与中药配方颗粒中黄芪甲苷、芍药苷和延胡索乙素等指标成分进行含量测定。结果 益气复胰汤1号汤剂与中药配方颗粒中的黄芪甲苷含量分别为0．031%和0．039%；益气复胰汤2号汤剂与中药配方颗粒中的芍药苷含量分别为0．41%和0．39%；益气复胰汤3号汤剂与配方颗粒中的延胡索乙素含量分别为0．011%和0．016%。结论 两者主要指标成分的含量差异无统计学意义,为中药配方颗粒在中药复方配伍中的应用提供了实验依据。?
　　【关键词】 益气复胰汤；中药配方颗粒；高效液相色谱法

　　【Abstract】 Objective To determine the content of traditional decoction of Yiqi fuyi and the traditional Chinese medicine formula granules,approached the feasibility of use the Yiqi fuyi prescription drug granules in Chinese medicine complex compatibility.Methods The HPLC method was used to detect the content of astragaloside,paeoniflrin and tetrahydropalmatine both in Yiqi fuyi decoction and formula granulas.Results The content of astragali in Yiqi fuyi number and the formula granules are 0．031%and 0．039%,the content of peoniflorin in Yiqi fuyi number 2 and the formula granules are 0．41%and 0．39%,and the content of tetrahydropalmatine in Yiqi fuyi number 3 and the formula granules are 0．011%and 0．016%.Conclusion The content of the main index ingredients inYiqifuyi decoction and the formula granules have no significant diffrence.It has made foundation for the use of formula granules on clinic.?
　　【Key words】 Decoction of Yiqifuyi；Formula granule；HPLC
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　　中药汤剂是我国应用最早、最广泛的一种剂型。但是中药汤剂系饮片临用煎汤，存在着用药不及时；携带、存储不方便；煎煮方法、程序烦琐，不规范；饮片配量不准确等问题。这些问题的存在严重制约了中药汤剂的使用和中药化的。将单味中药水煎液制成中药配方颗粒随方配伍冲服，是中药现代化的一种思路。中药配方颗粒是将符合炮制规范的中药饮片经提取、浓缩、干燥等制药工艺，按一定比例制成的散剂或颗粒剂^[2]，它保持了传统用药的特点，可随证加减，运用灵活，安全有效。中药配方颗粒不需煎煮、即冲即服，具有简单、快捷、方便等优点。随着现在生活节奏的加快，越来越多患者更愿意选择中药配方颗粒代替汤剂。?
　　但这一剂型能否在临床上真正替代中药汤剂，其疗效如何，目前仍是值得探讨的问题，应该从质量标准、药效学和临床疗效等多方面进行全面评价。益气复胰汤1号、2号、3号是深圳市第二人民糖尿病专科使用多年的“协定处方”，在临床上以汤剂的形式应用，临床证明其疗效确切^[1]。本研究对益气复胰汤汤剂与中药配方颗粒中有效成分（或指标成分）进行研究，以方中黄芪甲苷、芍药苷和延胡索乙素为指标成分进行含量测定，为中药配方颗粒在中药复方配伍中的应用提供实验依据。?
　　1 益气复胰汤1号汤剂与中药配方颗粒中黄芪甲苷成分的比较?
　　1．1 益气复胰汤1号组成 黄芪30 g、柴胡10 g、白芍15 g、荔枝核20 g、丹参20 g、熟地黄20 g、山药20 g、山茱萸10 g、葛根20 g、白术12 g、茯苓20 g、鬼箭羽15 g(黄芪、柴胡、白芍、荔枝核、丹参、熟地黄、山药、山茱萸、葛根、白术、茯苓、鬼箭羽等药材经鉴定均符合《药典》2005年版一部质量要求)。?
　　1．2 益气复胰汤1号中药配方颗粒 黄芪、柴胡、白芍、荔枝核、丹参、熟地黄、山药、山茱萸、葛根、白术、茯苓、鬼箭羽等中药配方颗粒由广东一方制药有限公司提供。?
　　1．3 益气复胰汤1号汤剂的制备 按处方量称取黄芪、柴胡、白芍、荔枝核、丹参、熟地黄、山药、山茱萸、葛根、白术、茯苓、鬼箭羽饮片,加8倍量水,浸泡10 min,煎煮30 min,第2次加6倍量水,煎煮30 min,滤过,合并二次滤液,滤液减压浓缩至1?∶?1(饮片g/ml),放置,备用。?
　　1．4 益气复胰汤1中药配方颗粒的配制 按处方量取黄芪、柴胡、白芍、荔枝核、丹参、熟地黄、山药、山茱萸、葛根、白术、茯苓、鬼箭羽配方颗粒,加水制备成1?∶?1(饮片g/ml),放置,备用。?
　　1．5 益气复胰汤1号黄芪甲苷的含量测定?
　　1．5．1 仪器与试药Agilent 1100 高效液相色谱仪,包括:四元泵,在线脱气机,柱温箱；蒸发光散射检测器(美国惠泽)；Sartorius BP211D,十万分之一天平(北京塞多利斯天平有限公司);乙腈(美国Fisher公司,色谱纯)；甲醇、正丁醇、氨试液(AR,均为广州化学试剂厂)；水为超纯水、黄芪甲苷(中国药品生物制品检定所,批号:110753-200212),供定量测定用；益气复胰汤1号汤剂,自制；益气复胰汤1号配方颗粒,自制；益气复胰汤1号配方颗粒阴性供试品,自制。?
　　1．5．2 方法与结果 ①色谱条件:色谱柱:Kromasil C??18?(250 mm×4．6 mm,5 μm)；流动相:乙腈-水(32?∶?68)；流速:0．8 ml/min；ELSD参数:气体流速为2．0 ml/min,漂移管温度为90℃；进样量:10 μl；理论塔板数以黄芪甲苷不低于4000;②对照品溶液的制备:精密称取黄芪甲苷对照品5．00 mg置10 ml量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得0．5 mg/ml的黄芪甲苷对照品溶液;③标准曲线与线性关系:精密吸取对照品溶液4、8、12、16、20 μl进样,测定,以对照品溶液质量浓度的对数为横坐标(x),峰面积的自然对数为纵坐标(y)绘制标准曲线,计算回归方程为y=1．294×10-6x+0．02748,r=0．9996,黄芪甲苷在2．024～10．120 μg的范围内线性关系良好；④供试品溶液的制备:分别精密量取益气复胰汤1号汤剂与配方颗粒汤剂各20．0 ml,用水饱和正丁醇振摇提取4次(4×60 ml),合并正丁醇液,用氨试液充分洗涤2次,每次60 ml,弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣加10 ml水使溶液,通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1．5 cm,长12 cm),以水50 ml洗脱,弃去水液,再用40%乙醇30 ml洗脱,弃去洗脱液,继用70%乙醇80 ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,用甲醇溶解并定容至5 ml量瓶中,摇匀,即得；⑤阴性供试品溶液的制备:准确量取益气复胰汤1号配方颗粒汤剂缺黄芪的阴性样品适量,照“④”项下方法操作,制备阴性供试品溶液;⑥精密度试验:取黄芪甲苷对照品溶液,在1 d内连续进样5次,每次10 μl,计算峰面积RSD为1．90%(n=5);⑦稳定性试验:取所制备的益气复胰汤1号配方颗粒汤剂,分别在0、3、6、12、18、24、36、48 h测定黄芪甲苷的峰面积,计算黄芪甲苷峰面积的RSD为1．64%。结果表明,供试品溶液在 48 h内稳定；⑧重现性试验:精密称取同一批益气复胰汤1号配方颗粒汤剂5份,各约20 ml,按“④”供试品溶液制备,进样分析,测定相应的峰面积,计算黄芪甲苷平均质量分数为0．036%,RSD=1．26%(n=5),表明方法的重现性良好;⑨回收率试验:精密称定已测定的益气复胰汤1号配方颗粒汤剂6份,各约10 ml,分别精密加入黄芪甲苷0．5 mg,按供试品溶液制备项下操作,计算回收率,平均回收率为98．6%,RSD=1．92%;⑩样品的测定:分别取不同批次的益气复胰汤1号,按照供试品液制备项下方法操作,得供试品溶液,分别精密吸取供试品溶液10 μl,按照上述色谱条件分析测定,以外标两点法计算,样品的测定结果见表1,HPLC分析图谱见图1。? 　
　　2 益气复胰汤2号汤剂与中药配方颗粒中芍药苷成分的比较?
　　2．1 益气复胰汤2号组成 生晒参15 g、知母12 g、牡丹皮10 g、天花粉20 g、生地黄30 g、泽泻15 g、白芍15 g、麦冬15 g、五味子10 g、丹参20 g、山茱萸10 g、葛根20 g（生晒参、知母、牡丹皮、天花粉、生地黄、泽泻、白芍、麦冬、五味子、丹参、山茱萸、葛根等药材经鉴定均符合《药典》2005年版一部质量要求）。?
　　2．2 益气复胰汤2号中药配方颗粒 生晒参、知母、牡丹皮、天花粉、生地黄、泽泻、白芍、麦冬、五味子、丹参、山茱萸、葛根配方颗粒由广东一方制药有限公司提供。?
　　2．3 益气复胰汤2号汤剂的制备 按处方量称取生晒参、知母、牡丹皮、天花粉、生地黄、泽泻、白芍、麦冬、、五味子、丹参、山茱萸、葛根饮片,加8倍量水,浸泡10 min,煎煮30 min,第2次加6倍量水,煎煮30 min,滤过,合并二次滤液,滤液减压浓缩至1?∶?1(g饮片/ml),放置,备用。?
　　2．4 益气复胰汤2号中药配方颗粒汤剂的制备 按处方量取生晒参、知母、牡丹皮、天花粉、生地黄、泽泻、白芍、麦冬、五味子、丹参、山茱萸、葛根配方颗粒,加水制备1?∶?1(g饮片/ml),放置,备用。?
　　2．5 益气复胰汤2号芍药苷的含量测定?
　　2．5．1 仪器与试药 Agilent 1100 高效液相色谱仪,包括:四元泵,在线脱气机,柱温箱；Sartorius BP211D,十万分之一天平(北京塞多利斯天平有限公司)。乙腈(美国Fisher公司,色谱纯),磷酸、甲醇、乙醇(AR,均为广州化学试剂厂),水为超纯水。芍药苷(中国药品生物制品检定所,批号:110736-2130423)；益气复胰汤2号汤剂,自制；益气复胰汤2号配方颗粒汤剂,自制；益气复胰汤2号配方颗粒汤剂阴性供试品,自制。?
　　2．5．2 方法与结果 ①色谱条件:色谱柱:Kromasil C₁₈(250 mm×4．6 mm,5 μm)；流动相:乙腈-0．1%磷酸溶液 (?14?∶?86?)；检测波长为230 nm;柱温:30℃；进样量10 μl；流速:0．8 ml/min,理论板数按芍药苷峰应不低于2000；②对照品溶液的制备:精密称取在干燥器中用五氧化二磷减压干燥36 h的芍药苷对照品适量,置于量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,使其浓度为0．521 mg/ml,摇匀,作为芍药苷对照品溶液;③标准曲线与线性关系考:分别精密吸取芍药苷对照品溶液0．0521、0．1024、0．2084、0．3126、0．4168、0．521 mg/ml芍药苷溶液,按上述色谱条件各进样10 μl，测定峰面积。以芍药苷的进样量为横坐标,芍药苷的峰面积为纵坐标,回归得回归方程:y=13541．04593 X-25．3405,r=0．9998。结果表明,芍药苷的进样量在0．521～5．2l0 μg范围内,与其峰面积有良好的线性关系；④供试品溶液的制备:分别精密量取益气复胰汤2号汤剂与配方颗粒汤剂各20．0 ml,用石油醚(60～90℃)萃取2次,每次30 ml,弃去石油醚层,水层用乙酸乙酯萃取3次，每次30 ml,弃去乙酸乙酯层,水层用浓氨试液调pH 11左右,用水饱和正丁醇萃取33次，每次30 ml,合并正丁醇萃取液,用正丁醇饱和的水50 ml洗涤1次,弃去水液,正丁醇萃取液水浴蒸干,残渣加甲醇溶解,并定量转移至5 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得供试品溶液；⑤阴性供试品溶液的制备:准确量取益气复胰汤2号配方颗粒汤剂缺白芍,牡丹皮的阴性样品适量,照“④”项下方法操作,制备阴性供试品溶液;⑥精密度试验:取芍药苷对照品溶液,在1 d之内连续进样5次,每次10 μl,计算峰面积RSD为0．81%(n=5);⑦稳定性试验:取所制备的益气复胰汤2号配方颗粒汤剂,分别在0、2、4、6、8、10 h测定黄芪甲苷的峰面积,计算芍药苷峰面积的RSD为1．15%。结果表明,供试品溶液在10 h内稳定；⑧重现性试验:精密称取同一批益气复胰汤2号配方颗粒汤剂5份,各约20 ml,按“④”供试品溶液制备,进样分析,测定相应的峰面积,计算芍药苷平均质量分数为0．36%,RSD=0．59%(n=5),表明方法的重现性良好;⑨回收率试验:精密称定已测定的益气复胰汤2号配方颗粒汤剂6份,各约10 ml,分别精密加入芍药苷0．521 mg,按供试品溶液制备项下操作,计算回收率,平均回收率为 97．9%,RSD=1．84%;⑨样品的测定:分别取不同批次的益气复胰汤2号,按照供试品液制备项下方法操作,得供试品溶液,分别精密吸取供试品溶液10 μl,按照上述色谱条件分析测定,以外标两点法计算,样品的测定结果见表2,HPLC分析图谱见图2。?
　　
　　3 益气复胰汤3号中药配方颗粒与汤剂中延胡索乙素含量的比较?
　　3．1 益气复胰汤3号组成 黄芪15 g、地龙15 g、肉桂10 g、附子20 g、熟地黄20 g、 金樱子15 g、 桑椹子15 g、牛膝15 g、鸡血藤30 g、延胡索10 g、山药15 g、茯苓20 g、（黄芪、地龙、肉桂、附子、熟地黄、金樱子、桑椹子、牛膝、鸡血藤、延胡索、山药、茯苓等药材经鉴定均符合《中国药典》2005年版一部质量要求）。?
　　3．2 益气复胰汤3号中药配方颗粒 黄芪、地龙、肉桂、附子、熟地黄、金樱子、桑椹子、牛膝、鸡血藤、延胡索、山药、茯苓配方颗粒由广东一方制药有限公司提供。?
　　3．3 益气复胰汤3号汤剂的制备 按处方量称取黄芪、地龙、肉桂、附子、熟地黄、金樱子、桑椹子、牛膝、鸡血藤、延胡索、山药、茯苓饮片,加8倍量水,浸泡10 min,煎煮30 min,第2次加6倍量水,煎煮30 min,滤过,合并二次滤液,滤液减压浓缩至1?∶?1(饮片g/ml),放置,备用。?
　　3．4 益气复胰汤3号中药配方颗粒汤剂的制备 按处方量取黄芪、地龙、肉桂、附子、熟地黄、金樱子、桑椹子、牛膝、鸡血藤、延胡索、山药、茯苓配方颗粒,加水制备1?∶?1(饮片g/ml),放置,备用。?
　　3．5 益气复胰汤3号延胡索乙素的含量测定?
　　3．5．1 仪器与试药Agilent 1100 高效液相色谱仪,包括:四元泵,在线脱气机,柱温箱;Sartorius BP211D,十万分之一天平(北京塞多利斯天平有限公司)。延胡索乙素对照品(中国药品生物制品检定所,批号:726-8903)；甲醇为色谱纯,水为纯净水,其他试剂均为分析纯。益气复胰汤3号汤剂,自制；益气复胰汤3号配方颗粒汤剂,自制；益气复胰汤3号配方颗粒汤剂阴性供试品,自制。?
　　3．5．2 方法与结果 ①色谱条件：色谱柱: Kromasil C₁₈(250 mm×4．6 mm,5 μm)；流动相:甲醇-水-三乙醇胺溶液 (70?∶?30?∶?0．5)；检测波长为280 nm；柱温:25℃；进样量15 μl；流速:1 ml/min，理论板数按延胡索乙素峰计算应不低于3000；② 对照品溶液的制备: 准确称取延胡索乙素对照品4．01 mg,置于100 ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为对照品溶液；③标准曲线与线性关系考察: 分别精密吸取对照品溶液0．1、0．2、0．4、0．8、1．0 ml，分别置于1 ml容量瓶中，加甲醇定容,摇匀，分别吸取不同浓度对照品溶液20 μl，进行分析测定。以平均峰峰面积值(y)为纵坐标，进样量(x)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为y=217 889x+4 340．2(r=0．9999)。结果表明，延胡索乙素进样量在0．08～0．80 μg范围内呈良好的线性关系;④ 供试品溶液的制备：分别精密量取益气复胰汤3号汤剂与配方颗粒汤剂各10．0 ml，水浴蒸干，残渣加甲醇-浓氨水溶液(20?∶?1)适量使溶解，转入10 ml容量瓶中，用甲醇-浓氨水溶液定容，摇匀，经0．45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液;⑤阴性供试品溶液的制备：准确量取益气复胰汤3号配方颗粒汤剂缺延胡索的阴性样品适量，照“④”项下方法操作，制备阴性供试品溶液;⑥精密度试验：取延胡索乙素对照品溶液，在1 d之内连续进样6次，每次15 μl，计算峰面积RSD为1．29%，表明精密度良好;⑦稳定性试验：取所制备的益气复胰汤3号配方颗粒汤剂，分别在0、2、4、6、8、12 h测定延胡索乙素的峰面积，计算延胡索乙素峰面积的RSD为1．62%。结果表明，供试品溶液在12 h内稳定;⑧重现性试验：精密称取同一批益气复胰汤3号配方颗粒汤剂5份，各约10 ml，按“④”供试品溶液制备,进样分析,测定相应的峰面积,计算延胡索乙素平均质量分数为0．018%,RSD=0．59%(n=5),表明方法的重现性良好；⑨回收率试验:精密称定已测定的益气复胰汤3号配方颗粒汤剂6份,各约5 ml,分别精密加入延胡索乙素0．521 mg,按供试品溶液制备项下操作,计算回收率,平均回收率为96．8%,RSD=2．18%；⑩样品的测定:分别取不同批次的益气复胰汤3号,按照供试品液制备项下方法操作,得供试品溶液,分别精密吸取供试品溶液10 μl,按照上述色谱条件分析测定,以外标两点法计算,样品的测定结果见表3,HPLC分析图谱见图3。