HPLC法测定鹿蹄草中槲皮素的含量

                 作者：张文,黎钰铃,封丽彬,范卫锋

【摘要】  目的 建立HPLC法测定鹿蹄草中槲皮素含量的方法。方法 采用HPLC法,色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸(50∶50)；检测波长：370 nm。结果 槲皮素在0.092～0.46 μg范围内线性关系良好,平均回收率为99.24%,RSD＝0.70%。结论 方法简便、准确、灵敏度高、重复性好,能有效测定鹿蹄草药材中槲皮素含量。

【关键词】  鹿蹄草；槲皮素；高效液相色谱法；含量测定

    Abstract：Objective To set up a method for determining the quercetin in Pyrola calliatha H. Andres. Method HPLC method was carried on Agilent Eclipse XDB-C18 column (4.6 mm×150 mm, 5 μm) with mobile phase of methanol-0.1% phosphoric acid (50∶50), and the detecting wavelength was at 370 nm. Result The standard curve was linear within the range of 0.092～0.46 μg. The average recovery rate was 99.24% and RSD was 0.70%. Conclusion The method is simple, accurate, highly sensitive and reproducible. It can be used for the quality determination of quercetin in Pyrola calliatha H. Andres.

    Key words：Pyrola calliatha H.Andres；quercetin；HPLC；content determination
 
    鹿蹄草为鹿蹄草科植物鹿蹄草Pyrola calliatha H. Andres的干燥全草,习称鹿衔草,收载于2005年版《中华人民共和国药典》(一部)。其性温、味甘苦,具有祛风湿、强筋骨、止血之功效,用于风湿痹痛、腰膝无力、月经过多、久咳劳嗽[1]。现代药理研究表明,该药具有明显的抗菌、抗炎、促进免疫、改善冠心病症状等作用[2]。其主要含有鹿蹄草素、槲皮素等成分。本试验采用HPLC法测定鹿蹄草中槲皮素的含量。

　　1  仪器与试药

    Agilent1200系列高效液相色谱仪(包括四元泵,自动进样器,脱气机,紫外可见检测器,柱温箱)。

    鹿蹄草(广西玉林制药有限责任公司提供,由广西玉林制药有限责任公司蒙毅高级工程师鉴定)；槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号100081-200406,含量测定用,纯度在98%以上)。水为重蒸馏水,甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件

    色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(50∶50)；流速：1.0 mL/min；检测波长：370 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。色谱图见图1。

　　2.2  对照品溶液的制备

    精密称取槲皮素对照品适量,加甲醇制成每1 mL含槲皮素46 μg的溶液,作为对照品溶液。

　　2.3  供试品溶液的制备

    取鹿蹄草粉末适量,取0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇-10%盐酸(3∶1)的混合溶液50 mL,称定重量,回流1 h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,滤液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液作为供试品溶液。

　　2.4  线性关系考察

    分别精密吸取槲皮素对照品溶液(46 μg/mL)2、4、6、8、10 mL,置于10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,各进样10 μL,连续进样2次,测定峰面积。以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程：Y＝5.328 7×102X－0.200 9,r＝0.999 9,在0.092～0.46 μg范围内呈良好的线性关系。