气相色谱法测定双灵油中水杨酸甲酯的含量

【摘要】  目的 建立测定双灵油制剂中水杨酸甲酯含量的方法。方法 采用气相色谱法内标法，色谱柱：聚乙二醇（PEG）?20 M填充柱（涂布质量浓度为10%）；内标物：联苯；检测器：FID检测器，柱温：160 ℃；进样器温度：190 ℃；检测器温度：190 ℃。结果 水杨酸甲酯在0.5～50 mg/mL质量浓度范围内线性关系良好；平均回收率为101.1%，RSD为0.51%(n=6)。结论 本方法简便、准确，可用于双灵油制剂中水杨酸甲酯含量测定。

【关键词】  气相色谱法；双灵油；水杨酸甲酯

　　Analysis of methyl salicylate in Shuangling oil by gas chromatography

　　GUO Huan?juan，ZHONG Ying, ZHANG Yu?chan

　　（Jiangmen Hengjian Pharmaceutical Co., Ltd.，Jiangmen 529040，China; Institute for Drug Control of Jiangmen, Jiangmen 529030, China） 

　　Abstract:Objective To establish a method for determining the content of  methyl salicylate in Shuangling oil. Method  Gas chromatography was used to analyze the sample by using 10% PEG?20 M column. Biphenyl was used as the  internal standard. The detector was FID. Column temperature was 160 ℃ and detector temperature 190 ℃. Result A good linearity was obtained over the range of 0.5～50 mg/mL (r=0.9999). The average recovery was 101.1% with RSD 0.51% (n=6)。  Conclusion The method is accurate and sample, which could be used for measuring the content of methyl salicylate in Shuangling oil.

　　Key words:gas chromatography; Shuangling oil; methyl salicylate

　　双灵油收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十四册中，主要由薄荷脑、桉油、水杨酸甲酯、樟脑组成，具有祛风止痒作用［1］。该标准采用紫外分光光度法进行鉴别,没有含量测定要求。蔡大可［2］等采用外标法测定制剂中薄荷脑的含量，此法比较直观，简单，容易掌握，但它对进样技术要求较高。
   
　　本实验建立气相色谱法的内标法测定双灵油制剂中水杨酸甲酯含量。本方法简便，准确可靠，可作为该制剂的含量测定方法。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器
   
　　GC?14C气相色谱仪，FID检测器(日本岛津公司)；200?SPH氢气发生器（北京中惠普分析技术研究所），SPB?3全自动空气源（北京中惠普分析技术研究所），载气为纯度≥99.999％的高纯度氮气；SrAdv色谱数据工作站。

　　1.2  对照品与试药
   
　　水杨酸甲酯对照品（由药品生物制品检定所提供，批号：110707-200508）；联苯（国药集团化学试剂有限公司，化学纯）；醋酸乙酯(广州化学试剂厂，分析纯)。

　　1.3  样品
   
　　双灵油:江门市恒健药业有限公司提供，批号：060301、060302、060401、060402、060403。

　　1.4  阴性对照样品
  
　　取处方组成中除水杨酸甲酯以外的其余成分，按双灵油的生产工艺及供试品溶液的制备方法制备，即得。

　　2  方法与结果
　　
　　2.1  色谱条件
   
　　色谱柱是以聚乙二醇（PEG）?20 M为固定相，涂布质量浓度为10%的GC填充玻璃柱，柱长2 m；柱温为160 ℃，进样器温度为190 ℃，检测器温度为190 ℃；氮气压力、空气压力、氢气压力均为60 kPa；进样量为1 μL；检测器为FID检测器。在该色谱条件下，薄荷脑、水杨酸甲酯、樟脑、桉油精及内标联苯5种成分可达基线分离，理论塔板数按水杨酸甲酯峰大于3 000。色谱图见图1。

　　A.溶剂（醋酸乙酯）  B.对照品  C.阴性对照  D.供试品

　　图1  气相色谱图（略）

　　Fig.1  Gas chromatograms

　　2.2  标准曲线的绘制
    　　
　　精密称取水杨酸甲酯5份(分别为0.025 1、0.125 3、0.250 5、1.252 6、2.505 2 g)置50 mL量瓶中，精密加入内标溶液(联苯醋酸乙酯溶液30.00 mg/mL)5 mL，加醋酸乙酯至刻度，得0.502、2.506、5.010、25.052、50.104 mg/mL的系列标准溶液。各精密量取1 μL进样，以水杨酸甲酯质量浓度(ρ)为横坐标，水杨酸甲酯峰面积/内标物面积(A)为纵坐标作图，绘制标准曲线，其回归方程为：A=0.179 2ρ-0.021 8,r=0.999 9(n=5)。结果表明水杨酸甲酯在0.5～50 mg/mL质量浓度范围内线性关系良好。

　　2.3  重复性试验
    　　
　　取同一批双灵油(批号060301)分别制备6份供试品溶液，测定含量，分别为20.44%、20.67%、20.56%、20.67%、20.56%、20.64%，平均含量为20.59%，RSD=0.43%（n=6）。

　　2.4  稳定性试验
    　　
　　取重复性试验下的供试品溶液，每隔1 h测定1次含量，共测8次，结果测得RSD值为0.68%，表明供试品溶液中的水杨酸甲酯在8 h内稳定。

　　2.5  回收率试验
    　　
　　取同一批双灵油(批号060301)约0.75 g,各6份，分别置50 mL量瓶中，加入水杨酸甲酯对照品0.15 g，精密加入内标溶液5 mL，加醋酸乙酯溶解并稀释至刻度按含量测定方法测定，回收率为101.1%,RSD为0.51%（n=6）。见表1。

　　2.6  含量测定
   
　　取5批双灵油各约1.2 g,精密称定，分别置50 mL量瓶中，精密加入内标溶液5 mL，加醋酸乙酯溶解并稀释至刻度为供试品溶液。取水杨酸甲酯对照品约0.25 g，精密称定，同法操作制得对照品溶液。各精密量取1 μL进样，按内标法计算其含量，分别为20.60%、20.30%、20.88%、20.64%、20.67%。

　　表1  水杨酸甲酯加样回收率试验结果（略）
 
　　Tab.1  Recovery test of methyl salicylate

　　3  讨论

　　3.1  本实验建立的气相色谱内标法对进样量没有严格要求，但内标物较难选择，经过筛选，联苯、萘、环己烷为内标，内标与制剂中各组分的分离度均达到国家标准要求［3］，但联苯与制剂中各组分的分离度最好，所以选择联苯作为内标。本文所建立的色谱条件也可对该制剂中的薄荷脑、桉油、水杨酸甲酯、樟脑进行定性鉴别，方法简便，准确可靠。

　　3.2  溶剂在该含量测定中只起稀释作用，并无提取作用，所以主要考察溶剂对水杨酸甲酯与联苯的溶解与出峰影响。分别考察醋酸乙酯、三氯甲烷和乙醚3种溶剂，结果3种溶剂对所测成分与内标物都有良好的溶解性，并且对出峰时间以及峰形都没有影响。考虑到三氯甲烷为毒性溶剂，乙醚的挥发性过大，所以选择醋酸乙酯作为溶剂。

【】
  　　［1］ 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂：第14册［S］.北京：化学出版社，1997:24.

　　［2］ 蔡大可，李耿，胡军影，等.双灵油的质量标准研究［J］.时珍国医国药，2007,18(2):451-452.国家药典委员会.中华人民共和国药典：2005版一部［S］.北京：化学工业出版社，2005.

　　［4］ 李玮玲，邱娟.HPLC法测定复方水杨酸甲酯搽剂的含量［J］.广东药学院学报，2007，23（5）：533-535.