肾病综合征患儿免疫功能测定的临床意义

                         作者：刘雪梅　张洪霞　段春红

　　【摘要】 目的研究肾病综合征(NS)患儿T细胞亚群、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-8(IL-8)在肾病综合征(NS)患儿中的水平变化及其临床意义。方法 分别采用流式细胞仪直接免疫荧光法和特异性酶联免疫吸附实验检测30例体检健康者，30例NS发作组和32例NS缓解组患者血清中T细胞亚群和IL-2、IL-6和IL-8水平及其动态变化。结果 NS发作组T细胞亚群均明显高于正常对照组(P＜0．05)及NS缓解组(P<0．05)，NS发作组IL-2、IL-6和IL-8水平亦明显高于正常对照组(P＜0．01)及NS缓解组(P<0．01)，而NS缓解组IL-2、IL-6和IL-8水平与正常对照组无显著性差异。结论 研究提示肾病综合征(NS)患儿存在明显的免疫功能紊乱。 ?
　　【关键词】 肾病综合征；T细胞亚群；IL-2；IL-6；IL-8??
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　　【Abstract】 Objective To investigate the significance of the change of peripheral T-cell subsets、IL-2、IL-6 and IL-8 levels in nephrotic syndrome(NS)patients. Method The T-cell subsets、L-2、IL-6 and IL-8 levels in 62 nephrotic syndrome and 30 normal controls(NC)were determined by direct immunofluoresscence using flow cytometry and enzyme linked immunosorbent assays(ELISA) .Results The result showed the levels of T-cell subsets in nephritic stage (n=30)were higher than those in nephrotic stage remission(n=32，P＜0．05)and those in NC(n=30，P＜0．05)； the levels of IL-2、IL-6 and IL-8 in nephritic stage (n=30)were also higher than those in nephrotic stage remission(n=32，P＜0．01)and those in NC(n=30,P＜0．01).However，there was no difference of IL-2、IL-6 and IL-8 levels between nephrotic stage remission group and NC group(P＞0．05). Conclusion The study suggested that nephrotic syndrome exited immunity disfunction.?
　　【Key words】Nephrotic syndrome； T cell subsets；Interleukin-2；Interleukin-6; Interleukin-8
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　　细胞免疫在肾病综合征(nephrotic syndrome，NS)活动中起重要作用。鉴于T细胞亚群、IL-2、IL-6和IL-8具有众多而高效的生物学效应,其在肾脏疾病发病过程中所起的重要作用正日益受到人们的重视。本文分别采用流式细胞仪直接免疫荧光法和特异性酶联免疫吸附实验(ELISA)检测肾病综合征患者血清中T细胞亚群、IL-2、IL-6和IL-8水平，并与对照组进行比较，以探讨其发病时的变化及临床意义。?
　　1 资料与方法?
　　1．1 资料来源 收集2004年12月至2006年12月月期间在本院住院的原发性肾病综合征患儿共62例，其中男35例，女27例，年龄1～14岁，平均6．5岁，病程2～18个月，病例均符合有关诊断标准 ,均接受激素中长程疗法。62例患者于住院期间经肾穿刺活检，按照1982年WHO肾小球疾病分类标准分类, 其病理类型为：肾小球微小病变10例，局灶性节段病变6例，膜性肾病5例，毛细血管内增生10例，系膜增生22例，膜增殖性6例，硬化性肾炎3例。根据临床资料及实验检查数据，将患者分为NS发作组(n=30)及NS缓解组(n=32)，两组有可比性(P＞0．05)。同时，选择同期门诊体检的小儿54例作为对照组，年龄2个月～10岁，肝、肾功能检查正常。?
　　1．2 检测方法 ?
　　1．2．1 T细胞亚群检测 所用仪器为COULTER Epics XL单激光四色流式细胞仪，为美国贝克曼库尔特公司生产。主要试剂为：单克隆抗体CD4-FITC／CD8-PE／CD3-PC5，相应标记的小鼠IgG1-FITC／IgG1-PE／IgG1-PC5，Optilyse C溶血剂，均购于法国Immunotech公司。取100 μl抗凝血于流式专用试管中，加入20 ul三标记单克隆荧光抗体，室温闭光反应20 min，加入500 ul红细胞裂解液，溶解红细胞15 min，1000 转/min离心5 min，弃上清，再加入500 ul鞘液，混匀后上机检测并记录荧光抗体染色阳性CD3、CD4及CD8百分率。?
　　1．2．2 IL-2、IL-6 和 IL-8检测 肾病期血标本在激素、免疫抑制剂前采集，缓解期血标本在尿蛋白转阴后采集。空腹静脉采血、分离血清，-20℃ 保存待测。IL-2、IL-6和IL-8测定采用ELISA法，试剂盒由上海森雄有限公司提供(美国进口)，检测操作按试剂盒说明书进行，在Bio-TECH酶标仪上测吸光度A450)，作标准曲线，结果。?
　　1．3 统计学方法 统计分析用SPSS软件。T细胞亚群、IL-2、IL-6和IL-8水平比较用t检验。数据用(x±s)表示。?
　　2 结果?
　　2．1 不同疾病期T细胞亚群的比较 NS发作组T细胞亚群均明显高于正常对照组(P＜0．05)及NS缓解组(P＜0．05),见表1。?
　　2．2 不同疾病期IL-2、IL-6和IL-8水平比较 NS发作组IL-2、IL-6和IL-8水平上升。与NS缓解组及对照组比较，差异均有显著性(P＜0．01)；NS缓解组IL-2、IL-6和IL-8水平高于正常对照组，但两者水平在统计学上无明显差异(表2)。?
　　　3 讨论?
　　免疫介导损伤在原发性肾小球疾病发病过程中起主要的启动性作用。免疫异常和原发性肾小球疾病恶化密切相关。随着人们认识的提高，对T淋巴细胞活化及克隆扩张的分子学基础知识显著增加，许多细胞因子及其受体受到广泛重视，有报告认为这些细胞因子及其受体在免疫性肾病发病机制与病理改变中发挥重要作用^[1]。本研究通过分析NS患者血清中T细胞亚群、IL-2、IL-6及IL-8水平的变化，进一步探索免疫异常在NS发病过程中的作用。?
　　T淋巴细胞亚群是机体免疫应答中起核心作用的细胞群体，它包含不同的功能亚群；不同亚群通过分泌特殊的细胞因子介导细胞免疫和调节体液免疫应答，各自担负着特殊的免疫功能^[2]。1980年，Reinherz等首先用相应单克隆抗体将T细胞分成辅助性T细胞(Th)与抑制性T细胞(Ts)，前者辅助其他淋巴细胞实现对于抗原的免疫学效应，诱导或促进其他淋巴细胞的活性；后者直接对抗原靶细胞产生细胞毒性效应，抑制其他淋巴细胞的应答活动；两者在细胞不平上协同调节机体的免疫功能平衡，是机体免疫调节的中心枢杻，也是机体自身稳定机能的重要因素^[3]。本研究结果表明肾病综合征患儿活动期CD３、CD4、CD8及CD4/CD8明显升高，与缓解期和对照组相比有显著差异P＜0．05，提示T细胞免疫应答能力增强，这也可能是临床应用免疫抑制剂原发性肾病综合征的依据。?
　　IL-2主要由TH细胞在抗原或丝裂原刺激下和IL-1诱导下分泌的一种15KD的糖蛋白，其在机体的免疫应答及调节中起着重要的作用，能促进T细胞和诱导NK 细胞的增殖分化，诱导T 细胞表达IL-2受体，它能与细胞膜上IL-2R结合，增强细胞毒性细胞的杀伤活性，增强活化T细胞和NK 细胞产生IFN-γ，是机体复杂的免疫中起调节作用的最主要细胞因子，它能激活各种免疫细胞，特别是诱导T细胞的增殖和发挥免疫效应^[3]。本组研究发现，NS发作组IL-2水平明显升高，提示NS疾病活动期有T细胞异常激活。?
　　IL-6则由多种淋巴细胞和非淋巴细胞自发和在不同刺激下产生，TH2是其主要来源。肾小球固有细胞如系膜细胞、内皮细胞、上皮细胞等均能分泌IL-6,所生成的IL-6通过自分泌和旁分泌的方式刺激系膜细胞(MC)增殖。由上述细胞生成的IL-6作用于多种靶细胞,并与其他细胞因子相互作用,一方面参与肾脏的自身防御，促进炎性反应消散和修复；另一方面作攻击性炎性介质启动或促进肾组织的炎性反应和损伤，参与多种疾病的病理过程^[4]。本研究发现NS发作组IL-6水平明显高于NS缓解组及正常对照组，差异有统计学意义。而NS缓解组IL-6水平接近及恢复正常，提示在NS病中存在以IL-6增高为特征性的免疫学紊乱。IL-8主要由单核-巨噬细胞产生的一种细胞因子。其作用于嗜中性粒细胞趋化、脱粒、释放溶酶、加强炎性反应防护、促进T细胞趋化游走、加强免疫反应等^[5]，在疾病的过程中起着重要作用，并导致相关疾病。本组研究发现，NS发作组IL-8水平明显升高，提示NS患儿均存在免疫紊乱。?
　　总之，肾病综合征(NS)患儿存在明显的免疫功能紊乱，纠正其免疫失衡可能有助于其治疗。 ?
　　
　　
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