不同产地当归中阿魏酸、藁本内酯及总多糖含量比较
【摘要】 目的 通过测定不同产地当归中阿魏酸、藁本内酯和总多糖的含量,探讨产地对当归药材质量的影响及当归道地性的科学依据。方法 采用高效液相色谱法和比色法,测定甘肃、云南、四川、陕西等地所产当归中阿魏酸、藁本内酯和总多糖的含量。结果 在4个产地的当归中,阿魏酸、藁本内酯和总多糖的含量均以甘肃产当归为最高。结论 甘肃产当归质量较好,甘肃当归的道地性是有科学依据的。
【关键词】 当归；阿魏酸；藁本内酯；总多糖；高效液相色谱法
Abstract：Objective To study the affection of cultivating regions to the quality of Radix Angelicae Sinensis and the scientific basis of authenticity of Radix Angelicae Sinensis. Methods The amounts of ferulic acid, ligustilide and total polysaccharide in Radix Angelicae Sinensis cultivated in Gansu, Yunnan, Sichuan, Shanxi provinces were determined by HPLC and UV spectrophotometry. Results Radix Angelicae Sinensis cultivated in Gansu province possesses the highest contents of ferulic acid, ligustilide and total polysaccharide among that from four regions. Conclusion The quality of Radix Angelicae Sinensis cultivated in Gansu province is better than that from other regions. It is reasonable to regard Radix Angelicae Sinensis cultivated in Gansu province as authentic medical herbs.
Key words：Radix Angelicae Sinensis；ferulic acid；ligustilide；total polysaccharide；HPLC
当归为伞形科植物当归 Angelica sinensis(Oliv.) Diels的干燥根,具有补血活血、调经润肠功效[1],主产于甘肃,云南、陕西、四川等地亦有栽培。据考证,中国历代一直以现今甘肃岷山山脉所产当归为道地品种,早在公元六世纪初,就已作为贡品[2]。为探讨产地对当归药材质量的影响及当归道地性的科学依据,我们对产于甘肃、云南、四川、陕西等地当归中阿魏酸、藁本内酯及总多糖含量采用高效液相色谱法和比色法测定。
1 仪器与材料
LC-10Avp高效液相色谱仪(日本岛津),包括LC-10Avp泵、DAD SPD-M10Avp紫外-可见光检测器,C-R6A数据处理机；722G型分光光度计(上海光学仪器厂)。阿魏酸对照品(美国Sigma；St.Louis,MO)；藁本内酯对照品由总后卫生部药检所提供；右旋糖苷(dextran,分子量10000-20000,美国Sigma；St.Louis, MO)。当归采自甘肃岷县、宕昌,云南丽江、中甸,四川宝兴、南平,陕西龙县、平利。经过笔者鉴定为当归Angelica sinensis (Oliv.)Diels。乙腈为色谱纯,其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Nova-Pak C18色谱柱(150 mm ×3.9 mm,4 μm),预柱Nova- Pak C18(20 mm×3.9 mm,4 μm)。流动相为乙腈-水(磷酸调至pH 4.0),梯度洗脱,0～10 min,5%～35%乙腈；10～30 min,35%～70%乙腈；30～40 min,70%～5%乙腈。检测波长为284 nm,体积流量为1 mL/min,柱温为室温,进样量20 μL。在上述色谱条件下,阿魏酸、藁本内酯与样品中其它组分色谱峰可达基线分离,相邻色谱峰分离度大于1.5。色谱图见图1。
2.2 对照品溶液的制备及对照品纯度检查
精密称取阿魏酸、藁本内酯对照品(五氧化二磷减压干燥36 h)适量,加甲醇制成1 mg/mL阿魏酸和2 mg/mL藁本内酯的混合对照品溶液,即得。将混合对照品溶液稀释10倍,备用。吸取混合对照品稀释溶液和空白试剂各20 μL,注入液相色谱仪,记录色谱图。除去甲醇溶剂峰后,按峰面积归一化法计算各对照品纯度,2种对照品质量分数均大于99%。另精密称取右旋糖苷(105 ℃干燥至恒重)0.1 g,定容至100 mL量瓶中,得0.1%右旋糖苷储备液。
2.3 供试品溶液的制备
取当归药粉约0.5 g,精密称定,置50 mL离心管中,加甲醇20 mL,超声提取(功率120 W,频率40 kHz)40 min,离心后收集上清液,重复提取1次,合并两次提取液,回收甲醇至干,精密加甲醇2 mL溶解,供阿魏酸、藁本内酯测定。
另精密称当归药粉5.0 g,加水40 mL,加热,沸腾后保持40 min。煎煮2次,过滤,滤液离心,合并2次上清液,冰冻干燥,即得。再精密称取该提取物0.5 g,加水2 mL溶解,再加95%乙醇使其浓度达85%。静置24 h,抽滤。滤饼用70%乙醇洗涤5次,然后溶解在60 ℃水中,2 000 r/min离心5 min,收集上清液,加水定容至100 mL容量瓶中,供测定多糖用。