小儿复感宁合剂增强机体免疫功能的实验研究

             作者：马骏，任远，石宗珂，沈玉鹏

　摘  要：目的：探讨小儿复感宁合剂对机体免疫功能的影响。方法：将50只小鼠随机分为5组，A,B组灌蒸馏水，C组予贞芪扶正胶囊，D,E组予小儿复感宁合剂。给药第8 d皮下注射环磷酰胺造模，分别观察小儿复感宁合剂对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、2,4-二硝基氯苯（DNCB）所致迟发性超敏反应、鸡红细胞（CRBC）致敏小鼠溶血素抗体生成的影响。结果：小儿复感宁合剂能增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能；增强DNCB所致迟发性超敏反应；提高小鼠血清溶血素抗体水平。结论：小儿复感宁合剂能增强环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠非特异性免疫功能和特异性免疫功能。

    关键词：小儿复感宁合剂；免疫功能；实验研究

    小儿复感宁合剂由黄芪、太子参、红枣、女贞子、玉竹等药组成，具有补肺健脾、益气固本功效。临床用于小儿反复呼吸道感染（体虚感冒）有显著疗效。为了探讨该药的治疗机制，我们从非特异性免疫功能和特异性免疫功能方面进行了实验研究。

    1  实验材料

    1.1  药品与试剂 

    小儿复感宁合剂（含原生药0.76 g/mL），甘肃省中医提供，临用前80 ℃水浴浓缩，配成体积分数为684 %和342 %备用；贞芪扶正胶囊，国药准字Z62020414，甘肃扶正药业科技股份有限公司生产，批号：040625；环磷酰胺，苏卫药准字（1996）第403501号，江苏恒瑞医药股份有限公司生产，批号：010323；Alsever’s溶液、鸡红细胞（CRBC）悬液、姬姆萨染液按[1]方法配制；氯化钠，天津市塘沽化学试剂厂；葡萄糖，上海化学试剂公司；柠檬酸钠，天津市化学试剂一厂;柠檬酸,天津市化学试剂一厂；2,4-二硝基氯苯（DNCB），北京化工厂；丙酮，天津化学试剂有限公司;甲醇，西安化学试剂厂。豚鼠血清(-20℃保存,临用时生理盐水1∶10稀释)。

    1.2  实验仪器 

    VIS7220型分光光度计(北京第二光学仪器厂)、BS110S型sartorius天平（北京赛多利斯天平有限公司）、隔水式恒温培养箱、水浴锅、冰箱、96孔微量血凝板、olympus显微镜、打孔器。

    1.3  实验动物 

    昆明小鼠，雌雄兼用，质量18～22 g，由兰州大学医学院实验动物室提供，合格证号：医动字第14-005号。

    2  实验方法

    2.1  对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响[1-2]

    小鼠50只，按体重性别随机分为A,B,C,D,E 5组，每组10只。Ａ、Ｂ组灌蒸馏水0.02 mL/g，Ｃ组灌贞芪扶正胶囊混悬液8.33 g/kg（相当临床用量20倍），Ｄ组灌小儿复感宁合剂136.8 g/kg（相当临床用量20倍），Ｅ组灌小儿复感宁合剂68.4 g/kg（相当临床用量10倍）。各组每天给药1次，连续给药10 d。给药第8 d起除Ａ组外，其他各组均皮下注射环磷酰胺40 mg/(kg・d)[1]，共3次。末次给药后第2 d，各组小鼠腹腔注射5 ％CRBC悬液0.4 mL／只。8 h后将小鼠断颈处死，仰位固定于鼠板上，腹部消毒，剪开皮肤，腹腔注射生理盐水2.5 mL，轻揉小鼠腹部后，抽取腹腔冲洗液滴片，将载玻片放在垫有湿纱布的搪瓷盘中，置于37 ℃孵育箱中温育30 min，取出玻片，放入生理盐水中漂洗，以除去未贴片的细胞，晾干后以丙酮甲醇液（1∶1）固定5 min，用姬姆萨染液染色3 min，蒸馏水漂洗，晾干后油镜观察，每片计数200个巨噬细胞，按以下公式吞噬百分率与吞噬指数：    吞噬百分率＝吞噬CRBC的巨噬细胞数[]200个巨噬细胞×100%

    吞噬指数＝被吞噬的CRBC总数[]200个巨噬细胞

    2.2  对DNCB所致迟发性超敏反应的影响[1,3]

    小鼠50只，分组及给药剂量同前。各组每天给药1次，连续给药12 d。各组动物首次给药后即于用硫化钡脱毛的小鼠颈部皮肤上涂抹50 ％DNCB丙酮溶液2 μL／只致敏。给药第8 d起除Ａ组外，其他各组均皮下注射环磷酰胺40 mg/(kg・d)，共3次。第12 d给药后，在各组小鼠右耳两侧均匀涂抹2.5 %DNCB丙酮溶液20 μL／只进行攻击。24 h后，处死各组小鼠，用打孔器（直径７ mm）在左右耳相同部位打下耳片，以左右耳片重量差（肿胀度）表示迟发型过敏反应强度，并进行组间t检验。

    2.3  对CRBC致敏小鼠溶血素抗体生成的影响[1-2]

    小鼠50只，分组及给药剂量同前。连续给药10 d。给药第4 d，各组小鼠腹腔注射5 ％CRBC悬液0.2 mL／只进行免疫。给药第8 d起除Ａ组外，其他各组均皮下注射环磷酰胺40 mg/(kg・d)，共3次。末次给药后第2 d，各鼠股动脉取血于离心管中，室温下放置1 h后2000 r/min离心。取血清用生理盐水稀释100倍，取稀释血清1 mL，与5 ％CRBC悬液0.5 mL、10 ％补体(豚鼠血清)0.5 mL混合，在37 ℃恒温箱中保温30 min后，0 ℃冰箱终止反应。离心，取上清液于分光光度计540 nm处比色，另用生理盐水代替血清做空白对照，取其上清液作为比色时调零的基准。以光密度（OD）值作为判定血清溶血素的指标，并进行组间t检验。

    3  实验结果

    3.1  对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

    实验结果表明，小儿复感宁合剂对环磷酰胺引起的免疫功能低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能有明显促进作用。D组和E组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数明显上升，与B组比较，有显著性差异(P<0.05或P＜0.01）。结果见表１。

    3.2  对DNCB所致小鼠迟发性超敏反应的影响

    实验结果表明，小儿复感宁合剂能促进DNCB所致小鼠迟发型超敏反应，与B组比较，差异非常显著(P<0.01)。结果见表2。 表1  对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响注：与B组比较*P<0.05，**P<0.01表2  对DNCB所致小鼠迟发型超敏反应的影响注：与B组比较*P<0.01

    3.3  对CRBC致敏小鼠血清溶血素抗体生成的影响

    实验结果表明，小儿复感宁合剂对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠血清溶血素抗体生成有明显促进作用。D,E组与B组比较差异显著（P<0.05或P<0.01)。结果见表3。表3  对CRBC致敏小鼠血清溶血素抗体的影响注：与B组比较*P<0.05,**P<0.01

    4  讨论

    《内经》曰：“正气存内，邪不可干，邪之所凑，其气必虚。”中医认为反复呼吸道感染多为肺卫不足，不能抵御外邪入侵所至。医学也认为反复呼吸道感染与机体的免疫功能低下有密切关系，也可引起继发性免疫功能下降。小儿复感宁合剂中君药黄芪，能补气升阳，益卫固表，是表虚证的要药，与太子参、红枣同用，能增强补肺健脾、益气固本功效。再配伍玉竹、女贞子清虚热，滋阴润燥，兼治燥热咳嗽、口干舌燥之证。本研究结果表明，小儿复感宁合剂能够提高机体非特异性免疫功能和特异性免疫功能，为其临床治疗小儿因体虚所致的反复呼吸道感染提供了药基础。

　　:

　　[1]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社，1993:315-317，747，750.

　　[2]李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海:上海科技出版社，1991:158，160.

　　[3]李琳，丁安伟，孟丽.女贞子多糖的免疫调节作用[J].中药药理与临床，2001，17(2):11.