南蛇藤中扁蒴藤素提取分离工艺研究
2.2 上样量的考察
称取10.0 g 聚酰胺(60～100目)3份，装入3根柱长内径完全相同的柱子，分别称取0.1 g、0.2 g、0.5 g 浸膏，按“2.1”项下操作，使物料比(浸膏与聚酰胺质量比)分别为0.01、0.02、0.05，用甲醇水（体积比3∶1）洗脱，收集洗脱液，合并，浓缩，干燥得扁蒴藤素粗品。按“1.4.3”项下方法进样测定，计算粗品中扁蒴藤素的纯度（质量分数）和收率，比较不同物料比对扁蒴藤素的分离提纯效果。见表2。
表2 物料比对产品纯度和收率的影响（略）
Table 2 Effects of rate of crude pristimerin to polyamide on product recovery and purity
由表2可见，当物料比为0.02 时，所得扁蒴藤素的纯度最高，而不同的物料比对产品的收率无明显影响。因此，选择0.02为最佳物料比。
2.3 硅胶柱层析
使用200～300目硅胶，采用石油醚湿法装柱，将粗品用少量丙酮溶解，拌入硅胶，烘干，研磨，过筛，加入柱子顶端，先以石油醚乙酸乙酯（体积比20∶1）洗脱一段时间，前沿黄色色带被洗脱下来后，改以石油醚乙酸乙酯（体积比10∶1）洗脱，至红色色带被洗脱下来时开始收集洗脱液，点板，合并，浓缩，得到较纯品，按“1.4.3”项色谱条件以HPLC测定其纯度为85.14%（峰面积归一化法）。
2.4 重结晶
将经过2次柱层析后的较纯品，在加热、搅拌的条件下加入石油醚乙酸乙酯（体积比10∶1）至完全溶解，趁热过滤，冰箱中放置析晶，得到橙红色针状结晶。
2.5 优化工艺
南蛇藤根丙酮浸膏经过聚酰胺柱层析纯化，按物料比0.02（浸膏与聚酰胺的质量比）装入层析柱中，常压下用甲醇水(体积比3∶1)洗脱，收集洗脱液至洗脱液近无色，浓缩后得到粗品，再经硅胶柱层析，得到纯度为85.0%的产品，此产品经过石油醚乙酸乙酯（体积比10∶1)重结晶，最终得到扁蒴藤素质量分数达98.0%以上的产品。
3 扁蒴藤素的纯度及结构鉴定
3.1 纯度测定
取适量扁蒴藤素晶体，加甲醇溶解，按“1.4.3”项色谱条件测定，利用峰面积归一化法计算得扁蒴藤素的纯度为98.85% 。
图3 扁蒴藤素产品的HPLC图谱
Figure 3 HPLC spectrum of the product
3.2 结构鉴定
扁蒴藤素，橙红色针状结晶（石油醚乙酸乙酯），理化及光谱性质与文献［2,3］中报道一致，结构式如下：
图4 扁蒴藤素的结构式（略）
Figure 4 Structure of pristimerin
各种波谱数据归属如下：UV MeOH λmax/nm：204，258，424。IR KBr νmax/cm-1：3 350，2 940， 1 725，1 650，1 590，1 520，1 435，1 375，1 300，1 245， 1 220，1 205，1 185，1 155，1 145，1 095，1 085，990，870，860，850。ESIMS(+)：487(［M+Na］+)，465(［M+H］+)，263，202，201。13CNMR (CDCl3) δ :119.5(C1)，178.2(C2)，146.0(C3)，117.2(C4)，127.4(C5)，134.2(C6)，118.1(C7)，170.3(C8)，43.0(C9)，164.8(C10)，33.5(C11)，29.6(C12)，39.4(C13)，45.0(C14)，28.6(C15)，36.4（C16)，30.5(C17)，44.3(C18)，30.9(C19)，40.4(C20)，29.9(C21)，34.8(C22)，10.2(C23)，38.2(C25)，21.6(C26)，18.3(C27)，31.6(C28)，178.7(C29)，32.7(C30)，51.5(C31)。1HNMR (CDCl3) δ :7.02(1H, d, J=7.1 Hz, C6H)，6.52(1H, s, C1H)，6.34(1H, d, J=7.1 Hz, C7H)，6.96(1H, brs, 经D2O交换后消失, —OH)，3.52(3H, s, C31H)，2.23(3H, s, C23H)，1.45(3H, s, C25H)，1.25(3H, s, C26H)，1.17(3H, s, C30H)，1.08(3H, s, C28H)，0.52(3H, s, C27H)。
4 讨论
4.1 本方法工艺简单、成本低，主要由丙酮提取、聚酰胺柱层析、硅胶柱层析3步完成：采用丙酮提取，体积分数75%甲醇洗脱，而且甲醇可以回收后反复使用，大大降低了成本；聚酰胺依次用5%NaOH、H2O、10%CH3COOH洗脱后，也可以反复使用，为扁蒴藤素的工业化生产奠定了基础。
4.2 本方法不仅优化了提取工艺，而且对聚酰胺柱层析的主要工艺参数如洗脱剂、物料比等因素进行了详细的考察，使实验达到了低耗、高效的目的。
致谢：本文中13CNMR谱及1HNMR谱的测定由中国科学院南海海洋研究所完成，特此致谢。
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