复发及难治急性髓细胞白血病病人多药耐药基因检测及意义

来源：岁月联盟 作者：朱莉 时间：2015-10-12

【摘要】  目的 研究复发及难治急性髓细胞白血病（AML）病人多药耐药基因（mdr1）的表达及其与临床疗效的关系。方法 采用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）检测65例AML病人（其中初诊组38例，完全缓解组14例，复发难治组13例）、27例非白血病病人和健康人（包括健康人15例、缺铁性贫血病人10例、特发性血小板减少性紫癜病人2例）mdr1基因的表达水平，并分析其临床意义。结果 AML病人mdr1基因表达阳性率高于对照组，复发难治组mdr1基因表达阳性率高于初诊组和完全缓解组，临床耐药组mdr1基因表达阳性率显著高于非临床耐药组，CR率非临床耐药组显著高于临床耐药组，差异均有显著性(χ2=8.334～49.630，P<0.01)。结论 mdr1基因阳性表达与AML病人临床耐药密切相关，是影响预后的重要因素，可作为检测临床耐药和判断预后的指标之一。 
【关键词】  白血病 髓样 多药耐药相关蛋白质类 抗药性 肿瘤
［ABSTRACT］ObjectiveTo study the expression of multidrug resistance gene (MDRG) and the curative effect in relapse or refractory acute myelogenous leukemia (AML).MethodsA semiquantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RTPCR) was used to investigate the transcription levels of the human MDRG in 65 AML patients and 27 controls, and analyze the its clinical significance.ResultsMDRG expression was significantly higher in AML patients than in the controls, and higher in relapsed/refractory AML patients than in those newly diagnosed or in complete remission. The gene expression was significantly lower in nonresistant patients than in resistant ones. Complete remission (CR) rate of nonresistant patients was higher than resistant ones (χ2=8.324-49.630，P<0.01).ConclusionMDRG overexpression is significantly associated with clinical multidrug resistance and prognosis, and it is one of the indicators for predicting the prognosis of AML.
    ［KEY WORDS］leukemia, myeloid; multidrug resistanceassociated proteinsmdr1; drug resistance, neoplasm
    国内外研究证明，多药耐药基因（mdr1）的存在及表达是产生多药耐药（MDR）的主要机制。本文应用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）技术检测了65例急性髓细胞白血病（AML）病人、27例非白血病病人和健康人的mdr1基因表达水平，分析mdr1基因表达水平与临床耐药的关系。
    1   材料和方法
    1.1  细胞系与细胞培养
    K562/A02由中国医学科学院血液学研究所惠赠，用阿霉素（ADM）诱导K562细胞建立的多药耐药细胞株[1]，具有典型的MDR表型。K562/A02细胞在培养过程中加1 ng/L的阿霉素，使用前3 d撤药。
    1.2  病人及分组
    根据白血病诊断标准[2]，选择急性髓细胞白血病(AML)病人65例，男39例（年龄18～63岁），女26例（年龄22～59岁），中位年龄34.2岁。其中初诊组（AMLP）38例，完全缓解（CR）组(AMLC)14例，复发难治组(AMLR)13例；M0和M1各1 例，M219例，M315 例，M414 例，M59例，M62例，M71例，杂合型白血病（HAL）3例。对照组27例，其中男16例（年龄19～52岁），女11例（年龄15～46岁），中位年龄30.9岁，包括健康人15例、缺铁性贫血病人10例、特发性血小板减少性紫癜病人2例。15例健康人取外周血，余均取骨髓。病人为青岛大学医学院附属医院及聊城市人民医院住院病人。 
    临床耐药诊断标准：①对一线方案诱导治疗2个疗程无效；②第1次缓解后6个月内复发；③第1次缓解后6个月以上复发经诱导治疗无效；④2次或2次以上复发。
    1.3  半定量RTPCR
    细胞总RNA的提取：用TRIzol提取细胞总RNA。经MMLV逆转录酶合成cDNA，以逆转录产物加dNTPs、PCR Buffer、mdr1引物进行PCR，取PCR产物定量10 μL 扩增产物，25 g/L琼脂糖凝胶电泳，灌胶前加EB（1 mL 1×TAE 加1 μL EB），75 V，30～60 min，紫外线灯下观察并照相，用Kodak Digital Science 1D Image Analysis Software及GD1数字化凝胶成像分析仪扫描，计算mdr1基因与βactin的比值。
    1.4  统计学处理
    应用医学统计学软件SPSS 12.0处理，结果用±s表示，数据间比较用F检验及χ2检验。
    2  结    果
    2.1  AML病人mdr1基因的表达
    AMLP组、AMLC组、AMLR组和对照组mdr1基因表达值分别为0.78±0.76、0.54±0.45、1.64±1.75、0.20±0.13，AML病人mdr1基因表达值高于对照组，且AMLR组高于AMLP组、AMLC组，差异有显著性(P<0.001)。见图1。
    图1  mdr1基因表达的RTPCR检测
    ①Marker；②AMLP；③AMLR；④AMLC；⑤AMLM5；⑥Normal；⑦K562/A02；⑧K562
    根据对照组和AML各组mdr1基因在不同组别的表达，将mdr1/βactin的比值≥1.0定为mdr1基因阳性表达，对照组mdr1与βactin比值均<0.1，根据此标准，AMLR组mdr1基因阳性表达率显著高于AMLP组和AMLC组，差异有显著性（χ2=9.578、8.324，P<0.05）。见表1。表1  各组AML病人mdr1基因阳性表达组别n阳性例数阳性率AML病人临床耐药组mdr1基因阳性表达率显著高于非临床耐药组，差异有显著性（χ2=32.42，P<0.01），CR率非临床耐药组显著高于临床耐药组，差异有显著性（χ2=49.63，P<0.01）。见表2。
    表2  AML病人mdr1基因表达与临床耐药的关系组  别nmdr1阳性(例)表达率(χ%)CR(例)CR率(χ%)临床耐药251768.0416.0非临床耐药40410.03895.0

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