毛冬青药材中毛冬青皂苷甲和毛冬青皂苷B2的含量测定的研究

             作者：陈新菊，利家平，袁海铭，李艳，曾宪仪 

【摘要】  目的建立毛冬青药材的含量测定方法。方法采用Lichrospher-C18色谱柱(4.0 mm×250 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液(37∶63)，流速1 ml/min，蒸发光散射检测器：漂移管温度107℃，气体流速2.6 L/min。结果毛冬青皂苷甲在5.19～64.88 μg浓度范围内线性关系良好，r=0.999 8(n=6)，平均回收率为100.26 %，RSD= 1.09 % (n= 6);毛冬青皂苷B2在0.9～11.25 μg浓度范围内线性关系良好，r=0.999 7(n=6)，平均回收率为101.39 %，RSD=1.46 % (n=6)。结论该法操作快速、准确，可作为毛冬青药材的质量控制方法。

【关键词】  毛冬青药材; 毛冬青皂苷甲; 毛冬青皂苷B2; 高效液相-蒸发光散射

　　Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC-ELSD method for the determination of Ilexsaponin A1 and Ilexsaponin B2 contents in Ilex Pubescens.

　　MethodsLichroshper-C18 (4.0 mm×250 mm，5 μm) column was used in HPLC with An evaporative light-scattering detector.Mobile phase was Acetonitrite-0.1%Acetic acid (37∶63), the flow rate was 1 ml/min: drift tube temperature was 107℃,and gas flow rate was 2.6 L/min.

　　ResultsThe linear range of ilexsaponin A1 was within 5.19 ～ 64.88 μg, r=0.999 8(n=6).The average recovery was 100.26%，RSD=1.09% (n=6). The linear range of ilexsaponin B2 was within 0. 9 ～ 11.25 μg,r=0.999 7(n=6). The average recovery was 101.39%，RSD=1.46% (n=6).

　　ConclusionThis method is rapid and accurate. It can be used for quality control of Ilex Pubescens.

　　Key words： Llex pubescens; Llexsaponin A1; Ilexsaponin B2; HPLC-ELSD

　　毛冬青药材为冬青科冬青属植物毛冬青Ilex pubescens Hook et Arm 的干燥根，生长在我国南方地区，具有清热解毒，活血通脉，消肿止痛的功效。近年来对毛冬青的许多研究证明毛冬青药材中含有大量的皂苷类活性物质[1～4]。为了很好的利用这一资源，我们对毛冬青药材进行了质量控制技术的研究，建立高效准确的分析测定方法，本文首次采用高效液相-蒸发光散射(HPLC-ELSD)的测定方法，同时对毛冬青药材中的毛冬青皂苷甲和毛冬青皂苷B2两种成分进行了含量测定的方法学研究[5]，取得了满意的结果。

　　1 仪器和试药

　　岛津LC-10AD泵，Alltech 500 ELSD检测器，Sepu3000色谱工作站。毛冬青皂苷甲对照品(批号：081211，含量100%)自制;毛冬青皂苷B2对照品(批号：080709，含量100%)自制。毛冬青药材：各地采挖。乙腈、甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为重蒸水。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件色谱柱为Lichrospher 100 RP-18 (4.0 mm×250 mm，5μm);流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液(37∶63);流速1ml/min;蒸发光散射检测器(飘移管温度为107℃，气体流速为2.6 L/min)。

　　2.2 测定方法

　　2.2.1 对照品溶液的制备 取毛冬青皂苷甲对照品和毛冬青皂苷B2对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含毛冬青皂苷甲为4 mg;毛冬青皂苷B2为0.9 mg的混合溶液，即得。

　　2.2.2 供试品溶液的制备取毛冬青药材粉末(过4号筛)，约1.5 g，精密称定，置250 ml回流瓶中，加100 ml的乙醇，回流2 h，取下，滤过，然后用乙醇洗涤数次，滤液蒸干，残渣用甲醇溶解到10 ml量瓶中，摇匀，即得。

　　2.2.3 测定法分别精密吸取对照品溶液5 μl和10 μl;供试品溶液5～10 μl注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。

　　2.3 专属性实验取对照品和供试品溶液按上述方法进行测定，结果在毛冬青皂苷甲和毛冬青皂苷B2对照品相应的保留时间处有相同的峰，周边无其它杂质峰干扰。毛冬青皂苷B2的保留时间在9 min左右，毛冬青皂苷甲的保留时间在11 min左右，理论板数以毛冬青皂苷甲的峰计大于8 000。结果见图1。