大肠腺癌组织中VASP和PCNA的表达
作者：张京伟， 魏 蕾 ， 李华， 彭小春 ，袁宏银
【摘要】 目的 研究大肠腺癌组织中VASP和PCNA的表达及临床意义。方法 采用SP免疫组化染色法检测25例大肠腺癌组织中VASP及PCNA的表达。结果 VASP阳性21例(84%)，PCNA阳性18例(72%)，两者均为阳性16例(64%)， 均为阴性2例(8%)；VASP表达率和PCNA表达率之间有明显正相关性(P<0.05)；VASP表达与PCNA表达均与大肠腺癌分化程度显著相关(P<0.05)，在合并后的Duke's分期A、B和C、D期间有显著性差异(P<0.05)。结论 VASP随着大肠腺癌分期、分级增加而表达增强的特性提示，VASP变化可能成为辅助判断大肠腺癌的转移和增殖特性的一个新指标。
【关键词】 大肠腺癌；VASP；PCNA；免疫组化
The Expression of VASP and PCNA in Colorectal Adenocarcinomas
Key words：Colorectal adenocarcinomas; VASP; PCNA; Immunohistochemistry
本实验运用免疫组化SP法对25例大肠腺癌标本进行VASP及PCNA检测，旨在探讨其在大肠腺癌中的表达及相互关系。
1 资料和方法
1．1 标本来源和处理
收集我校中南2000～2002年间手术切除的大肠腺癌标本25例，所有病例均经病理确诊，其中男12例，女13例，年龄31～88岁。标本经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片4μm厚。
1．2 染色方法
全部病例均行常规HE染色供病理诊断，按WHO结直肠癌分类标准进行分类。VASP及PCNA免疫组化检测采用SP法，其操作步骤按试剂盒说明进行。所用VASP单克隆抗体购于德国Immuno Globe公司，PCNA单克隆抗体购于Zymed公司，SP试剂盒购于福州迈新生物技术公司。
1．3 VASP及PCNA染色判断标准
按镜下细胞胞核内染色颗粒的有无和细胞染色的深浅分为： ①阴性( - ): 阳性细胞数＜25 %；染色淡；②阳性(+～++)：阳性细胞数25%～50%；染色为棕色；③强阳性(+++～++++)：阳性细胞数＞50%；染色为深棕色。
1．4 统计学处理
分别采用Ridit检验和Spearman相关分析。
2 结果
2．1 标本病理分析结果
根据HE染色图像，标本病理分级结果为：高分化7例，中分化17例，低分化1例；按Duke's分期其结果为：A期无，B期13例，C期11例，D期1例。
2．2 VASP的阳性表达
VASP在正常的大肠粘膜上皮细胞的胞膜上呈点状或间断状着色，胞浆内呈小团状着色，在细胞相邻的侧面呈连续线状着色，同质和极性分布；大肠腺癌细胞胞膜完全着色,着色深,或异质性着色，极性丧失，各方向均可见着色, 见图1。
在25例大肠腺癌标本中，VASP阳性表达率为84%（21/25），与大肠腺癌分化程度有显著相关性（P＜0.05)，见表１，在合并后的Duke's分期A、B和C、D期间差异显著(P＜0.05)，见表２。
2．3 PCNA阳性表达
在25例大肠腺癌标本中， PCNA阳性表达率为72%（18/25）， 与大肠腺癌分化程度有显著相关性（P＜0.01)， 见表1。 在合并后的Duke's分期A、 B和C、 D期间有极其显著性差异（P＜0.01）， 见表2。表1 VASP及PCNA与大肠腺癌病理分级的关系
2．4 VASP与PCNA在大肠腺癌中的表达关系
18例PCNA阳性大肠腺癌中VASP阳性者16例，占88.9%；7例PCNA阴性大肠腺癌中VASP阳性者2例，占28.6%,二者之间差异有显著性意义（P＜0.05）, 见表3。表3 VASP与PCNA在大肠腺癌中的表达关系
分组nVASP阳性VASP阴性PCNA阳性组18162PCNA阴性组752
3 讨论
VASP（Vasodilator?stimulated phosphoprotein）基因位于人类染色体19q13.2～13.3区域，编码一种肌动蛋白相关蛋白。在细胞内, VASP主要聚集在与细胞粘附、细胞移动相关的区域，并与细胞骨架的变化联系紧密，将各种胞外信息传递到胞内,从而调节细胞的形态发生、分化和生长[1?3]。1999年KELI LIU等人发现VASP蛋白的缺失可以导致肿瘤细胞的产生，同时他们还提出VASP蛋白过表达和低水平表达均可导致肿瘤细胞的转型[4]。最近，Dertsiz等[5]还发现肺腺癌组织中VASP的表达明显高于正常水平，且随着肿瘤分化程度的降低其表达水平逐渐升高。
本项研究首次报道了大肠腺癌组织中VASP表达状况，结果表明，VASP在大肠的正常及癌变组织中均有不同程度的表达，但表达量及其分布显著不同。正常的大肠粘膜表达的VASP在胞膜上和胞质内呈同质性和有极性的分布。而大肠腺癌VASP的表达明显增强，呈异质性或非极性变化，且腺癌分化程度降低与VASP表达增高存在显著的相关性。而且VASP的过度表达在合并后的Duke's分期A、B和C、D期间有显著性差异，提示VASP在大肠腺癌的表达水平可能与淋巴结及远处转移有关。此外本组大肠腺癌组织中，18例PCNA阳性大肠腺癌中VASP阳性者16例，占88.9%；7例PCNA阴性大肠腺癌中VASP阳性者2例，占28.6%，这表明VASP的阳性表达与PCNA的阳性表达之间有较高的一致性，能够反映细胞的增殖状态。因此VASP的表达变化可能成为辅助判断大肠腺癌的转移和增殖特性的一个新指标。
【】
［1］ Jenzora A, Behrendt B, Small JV, et al. PREL1 provides a link from Ras signalling to the actin cytoskeleton via Ena/VASP proteins[J]. FEBS Lett, 2005, 579 (2):455?63.
[2] Legg JA, Machesky LM. MRL proteins: leading Ena/VASP to Ras GTPases[J]. Nat Cell Biol, 2004,6 (11):1015?1017.
[3] Zhuang S, Nguyen GT, Chen Y, et al. Vasodilator?stimulated Phosphoprotein Activation of Serum?response Element?dependent Transcription Occurs Downstream of RhoA and Is Inhibited by cGMP?dependent Protein Kinase Phosphorylation[J]. J Biol Chem, 2004, 279(11):10397?10407.
[4] Liu K, Li L, Nisson PE, et al. Reversible tumorigenesis induced by deficiency of vasodilator?stimulated phosphoprotein[J]. Mol Cell Biol, 1999, 19(5):3696?3703.
[5] Dertsiz L, Ozbilim G, Kayisli Y, et al. Differential expression of VASP in normal lung tissue and lung adenocarcinomas[J]. Thorax, 2005, 60 (7):576?581.
