高效液相色谱法测定感冒清热颗粒中5-0-甲基维斯阿米醇苷的含量
【摘要】 目的 测定感冒清热颗粒中5-0-甲基维斯阿米醇苷的含量。方法 采用高效液相色谱法,Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；甲醇-水(44∶56)为流动相；流速1.0 mL/min；检测波长：292 nm。结果 5-0-甲基维斯阿米醇苷在0.092 2～0.922 μg范围呈良好的线性关系(r＝0.999 9),平均回收率为97.9%,RSD＝0.71%(n＝6)。结论 本测定方法简便、准确、重复性好,可用于感冒清热颗粒质量控制。
【关键词】 感冒清热颗粒；5-0-甲基维斯阿米醇苷；高效液相色谱法；含量测定
Abstract：Objective To establish a method for determining the content of 4’-O-β-D-glucosyl-5-O- methylvisamminol in Ganmao Qingre Granule by HPLC. Method The seperation was performed in Hypersil C18 colunm (4.6 mm×250 mm, 5 μm) with the mobile phase of methanol-water (44∶56). The flow rate was 1.0 mL/min and the wavelength was set at 292 nm. Results The calibration curves was linear in the range of 4.608～46.08 μg/mL for 4’-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol (r＝0.999 9). The average recovery was 97.9%, RSD＝0.71% (n＝6). Conclusion The method is simple, reproducible and can be used for the quality control of Ganmao Qingre Granule.
Key words：Ganmao Qingre Granule；4’-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol；HPLC；content determination
感冒清热颗粒收载于2005年版《中华人民共和国药典》 (一部),由荆芥穗、防风、柴胡、葛根等11味药材组成,具有疏风散寒、解表清热功效,临床用于风寒感冒所见的头痛发热、恶寒身痛、鼻流清涕、咳嗽咽干等症。原标准有测定葛根中葛根素含量的方法[1]。为提升感冒清热颗粒的质量控制标准,保证临床疗效的稳定,本试验建立以高效液相色谱法测定其中主药防风的有效成分5-0-甲基维斯阿米醇苷含量的方法。
1 仪器与试药
日本岛津LC-10AT VP高效液相色谱仪,SPD-10AT型紫外检测器,CLASS-VP V5.02色谱工作站,CQX25-06超声清洗仪。感冒清热颗粒(批号20060602、20060606、20060617、20060622、20060809、20060813)及阴性样品,由广西某药业有限公司提供；5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号1523-200203)。甲醇为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 测定波长的选择
5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液经紫外分光光度计扫描,在291.8 nm处有最大吸收峰,故选择292 nm为测定波长。
2.2 色谱条件
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱(Hypersil C18 ,4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：甲醇-水(44∶56)；检测波长为292 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：室温。
2.3 系统适用性试验
分别吸取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、阴性样品溶液和供试品溶液各20 μL,注入液相色谱仪,得色谱图(见图1)。试验结果表明,供试品和对照品溶液有一保留时间相同的色谱峰,并且阴性样品在5-O-甲基维斯阿米醇苷峰附近无干扰,5-O-甲基维斯阿米醇苷与其它组分达到基线分离。分析时间适宜,理论板数定为不低于5 000。
2.4 对照品溶液的制备
精密称取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品适量,置棕色容量瓶中,加50%甲醇制成每1 mL含20 μg的溶液,即得。
2.5 供试品溶液的制备
取装量差异项下的本品内容物,研细,取约4 g,精密称定,加甲醇50 mL,超声处理(功率250 W,频率33 kHz)1 h,放冷。称定重量,用甲醇补足减失的重量。精密吸取25 mL续滤液,蒸干,残渣加水20 mL分次充分溶解,转移至分液漏斗中,用水饱和的正丁醇提取3次,每次20 mL。合并正丁醇液,用正丁醇饱和的氨试液洗涤3次,每次10 mL。分取正丁醇液,置水浴上蒸干,残渣用50%甲醇分次溶解,转移到10 mL量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,滤过,即得。
2.6 阴性样品溶液的制备
取阴性样品,照“2.5”项下方法制备,即得。