卡巴胆碱对大鼠烫伤休克肠内补液时肠血管通透性及组织水肿的影响

                   作者：吴静，胡森，汪剑威，耿世佳，盛志勇

【摘要】  目的 研究烫伤休克大鼠肠内补液时给予卡巴胆碱对肠血管通透性及组织水肿的影响。方法健康雄性Wistar大鼠48只，随机分为单纯烫伤组(S组)、葡萄糖?电解质组(GES组)、卡巴胆碱组(CAR组)和葡萄糖-电解质+卡巴胆碱治疗组(GES/CAR组)，每组12只。制作35%休表面积(TBSA)Ⅲ°烫伤模型，肠内输入GES和(或)CAR(60μg/kg)进行复苏。应用改良伊文思蓝(EB)渗出法测定烫伤后4小时肠内补液时肠血管通透性及用干湿重法测定肠组织含水率的变化。结果 GES组与S组比较，肠组织EB含量显著增加(P<0.05)，肠组织含水率增加，但无统计学意义(P>0.05)。给予卡巴胆碱治疗后，CAR组与GES/CAR组肠组织EB含量分别比S组与GES组显著下降(P<0.05)。CAR组比S组肠组织含水率减少(P<0.01)，GES/CAR组肠组织含水率比GES组显著减少(P<0.01)。结论 卡巴胆碱能降低烫伤休克口服补液时肠血管通透性，减轻肠黏膜组织水肿，对烫伤休克肠内补液时小肠缺血再灌注损伤具有保护作用。

【关键词】  烫伤;卡巴胆碱;肠内补液;血管通透性

           Abstract： Objective To investigate the effects of carbachol on intestinal vascular permeability and tissue edema with enteral glucose?electrolyte solution(GES) resuscitation in scald shock rats.Methods Wistar rats were randomly divided into four groups: scald alone (S,n=12),scald with enteral carbachol(60μg/kg,CAR,n=12),scald with enteral GES(GES,n=12) and scald with enteral GES containing 60μg/kg of carbachol(GES/CAR,n=12)groups.Rat model of 35% total body surface area(TBSA) Ⅲ degree scald model were reproduced.Evans blue(EB) and wet?dry method were used to evaluate the intestinal microvascular permeability and tissue edema in each group.Results Intestinal vascular permeability in GES group(140.19±5.39)μg/g was significantly higher than that in S group (127.36±6.79)μg/g.There was significant difference(P<0.05).Intestinal water contents in GES group (82.283±1.277)% were higher than that in S group(79.525±2.119)%.Intestinal vascular permeability in CAR and GES/CAR group(73.32±5.34)μg/g and (105.63±4.53)μg/g was significantly lower than those in S and GES group(P<0.05). Intestinal water contents in CAR and GES/CAR group (76.114±4.654)% and (79.667±2.649)% were much lower than that in S and GES group(P<0.01).Conclusion Carbachol can significantly reduce the increase in intestinal microvascular permeability and water contents,and it might have protective effect on ischemia and reperfusion injury during enteral resuscitation of scald shock.

　　Key wards:scald;carbachol;enteral resuscitation;intestinal vascular permeability

　　烧伤休克口服补液是针对战争、灾害或突发事故等特殊环境下难以施行早期静脉补液时而采用的有效的复苏方式，但在其发挥替代静脉复苏作用的同时，也给缺血状态下的肠道造成再灌注损伤，从而影响口服液体复苏的效果。卡巴胆碱是一种胆碱能受体激动剂，能同时兴奋M和N受体。我们以往研究表明卡巴胆碱能减轻肠缺血再灌注时肠道炎性反应和氧自由基损伤[1，2]。本研究的目的是观察卡巴胆碱对烧伤休克大鼠口服液体复苏时肠血管通透性和组织含水量的影响，为临床应用卡巴胆碱改善严重烧(创)伤休克时口服液体复苏的效果提供实验依据。材料与方法

　　1 动物分组和模型制备

　　健康雄性Wistar大鼠48只(由医学院动物中心提供)，体重(230±20)g，随机分为单纯烫伤组(S组)、葡萄糖-电解质组(GES组)、卡巴胆碱治疗组(CAR组)和葡萄糖?电解质+卡巴胆碱治疗组(GES/CAR组)，每组12只。大鼠背部备皮后置于100℃水中15秒，制备35%TBSA Ⅲ°烫伤模型，烫伤后立即沿大鼠腹中线切开腹壁(约3cm长)，在十二指肠悬韧带下与回盲瓣上10cm各剪开一个小口，插入直径0.5cm的插管，用线扎紧，缝合腹部切口，肠内插管另一端置于体外，以备进行肠内液体复苏。GES组给予葡萄糖?电解质溶液(每1000ml蒸馏水中加入氯化钠3.5g，碳酸氢钠2.5g，氯化钾1.5g，葡萄糖粉20g)，CAR组给予卡巴胆碱(60μg/kg)，EGS/CRA组给予葡萄糖-电介质液+卡巴胆碱(60μg/kg)。24小时补液总量按1%TBSA 2ml/kg，匀速泵入。烫伤后4小时处死动物，取肠组织测定肠血管通透性和肠组织含水率。

　　2 肠血管通透性测定

　　测定前0.5小时经颈静脉注射2%伊文思蓝(EB)20mg/kg(1ml/kg，20mg/ml)，0.5小时后经肠系膜上动脉灌注100ml生理盐水，冲出循环中血液及残存的EB。取十二指肠悬韧带下20cm处肠组织约0.2g，置入2ml甲酰胺中，50℃恒温水浴箱中水浴24小时，离心30分钟，取上清液用分光光度计测出620nm下的吸光度，作标准曲线，并得出相应的EB含量。

　　3 肠组织含水率测定

　　于测定时间点处死大鼠，取插管段肠组织称量湿重，放入烤箱90℃烤72小时，再称量干重，计算含水率。肠组织含水率(%)=(湿重-干重)/湿重×100%。

　　4 统计学方法

　　数据以(±s)表示，用t检验进行分析。采用SPSS11.0软件处理数据，P<0.05为差异有统计学意义。

　　结 果

　　1 肠组织EB含量变化(图1)

　　GES组与S组比较肠组织EB含量显著增加[(140.19±5.39)μg/g和(127.36±6.79)μg/g]，给予卡巴胆碱后，CAR组与GES/CAR组肠组织EB含量[(73.32±5.34)μg/g和(105.63±4.53)μg/g]分别比S组与GES组均显著下降，且具有统计学差异(P<0.05)。

　　2 肠组织含水率变化

　　GES组与S组比较，肠组织含水率[(82.283±1.277)%和(79.525±2.119)%]增加，但无统计学意义。给予卡巴胆碱治疗后，CAR组肠组织含水量[(76.114±4.654)%]比S组减少(P<0.01)，GES/CAR组肠组织含水量[(79.667±2.649)%]比GES组减少(P<0.01)(见图2)。

　　讨 论

　　烧伤后由于热力的直接损伤及众多血管活性物质的释放，造成机体毛细血管增高，大量血管内液外渗，导致有效循环血容量不足引起的低血容量性休克。有研究证明，在严重烧(创)伤时，由于热源直接作用及大量炎性介质、活性氧、黏附分子的释放，导致烧伤部位及远隔脏器血管通透性的增高，使血管内液体渗入组织间隙，引起低血容量性休克[3]。此时机体为满足重要生命脏器的血液供应，血流重新分布，结果导致胃肠道血流量减少、组织缺血低氧，此时肠内给予大量液体，虽然有助于恢复肠道局部及全身灌流，但同时造成肠道局部的缺血-再灌注效应，进一步加重组织损伤。肠上皮细胞和内皮细胞富含黄嘌呤氧化酶，延迟复苏后的再灌流使黄嘌呤氧化酶在氧的参与下催化黄嘌呤和次黄嘌呤生成尿酸的同时，释放大量氧自由基，使肠组织受到损伤[4，5]。大量炎性介质、活性氧、细菌及内毒素等因素的共同作用，使肠道通透性增高，肠组织水肿加重。

　　卡巴胆碱是一种胆碱能激动剂，能同时兴奋M受体和N受体，且N样作用强于M样作用，不被胆碱酯酶水解，可促进肠道蠕动、扩张血管、减轻肠道炎性反应，临床用于治疗手术后胃肠胀气和尿潴留。我们以往的研究显示：卡巴胆碱能激动N受体α7亚基显著抑制TNF和IL?6等促炎细胞因子的释放，减少氧自由基的生成，抑制内皮细胞黏附因子表达和内皮细胞活化，从而起到降低血管通透性的作用[6-8]。卡巴胆碱能增加缺血再灌注时肠黏膜血流量[9]，抑制肠道局部促炎因子产生和淋巴细胞凋亡，减轻肠道炎性反应和氧自由基损伤，对肠上皮细胞具有保护作用[10，11]。本实验结果显示，卡巴胆碱能降低烧伤休克大鼠口服液体复苏时肠血管通透性及肠组织含水量，对肠组织有保护作用，有助于减轻肠道并发症，提高口服液体复苏的效果。本研究为烧伤休克口服补液时减轻肠道并发症、提高复苏效果提供了新的有效途径和实验依据。

【】
  1]吕艺,王海滨,胡森,等.兴奋胆碱能通路对内毒素血症和肠缺血/再灌注动物肝脏功能的保护作用[J].感染、炎症、修复，2007，7(2)：67-71.

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