高效液相色谱法测定感冒清热颗粒中5-0-甲基维斯阿米醇苷的含量

　　2.7  线性关系考察

    精密称取5-O-甲基维斯阿米醇苷11.52 mg,置50 mL容量瓶中,加甲醇至刻度(0.230 4 mg/mL),摇匀,作为对照品储备液。精密吸取对照品储备液1.00、3.00、5.00、7.00、10.00 mL于50 mL容量瓶中,以50%甲醇稀释至刻度,摇匀过滤,分别精密吸取20 μL,注入液相色谱仪,测定。以峰面积对浓度(μg/mL)进行线性回归分析,得回归方程：A＝4.487 8×104C＋4.566 5×103,r＝0.999 9,表明5-O-甲基维斯阿米醇苷在0.092 2～0.922 μg范围内线性关系良好。

　　2.8  精密度试验

    精密吸取“2.7”项下对照品溶液20 μL,连续进样6次,测定,RSD＝0.15%(n＝6),表明精密度较好。

　　2.9  稳定性试验

    取同一供试品溶液(批号20060617),分别在放置0、2、4、6、8、12 h后,依法测定1次,结果显示,12 h内供试品溶液中5-O-甲基维斯阿米醇苷峰面积稳定,RSD＝0.17%,表明稳定性较好。

　　2.10  重复性试验

    取同一批样品(批号20060617)6袋,研细,精密称定6份,按供试品溶液制备方法制备6份供试品溶液,依法测定,5-O-甲基维斯阿米醇苷平均含量为1.025 mg/袋,RSD＝0.42%(n＝6),表明重复性较好。

　　2.11  加样回收率试验

    精密称取已知含量的样品(批号20060617,含量为1.025 mg/袋,0.084 mg/g)6份,分别精密加入一定量的5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品,依法测定,计算回收率,结果见表1。表1  加样回收率试验结果(略)
 
　　2.12  样品测定

    取不同批次的样品,按照供试品溶液制备项下方法操作,得供试品溶液,按上述色谱条件分析测定,结果见表2。表2  5-0-甲基维斯阿米醇苷含量测定结果（略）

    根据6批测定结果,我们将含量限度确定为本品每袋含防风以5-O-甲基维斯阿米醇苷(C22H28O10)计算不得少于0.60 mg。

　　3  讨论

    由于本品是含糖型颗粒,应在样品溶液的处理过程中考虑去糖。笔者曾试验在样品超声提取后,精密吸取25 mL提取液,浓缩至5 mL加至D101型大孔吸附树脂柱上进行去糖处理。结果显示,对样品去糖与不去糖处理,两者色谱图无明显差别,且不去糖样品5-0-甲基维斯阿米醇苷无损失,5-0-甲基维斯阿米醇苷的含量较高。
   
　　我们考察了甲醇-水、乙腈-磷酸水、乙腈-水系统,结果以甲醇-水(44∶56)为流动相时,5-0-甲基维斯阿米醇苷的分离度和峰形最好。供试品制备方法考察时,笔者曾试验以水饱和的正丁醇提取5次,结果表明,提取3次时已基本将5-0-甲基维斯阿米醇苷提取完全,故将提取次数定为3次。

【参考文献】
  　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.644.