道地药材五鹤续断基因组脱氧核糖核酸提取方法的改进
4 结论
道地中药材用分子生物学方法进行的道地性研究，是近年来发展起来的新的鉴定方法，它可弥补传统形态学和生化分类鉴定的一些不足[1]。常用于中药材鉴定的分子生物学方法有RFLP，RAPD，AFLP，SSR，ISSR，DNA序列分析以及基因芯片等技术[5～12]。本研究的方法就采用DNA序列分析的技术来进行道地药材五鹤续断的分子鉴定，为五鹤续断的道地性和分子系统发育关系提供基础性资料。而进行这项研究关键步骤之一就在于提取高浓度的基因组DNA，可为后续实验提供高质量的目的基因，所以有必要探索五鹤续断基因组DNA提取的改进方法，为后续实验打下基础。
五鹤续断植株应采集鲜嫩幼叶，此部位有丝分裂旺盛，DNA含量较高，是基因组DNA提取的理想部位。采集后应立即进行消毒，避免提取出其它生物的DNA对五鹤续断基因组DNA的污染。由于地域限制，再加上液氮运输不便，不易储存，故本实验运用超低温冰箱-80℃的超低温冷冻中药材植株鲜嫩叶片具有与液氮类似效应，同时还具有暗视野效应，较少了叶绿素含量，避免叶绿素对DNA提取的影响，本实验结果证实此方法较为有效。已有研究发现[13，14]，五鹤续断等川续断富含多酚、多糖、蛋白质等复杂的初生及次生代谢产物，这些物质易与DNA不可逆地粘附在一起，从而抑制DNA聚合酶等多种酶的活性，明显影响后续实验。故在本实验中尝试不用饱和酚，增加一次氯仿/异戊醇的用量，尽量避免残留蛋白质和酚影响DNA的质量，同时还使用含1 mol/L NaC1的高盐TE，减少多糖对DNA含量的影响。从实验结果来看达到了目的，取得了较好的效果，基因组DNA及PCR产物条带清晰无明显拖尾等现象。
总之，由于不同植物或同一植物不同组织的结构及生化成分都不相同，而这些结构和成分上的差异对DNA的不同提取方法往往会造成不同程度的影响，导致不同提取方法所得DNA在纯度和产量上的差异。因此，在实际工作中，应自行根据试材的生化成分和材料保存时间、方法等来筛选或建立适当的提取方法。
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