药用植物楮头红化学成分初步分析

           作者：朱庆银，何海斌，李清禄，，林 茹，蔡碧琼，谢勇平

    【摘要】  目的  研究楮头红的化学成分。方法  用经典的中草药化学成分提取分离方法，借助系统预试验初步判断楮头红所含的化学成分，用苯酚-硫酸法测定其多糖总量，用原子吸收法测定部分营养元素含量。结果  楮头红含还原多糖平均为75g/kg，含Mg、Zn、Mn、Cu分别为205.446±6.00、50.279±2.25、319.294±12.00 、10.867±0.36mg/kg，含Ca、Fe、K分别为 13.501±0.24、1.268±0.56 和17.467±0.36g/kg，此外还含有游离苷类物质、黄酮类物质、酚类、鞣质等物质。结论  楮头红所含的生物活性成分与临床药效基本一致。
   
    【关键词】  楮头红；化学成分；多糖；营养元素
        
    【Abstract】  Objective  To study the chemical components of S.nepalensis Wall.Methods  The chemical components of S.nepalensis Wall were extracted by classical extraction and the primary composition of the extract were estimated with qualitative analysis. The content of polysaccharide and some nutrient elements were determined with phenol-sulfuric acid and atomic absorption spectrophotometry (AAS) respectively.Results  The average content of polysaccharide in S.nepalensis Wall was 75 g/kg，the content of nutrient elements Mg、Zn、Mn、Cu were 205.446±6.00、50.279±2.25、319.294±12.00 、10.867±0.36（mg/kg)respectively，and Ca、Fe、K were 13.501±0.24、1.268±0.56 和17.467±0.36（g/kg）respectively. Again there were other composition in the extract，including glycosides，flavones，phenols and tannins etc.Conclusion  It is consistent basically that the chemical components in S.nepalensis Wall with its clinical effects.
   
    【Key words】  S.nepalensis Wall； chemical components； polysaccharide； nutrient elements
   
    乙型肝炎目前尚无特效药，这是世界性问题。临床上主要以保肝护肝、凉血解毒或提高自身免疫力来提高对疾病的抵抗力，减少疾病造成的侵害。中草药及其制剂对该病有独特的疗效，这可能与药用植物多成分的协调和增效作用有关－如已有药理研究表明植物多糖可调节机体免疫功能，并在抗肝炎等方面有独特的生物活性，还能诱生干扰素和抗病毒的功能［1，2］；鞣质有抗菌抗炎抗过敏、抗脂质过氧化、抗肿瘤、抗人体免疫缺陷病毒（HIV）等作用［3］；黄酮类化合物生物活性广泛而温和，有保护肝脏和其他组织、器官和抗病毒、抗菌的作用，并有抑制癌和细胞毒素等多种作用［4］；皂苷有影响代谢、免疫和酶系统以及抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤等作用，大多数中药的皂苷具有明显的抗氧化作用［5，6］；植物中多种有机态营养微量元素［7］易于吸收，与人体免疫密切相关，对疾病恢复有辅助作用。楮头红(S.nepalensis Wall)，别名风柜斗草［8］。《中药大辞典》记载：其性凉、味酸、无毒；功用：清肺热，去肝炎［9］；《实用中草药》记载：其性平、味甘。功用：凉热解毒、凉血利水，主治急性肝炎，肺热咳嗽［10］。据有关临床使用报道：楮头红对急性肝炎(甲肝、乙肝急性期)疗效最佳，对慢性肝炎及乙肝病毒携带者有效。在福建省民间广为使用，是一种极有价值的天然药用植物和中草药资源。对该植物的化学成分、药理活性、药效关系等的研究目前尚未见报道。为寻找活性物质，了解楮头红临床用药机制和指导用药，开展对楮头红化学成分的研究，对探讨楮头红临床用药机制，指导科学地合理用药具有重要意义，对进一步深入开发应用该天然药用植物也具有指导意义。
   
    1  材料与方法
   
    1.1  材料
   
    1.1.1  仪器  天平（梅特勒-托利），旋转蒸发器（上海贝凯生化设备公司），恒温水浴锅（上海贝凯生化设备公司），恒温磁力搅拌机（江苏省金坛市荣化仪器公司），电热套（江苏省金坛市荣化仪器公司），DHG电热恒温干燥箱（天津津北真空仪器厂），电热板（宁波市宏达仪器公司），原子吸收分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司，TAS－990型）。
   
    1.1.2  材料与试剂  楮头红（购自三明和漳州的天然药用植物，经福建中医研究院鉴定）；无水乙醇、95%乙醇、丙酮、正丁醇、三氯化铁、α-萘酚、3，5-二硝基苯甲酸、硝酸银、冰乙酸、活性炭、苯酚、葡萄糖等均为分析纯。
   
    1.2  方法
   
    1.2.1  楮头红化学成分系统预试
   
    1.2.1.1  化学成分提取  取50g楮头红干药末，加石油醚回流提取（1.5h）3次，过滤，合并滤液浓缩后（下同）得石油醚提取部位105ml；滤渣加乙醚回流提取（1.5h）3次，过滤，合并滤液得乙醚提取部位110ml；所得滤渣继续加乙酸乙酯回流提取（1.5h）3次，过滤，合并滤液得乙酸乙酯提取部位116ml；所得滤渣再加乙醇回流提取（1.5h）3次，过滤，合并滤液得乙醇提取部位110ml；最后在滤渣中加蒸馏水回流提取（1.5h）3次，过滤，合并滤液得馏水提取部位168ml。临用时根据需要将各部位提取液稀释或浓缩。
   
    1.2.1.2  化学成分系统预试  各提取部位的化学成分系统预试验采用化学特征反应定性和纸层析定性试验［11～13］。
   
    1.2.2  多糖提取与含量测定
   
    1.2.2.1  多糖提取与初步精制  取“1.2.1.1”馏水提取部位上清液用酶法去除淀粉，按18u/g加液化酶到上清液中，在pH为6，85℃水浴条件下处理1.5h，用I2/KI溶液检验直到碘液不变色，接着按200u/g加糖化酶，pH调至6，水浴温度60℃处理1h。去淀粉后，接着用sevag法除去蛋白质，然后加3倍体积95%乙醇溶液，静置1 h后，沉淀抽滤，干燥即得精制多糖。
   
    1.2.2.2  多糖含量测定［14］  用葡萄糖为对照品，用“1.2.2.1”所得精制多糖为供试样品，含量测定采用硫酸-苯酚法。
   
    1.2.3  元素测定
   
    1.2.3.1  楮头红中钙、镁、铁、锰、锌、铜测定［15］  称取烘干磨碎的楮头红样品2.000g于瓷坩埚中，在电热板上缓缓加热炭化至不再冒烟，移入高温电炉，逐渐升温到500°C灰化2h。待冷却后滴加硝酸（1：1）润湿灰分，蒸发至干后，置于高温电炉中继续灰化完全，用2ml HCL（1：1）溶解灰分，移入25ml容量瓶中，加水定容。在火焰原子吸收分光光度计上采用标准工作曲线法，分别于285.20nm、422.70nm、248.3nm、279.5 nm、213.8 nm、324.7 nm波长处测定标准液和样液中Mg、Ca、Fe、Mn、Zn和Cu的吸收值，即得。1.2.3.2楮头红中钾的含量测定  取干燥的楮头红粉末1.0g于1mol/L盐酸溶液中浸提，吸取浸提的待测液5.00ml于25ml容量瓶中，用水定容。在火焰光度计上采用标准工作曲线法［16］，于766.8nm处相同条件测定，计算即得。
   
    2  结果与分析
   
    2.1  楮头红化学成分  化学成分系统预试和纸层析法试验结果如表1、2。楮头红中主要活性化学成分有多糖、游离苷类物质、黄酮类物质、皂苷、有机酸、酚类、鞣质等物质。

表1  楮头红化学成分试管预试法鉴定结果 

表2  楮头红化学成分圆形油纸层析法鉴定结果

    2.2  多糖含量  经多次提取测定，楮头红中多糖的平均含量为75.0g/kg。
   
    2.3  元素测定  各元素测定结果如表3所示。

表3  几种元素测定结果  （n=5）

    3  讨论
   
    试验表明，楮头红中含有游离苷类物质、黄酮类物质、酚类、鞣质类等物质，含量较高的多糖和较丰富的人体所必需的营养元素，这些成分有的可调节机体免疫功能；有的可诱生干扰素和抗病毒作用；有的可抗菌抗炎；有的可抗脂质过氧化、抗肿瘤、抗人体免疫缺陷病毒（HIV）；而有的可抑制癌细胞和细胞毒素、保护肝脏等多种作用，这与楮头红的临床药效基本一致。但是要掌握楮头红的临床用药机制以及药效与各类物质结构之间的关系，有待于进一步对楮头红的各化学成分进行分离、分子结构鉴定和临床药理试验等研究。

【】

    1  马红樱，张德禄，胡春香，等.植物活性多糖研究进展.西北师范大学学报，2004，40(3)：112-117.    
    2  谭仁祥.植物成分功能.北京：出版社， 2003，115.    
    3  冯卫生.鞣质类化合物的生物活性研究.医药情报，1996，2(4)：220-224.    
    4  陈业高.植物化学成分.北京：化学出版社，2004，240.    
    5  徐先祥，夏伦祝，高家荣.中药皂苷类物质抗氧化作用研究进展.中国中医药科技，2004，11(2)： 126-128.    
    6  杨志刚，陈阿琴，俞颂东，等.三七皂苷药理作用研究进展.中国兽药杂志，2005，39(1)：33－37.    
    7  新宇.微量元素与免疫. 百科知识，2005， (02S)：18.    
    8  林来官.福建植物志，第4卷.福州：福建科技出版社，1989，1798.    
    9  江苏新医学院.中药大辞典.上海：上海人民出版社，1997，2290.    
    10  陈桂菲，叶淑玲.风柜头草药用探讨.时珍国医国药，2000，11(2)：129.    
    11  北京医学院、北京中医学院.中草药成分化学.北京：人民卫生出版社，1980，187-189.
    12  谭仁祥.植物成分分析.北京：科学出版社， 2004，136.    
    13  董小萍.中药品种品质与化学成分实验.上海：上海科学技术出版社，2003，169－173.    
    14  张惟杰.复合多糖生化研究技术.北京：科学出版社，1998，211-213.    
    15  朱晓帆.四川、云南部分茶叶中Cu、Fe、Zn、Mg、K含量测定.微量元素与健康研究，1994， 11(4)：52、64.    
    16  黄绍全，刘明秋，林海，等.巴戟天中的无机元素与药效关系的研究.微量元素与健康杂志，1993， 10(2)：23-25.