三叶青对CCl4致肝损伤大鼠血清五项生化指标水平的影响

               作者：伍昭龙，吕江明，李春艳，彭英福

　摘  要：目的：研究三叶青水煎液对CCl4致大鼠急性肝损伤的保护作用。方法：将40只SD大鼠随机分为5组，即正常对照组，模型对照组，高、低剂量组及阳性对照组，分别灌胃等容积(10 mL/kg)的生理盐水、三叶青水煎液(1.6 g/mL、0.16 g/mL)和联苯双酯（0.000208 g/mL），连续6 d，每天1次。末次给药后，除正常组外其他各组腹腔注射CCl4原液1次，造成大鼠急性肝损伤模型，检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST )、碱性磷酸酶（ALP）、丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）水平。结果：与模型组比较，三叶青高、低剂量治疗组ALT、AST、ALP 及MDA含量均明显降低(P<0.05或P<0.01)，但SOD活性明显升高(P<0.05或 P<0.01)；高剂量组与阳性对照组比较，AST、ALP 及MDA水平差异显著（P<0.05）。结论：三叶青对CCl4造成的大鼠急性肝损伤具有保护作用，且三叶青高剂量保护损伤肝的效果优于联苯双酯。

    关键词：三叶青；水煎液；肝损伤；CCl4

    三叶青为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤（Tetrastigma Hemsleyanum Diels et Gilg），主要分布于长江以南各地，药源十分丰富。全草含有槲皮素、山柰酚、山柰酚-3-O-新橙皮糖苷等多种黄酮类化合物[1-3]，具有清热解毒、活血祛风的功效[4]，民间用于治疗黄疸及急、慢性肝炎有较好的疗效。药理实验表明，三叶青能促进家兔肝细胞吸收和吞噬放射性四碘四氯荧光素[5]，有加强肝脏功能的作用。在此基础上，我们研究了对CCl4造成的大鼠急性肝损伤5项血清生化指标水平的影响, 以探讨其作用机制，为临床应用三叶青治疗肝病提供实验依据。

    1  材料与方法

    1.1   材料

    1.1.1   实验动物

    SD大鼠40只，质量(180±20)g，由中南大学实验动物学部提供。

    1．1．2  药品与试剂

    三叶青（块根）采自湖南吉首市郊区，由李春艳副教授进行生药学鉴定；联苯双酯（浙江医药股份有限公司新昌制药厂），批号：050604。ALT试剂盒，批号：010021；AST试剂盒，批号：020071；ALP试剂盒，批号：030261，以上均为北京中生北控生物科技股份有限公司产品。MDA试剂盒，批号：20051202； SOD试剂盒，批号：20051212，均为南京建成生物工程研究所产品。

    1．1．3  三叶青水煎液的制备

    取三叶青干燥块根320 g，捣碎，加水1000 mL浸泡0.5 h后再煎煮2 h，滤过。滤渣再加水1000 mL，煎煮1.5 h，滤过，合并滤液并浓缩到200 mL。制得三叶青水煎液，每1 mL含生药1.6 g。

    1．1．4  仪器

    YS-2000 III半自动生化分析仪（深圳越华科技有限公司）；723可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；80-2B离心机（湖南星科仪器有限公司）；HH・W21・20电热恒温水箱（天津泰斯特仪器有限公司）。

    1．2  方法

    1．2．1  实验大鼠分组、给药及血清的制备

    SD大鼠随机分为5组，每组8只，雌雄各半。分别为正常对照组、模型对照组，灌胃10 mL/kg生理盐水;三叶青高、低剂量治疗组，灌胃等容积的三叶青水煎液，浓度分别为1.6 g/mL、0.16 g/mL,给药剂量为16 g/kg和1.6 g/kg，后者根据成人用量以K折算系数法[6]换算确定；阳性对照组，灌胃等容积的联苯双酯，质量浓度为0.000208 g/mL，给药剂量为0.00208 g/kg。以上各组均每天给药1次，连续6 d。末次给药后，除正常对照组外，其余大鼠按2 mL/kg腹腔注射CCl4原液1次，建立急性肝损伤模型。该剂量由预实验确定，为[7]的2倍。禁食24 h后，称体重，以3 %戊巴比妥钠按1 mL/kg腹腔注射麻醉大鼠，腹主动脉取血，3500 r/min离心10 min取血清，待测。

    1．2．2  血清生化指标的检测

    血清ALT、AST、ALP活性的检测按试剂盒要求采用YS－2000 III半自动生化分析仪进行测定，检测方法为连续监测法，温度37 ℃；血清MDA浓度及总SOD活性的检测按试剂盒要求，采用723-可见分光光度计进行测定，检测方法分别为TBA（thibabituric acid，硫代巴比妥酸）法和羟胺法。

    1．2．3数据统计

    实验数据均采用均数±标准差（±s）表示。各组间均数比较采用单因素方差分析，组间比较采用t检验。所有统计均用SPSS11.5统计软件分析。

    2  结果

    见表1。

    表1三叶青水煎液对肝损伤大鼠血清ALT、AST 、ALP、MDA及SOD的影响由表1可以看出，正常对照组ALT、AST、ALP及MDA水平最低，SOD活性最高；模型对照组则相反，两组各指标比较具有非常显著性差异（P<0.01），表明急性肝损伤模型复制成功。与模型组比较，三个组ALT、AST、ALP及MDA水平均显著降低（P<0.05或P<0.01），SOD活性显著升高（P<0.05或P<0.01）。与阳性对照组比较，三叶青高剂量组AST、ALP、MDA水平降低显著（P<0.05）。实验结果表明，三叶青有降低肝损伤大鼠血清酶ALT、AST、ALP及脂质过氧化产物MDA水平的作用，同时有提高抗过氧化酶SOD活性的功能；三叶青高剂量保护肝损伤的效果强于联苯双酯。

    3  讨论

    CCl4肝损伤模型现已广泛用于护肝药物的筛选和机理研究，其机制为: CCl4在肝内经微粒体细胞色素P450分解活化,形成三氯甲基自由基(CCl3・)和氯自由基(Cl・),导致肝微粒体的脂质过氧化。由于脂质过氧化反应增强而抗氧化能力下降,导致自由基生成增加,通过氧化细胞膜脂质,使肝细胞结构和功能受到损害[8]。据此，本项实验选择检测ALT、AST、ALP、MDA及SOD[6] 来探讨三叶青护肝作用的药理机制。

    研究表明，黄酮类化合物对CCl4和半乳糖胺诱导的肝脏毒性具有保护作用[9]，同时还具有显著的抗氧化作用[10]。三叶青由于含有多种黄酮类化合物，并且其所含的黄酮类化合物槲皮素等含有抗脂质过氧化作用的酚羟基基团[11]，推测其护肝的主要有效成分可能即为该类黄酮类物质。三叶青能明显降低肝损伤大鼠血清脂质过氧化产物MDA的含量，为其护肝的分子机制的研究提供了启示：一方面可能由于所含的酚羟基黄酮类化合物能直接捕捉、清除自由基,生成自由基中间体,阻断或终止自由基连锁反应链,从而阻止或抑制氧自由基反应和脂质过氧化反应,最终抑制MDA的生成；另一方面通过提高抗氧化剂SOD的活性来降低MDA的生成。两方面的作用共同减轻肝细胞的膜性结构的破坏，抑制炎症渗出，从而降低血清ALT、AST及ALP的活性，促进肝功能的恢复。高剂量的三叶青保护损伤肝的作用优于低剂量三叶青，提示三叶青的护肝作用在一定范围内呈剂量依赖关系。并且可能反映：三叶青的有效黄酮类化合物的抗过氧化能力存在量效关系。

    通过CCl4所致的大鼠肝损伤模型，我们初步研究了三叶青水煎液对大鼠肝损伤的保护作用。结果表明，该水煎液能明显降低CCl4所致血清ALT、AST及ALP的升高，同时能对抗CCl4所致的肝脂质过氧化作用，提高肝损伤大鼠抗氧化能力。研究结果提示，三叶青水煎液能提高肝脏的解毒能力，对肝损伤有一定的保护作用；但三叶青作为民间常用的护肝中药，对该药的研究远不如其他护肝中药，其护肝作用的药理机制还有待于进一步深入研究。

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　　[1]李瑛琦，陆文超，于治国．三叶青的化学成分研究[J] ．中草药，2003，34(11)：982-983．

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　　[3]刘东，鞠建华，林耕，等． 三叶崖爬藤中的新黄酮碳甙[J]．植物学报，2002，44(2)：227-229．

　　[4]江苏新医学院．中药大辞典(下册)[M]．上海：上海人民出版社，1977：2123．

　　[5]Cai X. L. A study of Tetrastigma hemsleyanum on liver functions of rabbit by the application of 131Irose bengal[J]. Chin. Tradit. Herb Drugs, 1980, 11(1):38-39.

　　[6]陈奇．中药药理研究方法学[M]．北京：人民卫生出版社，2000：726-727．

　　[7]徐叔云，卞如濂，陈修．药理实验方法学[M]．第3版.北京：人民卫生出版社,2001：1346．

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　　[11]Husain S. R, Cillard J, Cillard P. Hydroxy radical scavenging activity of flavonoids[J]. Phytochemistry, 1987, 26(9): 2489-2491.