蜂房提取物对荷瘤鼠放化疗的增效作用
作者：魏金荣，张坤，关一夫，张岐山
【摘要】 目的： 观察蜂房乙醇提取物对荷H22肝癌小鼠的放化疗增效作用。方法： 移植H22肝癌的小鼠模型，给予蜂房乙醇提取物与化疗和放疗联合，抑瘤率及增效率。结果： 蜂房乙醇提取物对荷H22肝癌小鼠放化疗的抑瘤率分别达60.5%和61.2%，增效率分别为33.3%和32.6%。结论： 蜂房乙醇提取物对荷H22肝癌小鼠的放化疗均有明显的增效作用。
【关键词】 肝肿瘤，实验性； 小鼠； 蜂房提取物； H22肝癌
［Abstract］ Objective: To study the synergistic effects of ethanol extracts from honeybee hives on the therapeutic efficacy of chemotherapy and radiotherapy to transplanted H22 hepatoma in mice. Methods: The mice model transplanted with H22 hepatoma and received chemotherapy or radiotherapy treatment were fed with 85% ethanol extracts from honeybee hives for 15 days. After the treatment stopped, the masses of H22 hepatoma taken from the mice were weighed and the repression rates of tumor and the enhanced therapeutic efficacy were evaluated. Results: With radiotherapy and chemotherapy the repression rates of H22 hepatoma in mice treated with the ethanol extracts were 61.2% and 60.5%, and the enhanced therapeutic rates were 32.6% and 33.3%, respectively. Conclusions: Ethanol extracts from honeybee hives have effects to enhance the therapeutic efficacy of chemotherapy or radiotherapy treatment on transplanted H22 hepatoma in mice .
［Key words］ liver neoplasms,experimental; mice; honeybee hives extracts; H22 hepatoma
蜂房是具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗溃疡、抗肿瘤及免疫调节等多种药理作用的中药［1］。有研究表明，蜂房及其提取物对胃癌、肝癌、子宫颈癌等多种肿瘤细胞的体外生长均有抑制作用［2］。前期研究表明蜂房乙醇提取物对小鼠S180实体瘤及艾氏腹水癌的体内生长也有明显的抑制作用（另文待发表）。2006年9月～2007年7月进一步研究了蜂房乙醇提取物对荷H22肝癌小鼠放化疗的增效作用。
1 材料与方法
1.1 蜂房提取物的制备
称取蜂房（购于天益堂药房）100 g，用600 ml 85%乙醇浸泡后加热回流3 h，滤过；药渣再用400 ml 85%乙醇加热回流3 h，滤过，合并滤液，减压浓缩成清膏5.7 g，冰箱保存。使用前用生理盐水配成0.048 g/ml、0.024 g/ml和0.012 g/ml 3个浓度，相当于生药的浓度分别为0.84 g/ml、0.42 g/ml和0.21 g/ml。
1.2 实验材料
昆明种小鼠由医科大学实验动物中心提供（合格证号：辽实动字第521号），体重（20±2）g，雌雄各半。H22肝癌瘤株由北京中科院药物研究所提供。5-氟尿嘧啶（5-FU）针剂（天津力生药厂生产，批号：051006），用前用生理盐水稀释成1 g/L。LMR-1.5/AL 日本东芝医用直线加速器。
1.3 蜂房提取物对H22荷瘤小鼠化疗的作用
在无菌条件下抽取生长良好的H22肝癌小鼠的瘤液，用生理盐水稀释成2×107个/ml的细胞悬液，0.2 ml/只，小鼠后肢皮下接种。于瘤株接种后第2天将小鼠随机分为7组，每组10只。对照组：25 ml/kg生理盐水；5-FU组：0.01 g/kg；低剂量组：蜂房提取物0.3 g/kg；中剂量组：蜂房提取物0.6 g/kg；高剂量组：蜂房提取物1.2 g/kg；5-FU加中剂量组：5-FU 0.01 g/kg加蜂房提取物0.6 g/kg；5-FU加高剂量组：5-FU 0.01 g/kg加蜂房提取物1.2 g/kg。对照组和5-FU组灌胃给予生理盐水，其余各组灌胃给相应剂量蜂房提取物，每日1次，连续15 d。除对照组和低、中、高剂量组外，于给药同时腹腔注射5-FU，每日1次，连续3 d，停药1 d，再连续给药2 d（其余各组同法给予生理盐水）。于第16天处死小鼠，取瘤称重，计算抑瘤率和增效率［3］。
1.4 蜂房提取物对H22荷瘤小鼠放疗作用
于瘤株接种后第2天将小鼠随机分为4组，每组10只。对照组：生理盐水；放疗组：8、9、10 Gy；放疗加中剂量组：放疗8、9、10 Gy，蜂房提取物0.6 g/kg；放疗加高剂量组：放疗8、9、10 Gy，蜂房提取物1.2 g/kg。后两组灌胃给药，每日1次，连续15 d（前两组给生理盐水）。除对照组外于给药第7天开始加放射（电子线）。基础量8 Gy/d，每日1次，连续3 d，剂量递增，8、9、10 Gy。于第16天处死小鼠，取瘤称重，计算抑瘤率和增效率［3］。
1.5 统计学方法
实验结果采用t检验作统计分析。
2 结果
2.1 蜂房提取物对H22荷瘤小鼠化疗的增效作用中、高剂量蜂房提取物对小鼠H22肝癌的生长均有明显抑制作用，抑瘤率为34.8%和38.4%，与对照组比较差异具有显著性（P＜0.05）。中、高剂量蜂房提取物对小鼠H22肝癌的5-FU均有增效作用，增效率分别为24.3%和32.6%。高剂量蜂房提取物增效显著，与5-FU组比较P＜0.05，见表1。表1 蜂房提取物对H22荷瘤小鼠化疗的增效作用（略）
2.2 蜂房提取物对H22荷瘤小鼠放疗的增效作用中、高剂量蜂房提取物对小鼠H22肝癌的化疗均有增效作用，增效率分别为12.3%和33.3%。与对照组比较，放疗联合给药组抑瘤率差异显著（P＜0.01），见表2。表2 蜂房提取物对H22荷瘤小鼠放疗的增效作用（略）
3 讨论
中药蜂房用于治疗肿瘤早有记载［4］。传统的用药方法多为水煎服或外用，而且具有一定的毒副作用，因此，提取其抗肿瘤的有效成分成为中药开发的方向。蜂房的化学成分十分复杂，利用不同溶剂所得到的蜂房提取物也显示了不同的药理作用［1］。国内外的研究表明，蜂房的主要成分蜂胶对人肝癌、口腔癌、子宫颈癌、乳腺癌、胸腺癌、结肠腺癌及皮
肤癌等多种细胞株的生长都有抑制作用［5,6］。有人对蜂胶提取物抗肿瘤作用机制的研究结果表明，蜂胶的乙醇提取物能提高荷S180肉瘤小鼠的免疫系统活性［7］。目前对于蜂房抗肿瘤作用研究也多限于体外，蜂房乙醇提取物对活体肿瘤的抑制作用报道很少［8］。前期研究工作表明，蜂房的85%乙醇提取物对小鼠S180实体瘤和艾氏腹水癌均有较好的抑制作用。
本文用蜂房的85%乙醇提取物对H22肝癌荷瘤鼠进行了放化疗增效作用的研究，结果表明，蜂房提取物的1.2 g/kg、0.6 g/kg 2个剂量组与空白对照组相比，使H22肝癌小鼠的肿瘤重量显著降低（P＜0.05），抑瘤率达38.4%，且有剂量依赖关系。使5-FU化疗及线放疗的H22肝癌小鼠的肿瘤重量降低非常显著（P＜0.001），抑瘤率分别达61.2%和60.5%，增效率分别达32.6%和33.3%。说明蜂房乙醇提取物对H22肝癌荷瘤小鼠的放化疗有显著的增效作用。这可为进一步深入研究及药物开发所需的临床试验提供依据。
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