高效液相色谱法测定利咽颗粒中绿原酸的含量

【摘要】  目的 建立高效液相色谱法测定利咽颗粒中绿原酸含量的方法。方法 色谱柱为Diamondsil Cl8(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.4%磷酸(13∶87),检测波长327 nm,流速1.0 mL/min。结果 线性范围为0.026～0.26 μg(r＝0.999 9),平均回收率为101.84%,RSD＝0.48%(n＝6)。结论 该法简便、准确、稳定,可用于利咽颗粒的质量控制。

【关键词】  高效液相色谱法；利咽颗粒；绿原酸；含量测定

    Abstract：Objective To establish a HPLC method for determination of Chlorogenic acid in Liyan Granule. Method The determination was performed on Diamondsil Cl8 (4.6 mm×150 mm, 5 μm) with mobile phase consisted of acetonitrile-0.4% phosphonic acid solution (13∶87) at a flow rate of 1.0 mL/min. The detective wavelength was set at 327 nm. Result The linear range of Chlorogenic acid was 0.026～0.26 μg (r＝0.999 9) and the average recovery rate of Chlorogenic acid was 101.84% (RSD＝0.48%, n＝6). Conclusion This method is simple, accurate and with good stabilization, and suitable for the quality control of Liyan gramule.

    Key words：HPLC；Liyan Granule；Chlorogenic acid；content determination
 
    利咽颗粒由金银花、玄参、薄荷(油)、桔梗等9味中药组成,具有宣肺利咽、清热解毒之功效。金银花为处方中的君药,用量最大,其主要成分为绿原酸。测定绿原酸的含量能够反映和控制该制剂的内在质量[1-3]。本试验采用高效液相色谱(HPLC)法测定利咽颗粒中绿原酸的含量,方法快速简便、稳定可靠、专属性强,为控制利咽颗粒的质量标准提供了可借鉴的依据。

　　1  仪器与试药
  
　　岛津LC-10A高效液相色谱仪,岛津SPD-10A紫外检测器,KQ-250DB型数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号753- 200413,供含量测定用)；利咽颗粒(杭州华东医药集团生产,批号080801、080802、080803)。磷酸为分析纯,甲醇和乙腈为色谱纯,水为重蒸水。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件

    色谱柱：Diamondsil Cl8(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)；流速：1.0 mL/min；检测波长：327 nm；柱温：室温。进样量：10 μL。在此色谱条件下,绿原酸的保留时间约8 min,理论塔板数按绿原酸计算均不低于2 000。

　　2.2  溶液的制备

　　2.2.1  对照品溶液的制备 

　　精密称取绿原酸对照品约5.2 mg,置100 mL量瓶中,加50%甲醇适量,超声波处理l0 min,再加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得。

　　2.2.2  供试品溶液的制备
 
　　精密称取本品约0.5 g,置于50 mL量瓶中,加入50%甲醇至刻度,密塞,称定重量,放置4 h(避光),超声(250 W,40 kHz)处理40 min,放冷,称重,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得。

　　2.2.3  阴性对照溶液的制备
 
　　按样品处方量制备不含金银花药材的利咽颗粒,按“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。