侧柏叶炮制前后鞣质的含量测定

　　2.6  标准曲线的制备
   
　　精密量取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL,分别置25 mL棕色量瓶中,各加入磷钼钨酸溶液1 mL,再分别加水11.5、11、10、9、8 mL,用29%碳酸钠溶液稀释至刻度,摇匀,放置30 min,以相应的试剂为空白,照紫外可见分光光度法在760 nm处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。回归方程为：Y＝0.210 9X－0.142 5,r
＝0.999 4。

　　2.7  精密度试验

  　  取3号对照品显色后的溶液,连续测定6次,RSD＝0,结果表明本方法精密度良好。

　　2.8  稳定性试验

   　 取3号没食子酸对照品溶液,按“2.6”项下方法,自用29%的碳酸钠溶液定容至刻度开始,每隔若干时间测定1次,共测定10次,结果表明,没食子酸对照品显色后溶液在30 min内吸收度上升较大,在1～30 min内吸收度RSD＝5.17%,在30～60 min内吸收度RSD＝0.56%。故选择在30～60 min内测定。

　　2.9  重复性试验

   　 取侧柏生品粉末,依法处理样品6份,按“2.11”项下测定总酚与不被吸附酚,得出供试品中鞣质含量,重复性结果表明,样品中鞣质平均含量为0.273 4%,RSD＝4.51%。

　　2.10  加样回收率测定
   
　　取侧柏生品粉末1 g,共9份,精密称定,分别加入没食子酸对照品溶液(0.500 2 mg/mL)4.40、5.50、6.60 mL,依“2.2”项下方法制备并测定,计算鞣质的平均回收率为97.85%,RSD＝1.07%(n＝9)。结果见表1。表1  加样回收率考察结果（略）

　　2.11  样品含量测定

　　2.11.1  总酚 

　　精密量取供试品溶液2 mL,置25 mL棕色量瓶中,按“2.6”项的方法,自“加入磷钼钨酸试液1 mL起”加水10 mL,依法测定吸光度。从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的质量(mg),计算,即得。

　　2.11.2  不被吸附的多酚 

　　精密量取供试品溶液25 mL,加至已盛有干酪素0.6 g的100 mL具塞锥形瓶中,密塞,置30 ℃水浴中保温1 h,时时振摇,取出,放冷,摇匀,滤过,弃去初滤液。精密量取续滤液2 mL,置25 mL棕色量瓶中,按“2.6”项下方法,自“加入磷钼钨酸试液1 mL起”加水10 mL,依法测定吸光度。从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的质量(mg),计算,即得。

　　2.11.3  样品中鞣质的含量测定 

　　鞣质含量(%)＝(总酚量－不被吸附的多酚量)的浓度差×5×25×12.5/药材质量。结果见表2。表2  侧柏叶生品和炭品中鞣质含量的测定结果(略)

　　3  讨论

   　 将对照品总酚和不被吸附的酚比色液在400～900 nm的范围内扫描,结果显示在760 nm左右有最大吸收,且其波谱坡度较缓,误差较小,所以选择在此处测量。

  　  鞣质有多种显色方法,常用的显色剂有氯化铁、氯化铁- 1,10二氮杂菲、Folin Ciocalteu试剂、5%盐酸-丁醇、甲胺基粉-重铬酸钾溶液、Folin DAB8试剂、Folin-Denis试剂、偏钒酸铵等,但磷钼钨酸比常见的氯化铁显色的颜色更深,灵敏度更高。
   
　　鞣质的测量方法较多,有皮粉法、干酪素法、高锰酸钾法等。皮粉法虽是国际公认的鞣质含量测定方法,但耗用样品多,测定时间长,而且没有选择性,其测定结果往往偏高,适于测定鞣质含量较高的原药材。干酪素法的特点是选择性比皮粉法要高,测出有生理活性的鞣质,而无生理活性的鞣质不被测定。高锰酸钾法跟皮粉法一样选择性较小,易受样品中还原物质干扰,误差大；分光光度法的优点是操作简单,经磷钼钨酸显色后灵敏度较高。由于鞣质易氧化,所以本实验应在避光条件下操作。因鞣质受热不稳定,故不选加热回流提取,采用冷浸过夜超声提取,且操作简单。本实验结果显示,侧柏叶炒炭后鞣质含量下降,其止血作用还可能与药材中所含其它成分有关。

【参考文献】
  　　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：化学工业出版社, 2005.149.