肉苁蓉苯乙醇苷对大鼠精子体外氧化损伤的保护作用研究
3 结果
3.1 肉苁蓉苯乙醇苷定性鉴定采用薄层层析法对肉苁蓉中PhGs定性分析，正丁醇-乙酸-水（5∶4∶1）为展开剂，展开晾干后，喷以氯化铁-乙醇显色剂。
PhGs含有酚羟基，会与Fe3+发生反应显紫色。
测得Rf值0.24和0.78较明显，与文献松果菊柑和麦角甾苷0.23和0.73基本吻合。
3.2 肉苁蓉PhGs对于大鼠精子氧化损伤后对精子存活率的影响精子悬液孵育30 min后各组的精子存活率由于实验条件的原因，存活率均有降低。维生素C组和肉苁蓉提取物小、中、大剂量组的精子存活率显著高于模型组( P<0.001) ; 30 min和90 min的精子活率,0.025 g·ml-1肉苁蓉提取物组与维生素C组无明显差异, 0.25和0.5 g·ml-1肉苁蓉提取物组的精子存活率显著高于维生素C组( P<0.01或P<0.001) ； 90 min后精子存活率进一步降低, 0.5 g·ml-1肉苁蓉提取物组的精子存活率保持在较高水平,与正常组相比无显著差异(见表1) 。表1 各组30, 90 min精子存活率（略）
3.3 对精子尾部低渗膨胀试验的影响低渗膨胀试验通过低渗溶液来检测精子尾部细胞膜的状况，从而了解其运动机能的实验方法。g型精子尾部全部膨胀，表示细胞膜无损，机能良好。
在精子低渗膨胀率试验中，模型组显著低于正常组(P<0.001)。其中，精子的总膨胀率(b-g型) ［7，8］：肉苁蓉提取物小剂量组与维生素C组相比无显著性差异，中、大剂量组显著高于维生素C组（P<0.001），甚至接近正常组；对于g型精子膨胀率影响，0.025 g·ml-1 肉苁蓉提取物组与维生素C组(0.25 mg·ml-1 )相比无显著性差异,但中、大剂量肉苁蓉提取物组显著优于维生素C组( P< 0.01)。见表2。表2 各组精子尾部低渗膨胀实验结果（略）
3.4 肉苁蓉PhGs对于大鼠精子氧化损伤后T-SOD活力、MDA含量的影响精子悬液孵育0.5 h后,模型组的T-SOD活力显著低于正常组(P<0.001) ,MDA量显著高于正常组(P<0.001) ;维生素C组和肉苁蓉提取物小、中、大剂量组的T-SOD活力明显高于正常组和模型组(P均<0.001),MDA 量显著低于模型组(P<0.001)。对SOD活力和MDA量的影响,0.025 g·ml-1的肉苁蓉提取物组与维生素C组(0.25 mg·ml-1)之间无明显差异； 0.25, 0.5 g·ml-1的肉苁蓉提取物组显著优于维生素C 组( P< 0.05) 。见表3。与维生素C组比较P< 0. 001。而药物空白组中与正常组无显著性差异。表3 PhGs对于精子氧化损伤后T-SOD活力、MDA含量的影响（略）
4 讨论
ROS包括氧离子，自由基和超氧负离子，是由精子和精子粒细胞产生并主要通过两种机制导致不育。第一，它破坏精子细胞膜，降低精子活力以及和卵子结合的能力；第二，ROS可以改变精子DNA，导致缺陷的父系DNA作用于孕体。我们已知精子膜富含多聚不饱和脂肪酸,在有氧条件下极不稳定,易发生精子膜脂质过氧化( lipidperoxi dation, LPO) ,使膜的液态性、流动性及通透性发生改变,造成精子膜的损伤，甚至细胞死亡。MDA作为LPO反应的最终产物之一,其含量可从一定程度上反映精子膜LPO损伤情况［9］。SOD是精子所拥有的防御ROS的主要酶系。低渗膨胀试验：为WHO推荐的一种可供选择的检查精子存活力的补充试验方法。部分学者认为，精子低渗膨胀实验可作为精子膜功能指标之一。
本文应用FeSO4／H2O2体系产生ROS，造成氧化应激损伤模型，研究了肉苁蓉提取物对大鼠精子膜结构和功能氧化损伤的保护作用。结果表明,在ROS的作用下大鼠精子膜结构和功能明显受到损伤,精子悬液T-SOD活力显著降低,MDA含量显著增高,精子膨胀率(总膨胀率、g型精子膨胀率)明显降低,精子存活率显著下降, 与正常组相比差异极显著( P<0.001) 。肉苁蓉提取物小、中、大剂量组( 0.025,0.25, 0.5 g·ml- 1)在相同的条件下均可提高精子悬液SOD活力,降低MDA 含量,对ROS所致精子膜的氧化损伤均具有不同程度的干预作用,对精子膜功能具有一定的保护作用。肉苁蓉提取物的作用呈剂量依赖性,大剂量( 0.5 g·ml- 1)时对精子膜功能的保护作用最显著。肉苁蓉具有抗氧自由基活性,对羟自由基及超氧阴离子自由基均有良好的清除作用。
本实验结果显示,适量肉苁蓉提取物能显著提高精子悬液SOD活力,降低MDA含量,抑制精子膜脂质过氧化反应,发挥抗氧化作用，对精子膜结构和功能具有明显的保护作用。这可能是在已有的可呈现出雄性激素和促性腺激素样作用外，肉苁蓉在治疗弱精子症男性不育中所表现出的另一项新药理机制。
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