大孔吸附树脂分离纯化长春花中长春碱和长春新碱

　　2.2.6  洗脱中乙醇浓度的考察 

　　精密称取预处理后树脂AB-8(含干燥树脂5.0 g),取长春花提取液50 mL,吸附流速为2 BV/h,分别选择80%、85%、90%、95%,100%乙醇洗脱,洗脱流速为1.5 BV/h,收集洗脱液,HPLC检测,并计算洗脱能力：E＝C洗V洗/W,其中E为比洗脱量(mg/g),C洗为洗脱液中有效成分含量(mg/mL),V洗为洗脱液体积(mL),W为树脂质量(g)。结果见图2。

    由图2可知,随着乙醇浓度逐渐增大,长春新碱的比洗脱量也不断上升,90%时达到最大；乙醇浓度在85%和90%时长春碱的比洗脱量较高且基本持平,因此,考虑成本及误差,选择90%乙醇溶液作为长春碱和长春新碱的洗脱剂。

　　2.2.7  洗脱流速的考察 

　　精密称取预处理后树脂AB-8(含干燥树脂5.0 g),取长春花提取液50 mL,吸附流速为2 BV/h,以90%乙醇洗脱,洗脱流速分别为0.5、1、1.5、2、2.5 BV/h,HPLC检测,计算树脂洗脱能力,以洗脱流速1.5 BV/h最佳。见图3。

　　2.2.8  洗脱液中酸液浓度的考察 

　　保持其他条件不变,选择不同浓度的硫酸溶液调节洗脱液pH值,HPLC检测,计算树脂洗脱能力(见图4)。可见,当酸液浓度为3%时,长春碱和长春新碱的洗脱效果达到最佳。

　　2.2.9  洗脱终点的考察 

　　精密称取预处理后树脂AB-8(含干燥树脂5.0 g),取长春花提取液50 mL,吸附流速为2 BV/h,用90%乙醇溶液洗脱,调节酸液浓度为3%,洗脱流速为1.5 BV/h,收集洗脱液,HPLC检测(见图5)。可见,流出液体积为25～100 mL时,组分含量逐渐增加,大于100 mL时长春碱含量骤然降低,大于125 mL时长春新碱含量亦骤然降低,当流出液体积大于175 mL时,已经基本将组分洗脱完毕。

　　2.2.10  硅胶纯化工艺及结果

　　将大孔吸附树脂分离后的长春总碱(含量为76.4%)采用硅胶柱进一步纯化。优选二氯甲烷-甲醇＝20∶1作为长春碱的洗脱剂,15∶1作为长春新碱的洗脱剂,HPLC检测(见图6～图8),得长春碱纯度97.26%,收率61.12%；长春新碱纯度94.18%,收率58.50%。

　　3  讨论

    采用静态吸附与解吸试验,从5种非极性或弱极性大孔吸附树脂中,筛选出适用于长春碱和长春新碱分离纯化的AB-8型树脂；通过动态吸附实验,以比吸附量、解吸率、比洗脱量为指标,确定最佳条件为：比上柱量68.36 mg/g,洗脱液浓度90%乙醇水溶液,洗脱流速1.5 BV/h,酸液浓度3%,洗脱终点175 mL。

    洗脱液的选择应符合2个条件：其一,溶剂应能使大孔网状吸附剂溶胀,这样可减弱溶质和吸附剂之间的吸附力；其二,溶剂应容易溶解吸附物。因此,综合考虑选择乙醇水溶液作为溶剂。在弱碱性物质洗脱过程中,宜调节pH值,使溶剂呈酸性易于洗脱。
  
　　本试验改变传统分离纯化长春总碱的方法,首先采用成本低、易操作的大孔树脂分离,再通过硅胶柱层析,将吸附后含量为76.4%的总碱进一步纯化,得长春碱纯度97.26%,收率61.12%；长春新碱纯度94.18%,收率58.50%。该工艺收率高,避免使用有机溶剂,环保,适宜工业化生产。大孔吸附树脂每使用一次,比上柱量约下降4%,因此,大孔树脂再生问题有待进一步考察。

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