PTEN基因mRNA在骨巨细胞瘤中的表达和临床意义

【摘要】  目的  研究骨巨细胞瘤中PTEN基因的表达情况、探讨其与骨巨细胞瘤临床分级和预后的关系。方法  应用RT-PCR的方法检测了32例骨巨细胞瘤PTEN mRNA的表达，就PTEN mRNA表达水平与临床变量之间进行分析。结果  PTEN mRNA在骨巨细胞瘤中的阳性表达率为75%；PTEN mRNA阳性表达与患者的年龄、性别和Jaffe分级无关；与Enneking分级和肿瘤复发转移有相关性(P <0.05)，与生存时间显著相关(P <0.01)。结论  PTEN mRNA在骨巨细胞瘤中的表达与Enneking分级和预后有一定关系，可以作为判断骨巨细胞瘤预后的一项重要指标。
【关键词】   PTEN基因  骨巨细胞瘤  mRNA
【Abstract】  Objective  To study the expression of PTEN gene and its relationship with the clinical grades and evaluation of clinical prognosis in giant cell tumors of bone. Method  The PTEN gene mRNA was investigated by using RT-PCR in 32 cases with giant cell tumors of bone. The analysis were carried out between the level of PTEN mRNA expressin and the clinical variable.Results  The PTEN gene mRNA positive expression rate was 75% in giant cell tumors of bone;the positive expression rate of PTEN mRNA was correlated with Enneking’s stages and recurrence and metastasis (P<0.05) .The positive expression rate was significantly related with patient’s survival time(P<0.01),but was no associated with patient’s age,sex and Jaffe’s grade.Conclusion  The PTEN gene mRNA positive expression rate was related with clinical prognosis and Enneking’s stages and may be an important parameter in predicting behavior in giant cell tumors of bone.
【Key words】 PTEN   giant cell tumors of bone   mRNA,RT-PCR
        骨巨细胞瘤（giant cell tumors of bone,GCT）是一种具有原发倾向，并可以远处转移的侵袭性原发肿瘤。目前，有关GCT的分级和分期等临床指标与其生物学行为并不完全一致，均不能完全正确的反映其恶性程度、转移及复发倾向。因此有必要对有助于判断GCT转移、复发和预后的相关指标做进一步研究。PTEN基因是发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因[1]，在诱导细胞周期停滞及细胞调亡中起重要作用，同时在调节细胞黏连、迁移和分化中发挥细胞生理功能。新近研究表明PTEN基因的突变失表达与多种恶性肿瘤的发生、及预后密切相关。我们应用RT-PCR的方法检测PTEN mRNA在GCT中的表达，并对其表达情况与临床变量之间的相关性进行了初步探讨。
        1  资料与方法
        1.1 一般资料  肿瘤标本共计32例，均为2000～2001年于大连医科大学附属第一骨科手术切除并经病理证实的新鲜标本，-70℃保存。其中：男性14例，女性18例；年龄12～43岁；Jaffe分级，Ⅰ级15例，Ⅱ级11例，Ⅲ级6例；Enneking分级，Ⅰ级8例，ⅡA级13例，ⅡB级8例，Ⅲ级2例；术后复发14例，转移2例；三年生存率87.5%。所有患者术前均未接受放、化疗。
        1.2 引物设计  PTEN引物a：5’—ACAGGCTCCCAGACATGACA—3’；b5TCAGACTTTTGAATTTGTTGTA
TG—3’。目标片段为216bp，由上海生工（Sangon）生物工程技术服务有限公司设计合成。
        1.3 RT-PCR方法检测PTEN mRNA  GCT手术后切除部分肿瘤标本立即投入液氮中保存，常规提取总RNA后-70℃保存待用。在20ul反应体系中进行PCR扩增。预变性94℃5min，循环条件为94℃60s，72℃60s，共32个周期。取10ul反应液电泳，溴乙锭染色。
        1.4 统计分析方法  SPSS 11.0软件，采用检验和相关性分析，以P ＜0.05为有差异。
        2  结果
        32例GCT中PTEN mRNA阳性表达24例，失表达8例，表达率为75%。PTEN mRNA表达与患者的年龄、性别以及Jaffe分级无明显关系（P >0.05），与肿瘤复发转移、Enneking分级和生存时间有相关性：在EnnekingⅠ～ⅡA 级阳性表达率为81.82%，EnnekingⅡB～Ⅲ级阳性表达率为60%；肿瘤复发转移组阳性表达率为62.5%，无复发转移组阳性表达率为87.5%，两者P 值均＜0.05；PTEN mRNA表达缺失与患者生存时间显著相关，生存时间大于3年者阳性表达率为82.14%，生存时间小于3年者阳性表达率为25%，差异具有显著统计学意义（P ＜0.01）。
        3  讨论
        骨巨细胞瘤是一种临床常见的，生长活跃和易复发的侵袭性原发良性肿瘤，由于其可以出现远隔（肺）转移，也被认为是一种中间性或低度恶性骨肿瘤。骨巨细胞瘤细胞成分复杂，多年来对于该肿瘤的来源、性质、病理诊断依据还存在争议。而目前的Jaffe病分级和Enneking影像学分级等判定标准与骨巨细胞瘤多变的生物学行为之间的不平衡性更影响了方法的选择和对疗效的判断。这些也是骨巨细胞瘤局部复发率高达近50%[2]，治疗效果不佳的原因之一。因此，临床上需要一种较为准确的复发转移判断指标来指导治疗和预后判断。

        PTEN基因是1997年由三个研究小组相继克隆并命名（PTEN/MMAC1/TEP1）的一种抑癌基因，同时也是发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因。PTEN基因可以通过诱导细胞凋亡、发挥张力蛋白样功能影响肿瘤细胞的侵润和转移以及抑制IGF介导的肿瘤血管生成等多种途径来抑制恶性肿瘤的侵袭和转移。而肿瘤细胞PTEN基因因为突变、缺失或甲基化而失活则与多种肿瘤的发生有着密切的关系。在神经胶质瘤：Hulsebos[3]等人的研究发现神经胶质瘤中32%的复发病例有PTEN基因的突变表达缺失；Sano[4]等人还发现在恶性胶质细胞瘤中PTEN蛋白表达的高低与疾病的病理分级和预后有关，预后越差，恶性度越高，PTEN蛋白的表达水平越低。在前列腺癌：Rubin[5]等的研究发现PTEN基因异常与前列腺癌的淋巴结转移有关，在无淋巴结转移的前列腺癌细胞中PTEN的杂合性丢失率为14%，而在有淋巴结转移的细胞中为43%；Mcmenumin[6]等的研究则进一步发现PTEN蛋白表达缺失与前列腺癌的不良预后关系密切。
        本实验用RT-PCR方法检测骨巨细胞瘤中PTEN mRNA 的表达情况，32例骨巨细胞瘤中PTEN mRNA阳性表达24例，失表达8例，阳性表达率为75%。PTEN mRNA表达与肿瘤复发转移、Enneking分级和生存时间存在相关性：在EnnekingⅠ～ⅡA 级阳性表达率为81.82%，EnnekingⅡB～Ⅲ级阳性表达率为60%；肿瘤复发转移组阳性表达率为62.5%，无复发转移组阳性表达率为87.5%，两者P 值均＜0.05；生存时间大于3年者阳性表达率为82.14%，生存时间小于3年者阳性表达率为25%，P 值＜0.01。结果提示：①PTEN mRNA在骨巨细胞瘤中存在一定的表达缺失；②PTEN mRNA的表达缺失与骨巨细胞瘤Enneking分级和预后密切相关，可以作为一项重要指标应用于骨巨细胞瘤的临床方法选择和预后判断。

参 考 文 献
[1] Li J,Yen C,Liaw D et al.PTEN,a putative protein tyrosine phoshatase gene mutated in human brain,breast and prostate cancer.Science,1997;275:1943-1947.
[2] 许文根.骨巨细胞瘤术式选择与预后分析.矫形外科杂志,1996;3(1):33-35.
[3] Theo J M Hulsebos,Niels T Oskra,et al.Dynamics of genetic alterations associated with glioma recurrence.Genes,Chromosome and cancer,1998;23(2):153-158.
[4] Sano T,Lin H,Chen X,et al.Differential expression of MMAC1/PTEN glioblastoma multiforme relationship to localization and prognosis.Cancer Res,1999;59(8):1820-1824.
[5] Rubin M,Gerstein A,Reid K,et al.10q23.3 loss of heterozygosity is higher in lymph node-positive(pT2-3,N+) versus lymph node-negative(pT2-3,N0) of prostate cancer.[J].Ham Pathol,2000;31(4):504-508.
[6] Mcmenamin ME,Song P,Perea S,et al.Lose of PTEN expression in paraffin-embedded primary prostate cancer correlated with high gleason score and advanced stage.[J].Cacer Res,1999;59(17):4291-4296.