抗环瓜氨酸肽抗体检测在类风湿性关节炎早期诊断中的临床意义
【关键词】 类风湿性关节炎
类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种病因不明的自身免疫性疾病，以慢性多关节炎症为主要特征 ［1］ ，发病2年即可出现不可逆的骨关节破坏，因此RA的早期诊断对有效控制该病的病情尤其重要。目前，对于RA的诊断主要依靠临床表现及血清学指标类风湿因子（RF）检测，但均有碍于早期诊疗。2000年国外首次人工合成环瓜氨酸肽（CCP），并成功应用于RA患者血清中抗CCP抗体的检测 ［2］ ，且显示出较高的特异性和敏感性 ［4，5］ 。我们应用ELISA法检测了抗CCP抗体在RA患者及对照组中的表达情况，并比较与RF的相关性，探讨抗CCP抗体对RA早期诊断的意义。
1材料与方法
1.1一般资料选择我院自2003年4月至2006年10月风湿免疫科收治的65例类风湿性关节炎（RA）患者作为观察组，均符合1987年美国风湿病协会修订的RA分类诊断标准;其中男性25例，女性40例（男女比例1:1.6）;年龄24～79岁，平均年龄58.5岁。选择2002年12月至2006年10月于我院就诊的48例患者作为非RA对照组，各项诊断均符合相应的诊断标准;其中包括系统性红斑狼疮21例，原发性干燥综合征11例，骨关节炎9例，多发性肌炎5例，痛风2例;男性17例，女性31例（男女比例1:1.82）;年龄21～70岁，平均年龄60.3岁。选取的35例我院体检中心健康体检者作为正常对照组，其性别、年龄等指标与与上述两组均差异无统计学意义（P>0.05）。
1.2 研究方法 采用ELISA法测定抗CCP抗体，具体步骤为采集所有受检人员的血清以样本缓冲液1:100稀释，-20℃保存待检;取待检液并加入酶修饰的精氨酸残基包被的反应板微孔中，以室温孵育 60min，再用洗涤缓冲液洗板3次后加入碱性磷酸酶标记的抗体IgG，继续用室温孵育30min，之后于每孔中添加P-硝基酞酚（PNPP）反应30min，最后加入终止液（2mol/L的硫酸）100μl终止反应，设定酶标仪波长为405nm进行检测（以吸光度A值表示）。反应板同时设空白对照、阳性对照和阴性对照，以样本浓度<25u/L为阴性，t>25u/L为阳性;且在相同的反应条件下，不同板间同一阳性标准血清A值相对偏差波动在5%以内。实验所用试剂盒为欧洲诊断公司提供的第2代抗CCP抗体诊断试剂盒，操作严格按其说明进行。
用速率散射比浊法定量检测类风湿因子（RF），所用试剂由德灵公司提供，所用仪器ARRAY360型全自动蛋白分析仪由Beckman公司提供，RF值>30u/m1为阳性结果。
1.3统计学分析统计学分析采用SPSS11.0统计软件进行处理，采用四格表抗CCP抗体的敏感性和特异性，组间比较采用χ 2 检验，P<0.05表示有统计学意义，应用相关性分析判断抗CCP抗体与RF有无相关性。
2结果
148例受检人员的血清检测结果见表1
从表1可见65例RA患者和48例非RA患者的阳性检出率分别为58.46%（38/65）、6.25%（仅在系 表1抗CCP抗体、RF在受检人员中的阳性率结果统性红斑狼疮患者中检测出3例），而健康组中未见阳性;χ 2 检验结果显示RA患者组的阳性检出率明显较高，差异有统计学意义（P<0.05）。
抗CCP抗体在诊断RA中的敏感性和特异性分别为58.46%和93.8%，较RF在敏感性上偏低（P<0.05），特异性较RF的81.7%显著偏高;抗CCP抗体与RF在RA患者的血清中同时阳性的检出率为79.4%，经χ 2 检验，两者间差异无统计学意义（P>0.05）。
3讨论
RA为一常见的风湿性疾病，我国人群患病率约为0.32%～0.36%，的策略是早期积极应用改善病情抗风湿药（DMARDs），这与以往的“金字塔方案”相比能明显改善疾病后果。早期诊断、早期治疗是关键所在。RA的诊断目前仍参照1987年美国风湿病学会的分类标准，其中多为临床诊断指标，RF是唯一的血清学指标，且特异性不高。目前RA的早期诊断仍有一定的困难。2000年国外首次人工合成环瓜氨酸肽（CCP），并成功地在RA血清中检测出抗CCP抗体，结果发现抗CCP抗体有很高的特异性（98%） ［2］ 。
本次研究中在对148例受检人员的血清进行抗CCP抗体和RF的检测中发现:抗CCP抗体对于健康对照组的阳性检出率为0%，而RF在35例健康人群中测出2例阳性（检出率为5.71%），此说明RF的特异性较之于抗CCP抗体差，且抗CCP抗体的特异性在本实验中达到93.80%，此结果符合多数报道的数据范围 ［2，4，5］ ;同时也说明抗CCP抗体是检测RA的一项特异性很高的血清学指标。实验还显示抗CCP抗体的敏感性为58.46%，此结果略高于国外Schellekens等 ［5］ 的报道结果。抗CCP抗体在48例其它风湿病患者中检测，仅3例呈阳性，且均为系统性 红斑狼疮患者，所以抗CCP抗体可以认为是鉴别RA和其它风湿病的重要实验室指标。实验结果还反映出抗CCP抗体与RF在RA患者的血清中同时阳性的检出率为79.40%，虽然两者间存在很高的一致性，但不存在相关性（P>0.05），此说明抗CCP抗体的出现与RF无关，不可相互替代。
总之，抗CCP抗体的检测特异性高，而且用合成的瓜氨酸肽段作为抗原基质的ElISA法操作简便，同时可以量化。临床上可将抗CCP抗体检测作为推荐检查项目，以利于进一步验证其对RA的早期诊断价值。
【文献】
1韩晓枫，马宝骊，张继英，等.胶原诱导性关节炎大鼠淋巴细胞的过继转移［J］.免疫学杂志，2002，18（1）:9-12.
2KastbomA，Strandberg G，Lindroos A，et al.Anti-CCP anti-bodytest predicts the disease course during3years in earlyrheumatoid arthritis（the SwedishTIRAproject）［J］.Ann RheumDis，2004，63（9）:1085-1089.
3Schellekens GA，Visser H，Jong B A，et al.The diagnostic properties of rheumatoid arthritis antibodies recognizing a cyclic citrullinated peptide［J］.Arthritis Rheum.2000，43（1）:155-163.
4Lee DM，Schur PH.Clinical utility ofthe anti-CCP assay in patientswithrheumatic diseases［J］.Ann RheumDis，2003，62（9）:870-874.
5Schellekens GA，Jong B A，Hoogen FH，et al.Citrulline is an essential constituent of antigenic determinants recognized by rheumatoid arthritis-specific autoantibodies［J］.J Clin Invest，1998，101（1）:273-281.
