龙骨风水提物镇痛抗炎及免疫抑制作用研究

【关键词】  龙骨风水

    ［Abstract］  Objective  To observe the analgesic，anti-inflammatory and immunosuppressive actions of aqueous extract of Longgufeng （LGF） so as to provide some evidence for its clinical application in rheumatoid arthritis.Methods  A series of experiments were performed to study the actions of LGF，including hot plate experiment，mice twisting induced by acetic acid，acute inflammation caused by dimethylbenzene in mice，delayed type hypersensitivity induced by picryl chloride （PC-DTH） in mice，and proliferation of spleen lymphocytes in vitro in mice.Results  LGF 208.8 mg/kg significantly raised hot plate pain threshold of mice in the two hours after administration LGF 104.4 mg/kg remarkably decreased twisting times caused by acetic acid in mice.LGF 52.2 mg/kg markedly inhibited ear swelling induced by dimethylbenzene in mice.LGF 208.8 mg/kg remarkably suppressed the induction phase of PC-DTH in mice，and the inhibition ratio was 52.9%.Conclusion  The results suggest that LGF have the remarkable analgesic and anti-inflammatory and immunosuppressive actions.

    ［Key words］   Longgufeng；analgesia；anti-inflammatory；immunosuppression

    龙骨风学名桫椤，为桫椤科Alsophila spinuiosa植物，是广西瑶族常用的一味传统药物［1］。在瑶医理论中，龙骨风根据其形态，性味功能及临床应用特点被归纳为“七十二风”中的一种，在临床上常用来类风湿性关节炎并有良好的疗效［2］，关于其药理作用研究则未见报道，本文依据祛风湿中药的常用实验方法初步研究了龙骨风的镇痛、抗炎及免疫抑制作用，为其临床应用提供一定药依据。

    1  实验材料

    1.1  药品与试剂  龙骨风原药材，由药科大学中药复方研究室提供。龙骨风水提物制备：称取龙骨风原药材100 g，10倍量水浸泡45 min，煎煮40 min后过滤，再用8倍量水煎煮40 min，合并滤液，水浴浓缩至干，再于真空干燥箱中烘干，得干粉末，称重得率为17.4%，实验剂量以粉末计。体外实验以无菌PBS配制浓度为5 mg/ml溶液，0.22 μm微孔滤膜过滤除菌，-20 ℃保存备用，临用前稀释至所需浓度。醋酸泼尼松片（TAB.Prednisoni Acetatis，Pred），南京第二制药厂，批号：980601；2，4，6-三硝基氯苯（picryl chloride，PC），日本东京化成株式会社；罗痛定，湖南洞庭药业股份有限公司，批号：010108；醋酸（Acetic acid），南京化学试剂一厂，批号：021010807；无水乙醇，南京化学试剂一厂，批号：D30410302；二甲苯，南京化学试剂一厂，批号：990305；橄榄油，中国医药集团上海化学试剂公司，批号：F20020819；阿司匹林肠溶片，南京白敬宇制药厂，批号：20030109；元胡止痛片，南通中诚制药有限公司，批号：020501。PRMI1640培养基，GIBCO公司；新生牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司；刀豆球蛋白A（ConA），Sigma公司，批号：11028-71-0；噻唑蓝（MTT），上海伯奥生物科技公司分装，批号：970408。

    1.2  动物  昆明种小鼠18～22 g，25～28 g，雌性或雄性，由中国药科大学新中新药研究中心动物房提供。

    1.3  仪器  GJ-8402型热板测痛仪，宁海白石医药仪器厂；PB303-N型精密天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；细胞培养箱（德国Heraeus）；Sunrise酶标仪 （奥地利Tecan GmbH）；洁净工作台（苏净集团安泰公司）；离心机（上海安亭仪器厂制造80-2B），磁力加热搅拌器（GUOHUA79-1），恒温水浴锅（常州国华电器有限公司），XSZ-D2倒置显微镜（重庆光学仪器厂）。

    2  方法与结果

    2.1  龙骨风水提物对热板法所致小鼠疼痛反应的影响［3］  雌性昆明种小鼠，体重18～22 g，禁食12～14 h后，测定给药前小鼠对热板刺激的反应时间，作为给药前阈值，筛选合格小鼠50只，潜伏期5～30 s，随机分成5组，分别为阴性对照组，龙骨风52.2、104.4、208.8 mg/kg组，阳性对照组，分别灌胃给予生理盐水，龙骨风52.2、104.4、208.8 mg/kg，元胡止痛片1 g/kg，测定给药后2、3 h小鼠对热板刺激的反应时间。结果见表1，由表1可见，龙骨风水提物208.8 mg/kg给药后2、3 h可显著提高小鼠痛阈，52.2 mg/kg给药后2 h亦有显著镇痛作用，提示龙骨风水提物具有明显中枢镇痛作用。表1  龙骨风水提物对热板法所致小鼠的疼痛反应的影响 注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

    2.2  龙骨风水提物对醋酸所致小鼠疼痛扭体反应的影响［3］  雄性昆明种小鼠50只，禁食12～14 h后，随机分成5组，分别为阴性对照组、阳性对照组、龙骨风52.2、104.4、208.8 mg/kg组，分别ig等量蒸馏水、罗痛定50 mg/kg、龙骨风52.2、104.4、208.8 mg/kg，给药1 h后，ip 0.7%醋酸0.1 ml/10 g，立即观察小鼠，记录15 min内出现扭体的次数。结果见表2。由表2可见，龙骨风水提物104.4 mg/kg可显著抑制小鼠的扭体次数，提示龙骨风具有一定外周镇痛作用。

    2.3  龙骨风水提物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响［3］  雄性昆明种小鼠50只，禁食12～14 h，随机分成5组，分别为对照组、阳性对照组、龙骨风52.2、104.4、208.8 mg/kg组，分别ig等量蒸馏水、阿司匹林50 mg/kg、龙骨风52.2、104.4、208.8 mg/kg，给药1 h后于小鼠右耳两面均匀涂布二甲苯30 ml，左耳不涂作对照，致炎2 h后剪下左右耳，以直径7 mm 打孔器打下左右耳片称重，以肿胀度=左右耳厚度差/左耳厚度×100%表示炎症反应的强度，结果见表3。由表3可见，龙骨风水提物52.2 mg/kg可显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，提示龙骨风水提物具有明显对抗急性炎症作用。表2  龙骨风水提物对醋酸所致小鼠疼痛扭体反应的影响注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

    2.4  龙骨风水提物对PC诱导小鼠迟发型变态反应的影响［4］  雄性昆明种小鼠50只，随机分成5组，腹部刮毛，用1%PC无水乙醇100 μl涂于小鼠腹部致敏，致敏同时ig蒸馏水、醋酸泼尼松龙10 mg/kg、龙骨风52.2、104.4、208.8 mg/kg，每日1次，连续6日，末次给药后3 h以1%PC橄榄油30 μl涂于右耳两面进行攻击，24 h后剪下左右耳，打耳片称重，以肿胀度=左右耳厚度差/左耳厚度×100%表示迟发型变态反应的强度。结果由表4可见，龙骨风水提物208.8 mg/kg可极显著抑制PC诱导小鼠迟发型变态反应的诱导相，提示龙骨风具有明显抑制细胞免疫作用。

    3  讨论

　　本文依据龙骨风的临床应用，选取镇痛、抗炎及免疫抑制三方面实验，研究龙骨风水提物的药理作用，结果表明：龙骨风水提物具有明显的中枢镇痛及一定的外周镇痛作用，并对急性炎症反应有一定抑制作用，另外龙骨风水提物诱导相给药显著抑制PC诱导的迟发型超敏反应具有显著抑制，体外直接加药明显抑制ConA诱导小鼠体外脾淋巴细胞增殖，提示其具有显著抑制免疫作用，为其在民间风湿痹痛提供一定实验依据。表4  龙骨风水提物对PC诱导小鼠耳廓迟发型注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

    一般炎症反应可分为早、中、晚三个过程，分别以血管通透性增高、白细胞游走与聚集及纤维组织增生为典型特征［5］，为此笔者还考察龙骨风水提物对角叉菜胶、磷酸组胺、鸡蛋清所致大鼠足趾肿胀、大鼠气囊滑膜炎及棉球肉芽肿的影响，结果发现龙骨风水提物对上述模型效果均不明显，提示龙骨风作为治疗类风湿性关节炎药物，其作用机制可能与抑制特异性免疫炎症，尤其是T淋巴细胞免疫有关，而对非特异性的一般炎症影响不大，其具体机制还有待进一步深入研究。

【】
  1 戴斌，李钊东，丘翠嫦.“虎牛钻风”类传统瑶药的调查研究.民族民间医药杂志，1998，31：28-35.

2 吴振东，刘英鸿.自拟钻风汤治疗湿痹81例临床报告.中国民族民间医药杂志，1997，25：15-17.

3 陈奇.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出版社，1993，377-378，356.

4 寇俊萍，马仁强，朱丹妮，等.黄花倒水莲水提液的活血、抗炎作用研究.中药材，2003，26（4）：268-271.

5 毛俊浩，吕志良，曾群力，等.白术多糖对小鼠淋巴细胞功能调节.免疫学杂志，1996，12（4）：233.